趨化因子CXC配體13、雙特異性酪氨酸磷酸化調節激酶1b蛋白陽性表達與宮頸癌患者相關病理學參數的關聯性探究

胡 淇

湖南省寧鄉市人民醫院病理科 410600

宮頸癌屬女性生殖系統常見惡性腫瘤，侵襲性較強，易發生遠處轉移，早期診斷及治療對患者預后改善具有重要意義。病理學研究表明，宮頸癌均由人乳頭狀瘤病毒(HPV)感染引起，但僅少數HPV最終可發展至宮頸癌，提示致癌還需其他因子共同參與，探尋宮頸癌發生發展相關生物學標志物仍是目前臨床研究的重點課題[1]。趨化因子CXC配體13(CXCL13)與胃癌、結、直腸癌等多種惡性腫瘤的發生發展有關，具有調節腫瘤細胞浸潤、促血管生成等作用[2]。雙特異性酪氨酸磷酸化調節激酶1b(Dyrk1b)在肺癌、卵巢癌、胰腺癌等多種惡性腫瘤組織中均呈高表達狀態，在細胞周期及細胞凋亡過程中均發揮重要作用[3]。為探究上述兩種生物學標志物與宮頸癌發生及發展的關系，本文將我院63例宮頸癌患者作為觀察對象，分析CXCL13、Dyrk1b蛋白陽性表達與相關病理學參數關聯性。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年1月—2020年3月我院宮頸癌患者63例，其中年齡38～67歲，平均年齡(49.63±5.81)歲。均行宮頸癌根治術治療，術中取患者癌組織及癌旁正常宮頸組織標本(距癌變病灶邊緣1.5～2.0cm，術后經組織病理學檢查確認未發生癌變)。

1.2 納入及排除標準 (1)納入標準：均經術后組織病理學檢查確診為宮頸癌；術前無放療、化療、免疫、內分泌相關治療史；均知情本研究并簽署同意書。(2)排除標準：合并其他惡性腫瘤；妊娠、哺乳期女性；所取組織標本無法正常行免疫組化檢查。

1.3 方法

1.3.1 組織標本CXCL13、Dyrk1b蛋白表達檢測：將手術切除的組織標本采用10%甲醇固定48h，石蠟包埋，以4μm厚度連續切片，經烤片、室溫脫蠟、水化后，采用檸檬酸鹽液實施熱抗原修復，時間為2min，后采用PBS液反復沖洗3次，每次時間為5min，再于室溫下采用3%過氧化氫水浴10min，再以PBS液反復沖洗3次，每次時間為5min，加入50μl非免疫山羊血清(上海哈靈生物科技有限公司)封閉抗原，于37℃溫度下孵育15min后，去除山羊血清，加入鼠抗人CXCL13單克隆抗體(上海酶研生物科技有限公司，1∶50)及兔抗人Dyrk1b(武漢博士德生物工程有限公司，1∶100)單克隆抗體，室溫下孵育1h，以PBS液沖洗，室溫下水浴15min后，DAB顯色，顯色時間為4～5min，沖洗后采用蘇木精復染細胞核，梯度乙醇脫水，中性樹膠封片固定。

1.3.2 陽性表達判定標準：每張切片于高倍鏡下取5個視野，均實施染色程度評分及陽性細胞(細胞核或細胞質中出現淡黃色、棕黃色或棕褐色的細胞)百分比評分，兩項評分相加≥4分即為蛋白陽性表達。(1)染色程度評分：無染色記0分，淡黃色(輕度染色)記1分，棕黃色(中度染色)記2分，棕褐色(重度染色)記3分。(2)陽性細胞百分比評分：≤5%記0分，>5%～25%記1分，>25%～75%記2分，>75%為記3分。

