兩種初加工方法當歸飲片中不同提取成分的指紋圖譜分析*

李冬華，張 平，張明童，楊 靜，馬 瀟，宋平順，楊平榮

1 甘肅省藥品檢驗研究院，甘肅 蘭州730070；2 國家藥品監督管理局中藥材及飲片質量控制重點實驗室

隨著中藥材種植規范化在甘肅的大力推廣，初加工方法也開始受到重視?？販乜貪窀稍锓?，即分階段，機械化控制溫度與濕度，最終達到對某種中藥材快速干燥，易于貯藏，方便炮制，且不添加任何有害化學物質的現代化加工方法［1-5］。特征指紋圖譜是指某種藥材中所共有的、具有特異性的某類或數類成分的色譜或光譜的譜圖，目前已成為控制中藥或天然藥物質量的有效手段［6-7］。本實驗考察了兩種初加工方法所生產的當歸飲片中揮發油成分、醇提取成分以及水提取成分的指紋圖譜，兼顧了當歸的親脂性、中等極性和親水性的化學成分，可以比較全面的比較不同初加工方法的當歸飲片的成分特征［8-14］。

1 儀器與試藥

1.1 儀器GC-2010 plus 型氣相色譜儀（日本島津），Waters e2695 型高效液相色譜儀（美國沃特世公司）。甲醇、甲酸、乙酸、二甲苯均為分析純（國藥集團化學試劑有限公司），乙腈（色譜純，德國默克公司），阿魏酸（批號：110773-201012）及藁本內酯（中國食品藥品檢定研究院，批號：111737-201608，批號：111737-201608）。

1.2 試藥實驗所測不同初加工方法的當歸飲片樣品，經甘肅省藥品檢驗研究院宋平順主任藥師鑒定為傘形科植物當歸Angelica sinensis（Oliv.）Diels 根的凈制切片。其初加工方法與來源見表1。

表1 不同初加工方法的當歸飲片來源

2 當歸揮發油氣相色譜指紋圖譜比較

2.1 色譜條件色譜柱：DB-5彈性石英毛細管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；載氣：氮氣，流速1 mL/min；程序升溫：初始溫度60℃，以3℃/min升至250℃，保持16 min；進樣口溫度230℃；氫火焰（FID）檢測器，溫度260℃，分流比為1∶50，進樣量：1 μL。

2.2 對照品溶液的制備取藁本內酯對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含4 mg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備按2015 年版《中華人民共和國藥典》中揮發油提取方法［15］，取當歸飲片粉末50 克置于圓底燒瓶中，加水300 mL，加數片沸石，連接揮發油測定器，自測定器上端入口處加適量水，精密加1 mL二甲苯，連接冷凝管，蒸餾8 h，停止加熱，冷卻半小時后收集油層，0.45 μm 濾膜過濾，取續濾液，即得當歸揮發油供試品溶液。

2.4 精密度考察取同一批當歸飲片揮發油供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件，連續進樣6 次，記錄色譜圖。結果指紋圖譜相似度的RSD：0.26%；各主要色譜峰的相對保留時間RSD 在0.00%～0.48%。表明儀器的精密度良好。

2.5 重復性考察取同一批當歸飲片6 份，制備揮發油供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣，記錄色譜圖。結果指紋圖譜相似度的RSD：0.66%；各主要色譜峰的相對保留時間RSD 在0.00%～1.03%。表明該分析方法的重復性良好。

2.6 穩定性考察取同一批當歸飲片揮發油供試品溶液，按2.1項下色譜條件，分別于0、2、4、8、12 和24 h 進樣，記錄色譜圖。結果指紋圖譜相似度的RSD：1.15%；各主要色譜峰的相對保留時間RSD 在0.00%～1.15%。表明供試品溶液在24 h 內穩定性良好。

2.7 當歸飲片揮發油指紋圖譜的建立及比較分別精密吸取各供試品溶液1 μL，進樣分析，得到指紋圖譜并統一處理，導出cdf 文件，用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統軟件，進行圖形匹配及數據匹配，建立供試品指紋圖譜，計算相似度并比較，見圖1—2。16 批次供試品相似度在0.986～1.000 之間，比較傳統煙熏干燥法的供試品1～8所生成的對照圖譜與現代控溫控濕干燥法的供試品9～16 所生成的對照圖譜，二者相似度為0.998。表明兩種初加工方法所生產的當歸飲片中揮發油成分相似度高，明顯差別。見表2—3。

圖1 不同初加工方法的當歸飲片揮發油氣相指紋圖譜

圖2 不同初加工方法的當歸飲片揮發油氣相指紋圖譜比較

表2 不同初加工方法的當歸飲片揮發油氣相指紋圖譜相似度

表3 不同初加工方法的當歸飲片揮發油氣相指紋圖譜相似度比較

3 當歸飲片甲醇提取成分液相色譜指紋圖譜比較

3.1 色譜條件C18色譜柱（4.6 mm×250 mm×5 μm）；流動相：乙腈（A）-1%乙酸水溶液（B）梯度洗脫；流速1.0 mL/min；柱溫25℃；檢測波長280 nm；進樣量10 μL，見表4。

表4 流動相梯度洗脫表

3.2 對照品溶液的制備取阿魏酸對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL 含10 μg 的溶液，即得；取藁本內酯對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含4 mg的溶液，即得。

3.3 供試品溶液的制備取當歸飲片粉末（過三號篩）約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇-甲酸（95∶5）溶液25 mL，密塞，稱定質量量，超聲處理（功率250W，頻率40 kHz）60 min，放冷，用甲醇-甲酸（95∶5）補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

3.4 精密度考察取同一批當歸飲片甲醇提取溶液，按“3.1”項下色譜條件，連續進樣6 次，記錄色譜圖。結果指紋圖譜相似度的RSD：0.32%；各主要色譜峰的相對保留時間RSD 在0.05%～0.75%。表明儀器的精密度良好。

3.5 重復性考察取同一批當歸飲片6 份，制備甲醇提取溶液，按“3.1”項下色譜條件進樣，記錄色譜圖。結果指紋圖譜相似度的RSD：0.86%；各主要色譜峰的相對保留時間RSD 在0.06%～1.35%。表明該分析方法的重復性良好。

3.6 穩定性考察取同一批當歸飲片甲醇提取溶液，按“3.1”項下色譜條件，分別于0、2、4、8、12和24 h 進樣，記錄色譜圖。結果指紋圖譜相似度的RSD：1.65%；各