1.4 觀察指標 (1)癌組織、癌旁正常宮頸組織中CXCL13、Dyrk1b蛋白陽性表達率。(2)不同病理學參數(病灶直徑、腫瘤類型、分化程度、FIGO分期、淋巴結轉移、肌層浸潤深度)癌組織CXCL13、Dyrk1b蛋白陽性表達情況。(3)CXCL13、Dyrk1b蛋白陽性表達與相關病理學參數關聯性。

1.5 統計學方法 通過SPSS22.0軟件進行數據處理，計數資料以[n(%)]表示，行χ2檢驗，采用Spearman分析法進行相關性分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同組織標本CXCL13、Dyrk1b蛋白陽性表達率 癌組織CXCL13蛋白陽性表達率為65.08%(41/63)，Dyrk1b蛋白陽性表達率為80.95%(51/63)，均高于癌旁正常宮頸組織的0.00%(0/63)、14.29%(9/63)(χ21=60.777，P1<0.001；χ22=56.127，P2<0.001)。

2.2 不同病理學參數癌組織CXCL13、Dyrk1b蛋白陽性表達情況 不同病灶直徑、分化程度、FIGO分期、淋巴結轉移、肌層浸潤深度癌組織CXCL13、Dyrk1b蛋白陽性表達均有明顯差異(P<0.05)，不同腫瘤類型癌組織CXCL13、Dyrk1b蛋白陽性表達比較差異均無統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 不同病理學參數癌組織CXCL13、Dyrk1b蛋白陽性表達情況[n(%)]

2.3 關聯性分析 經Spearman分析得知，CXCL13、Dyrk1b蛋白陽性表達與病灶直徑、FIGO分期、淋巴結轉移、肌層浸潤深度呈正相關，與分化程度呈負相關(P<0.05)，見表2。

表2 關聯性分析

3 討論

既往臨床研究表明，趨化因子、信號傳導因子、轉錄因子等共同參與惡性腫瘤發生發展及浸潤轉移，探尋宮頸癌發生發展相關因子對病情進展評估及預測預后均有重要意義[4]。

CXCL13屬趨化因子家族細胞因子，又稱B細胞趨化因子，具有調控炎癥細胞浸潤、抑制腫瘤細胞凋亡、促進血管新生及腫瘤細胞轉移等作用，是誘發惡性腫瘤發生發展的重要因子[5]。相關研究指出，CX CL13抑制劑可有效作用于CXCR5/ERK信號通路，進而縮小腫瘤體積，由此分析CX CL13可通過活化相關信號通路促進腫瘤組織生長[6]。本研究結果顯示，CXCL13在宮頸癌組織中呈高表達狀態，且其陽性表達與腫瘤直徑、FIGO分期、腫瘤分化程度等多種病理學參數均呈明顯相關性，由此可見CXCL13在宮頸癌惡性進展中具有重要調控作用，可能與其促新生血管生成、促腫瘤細胞增殖活化的作用相關。

Dyrk1b蛋白屬絲氨酸/蘇氨酸激酶，在正常組織中一般不表達，但在多種惡性腫瘤中均呈過度表達[7]。相關臨床研究表明，Dyrk1b抑制劑可有效抑制宮頸癌細胞增殖及侵襲，具有誘導癌細胞凋亡作用，且敲除Dyrk1b基因后，癌細胞增殖分化相關蛋白的結構及化學性質可發生改變，因此認為，Dyrk1b蛋白可調控癌細胞增殖分化相關蛋白表達，進而促進癌細胞增殖與分化[8]。本文結果中，宮頸癌組織Dyrk1b蛋白陽性表達率明顯高于癌旁正常組織，且其陽性表達可隨腫瘤增長、淋巴結轉移、浸潤深度增加而升高，說明Dyrk1b蛋白可參與宮頸癌的發生及發展，可能與其促癌細胞增殖、穩定蛋白結構等作用相關。

綜上可知，與癌旁正常組織比較，宮頸癌組織中CXCL13、Dyrk1b蛋白陽性表達率較高，且其陽性表達與相關病理學參數呈明顯相關性，均是宮頸癌惡性進展中的重要因子。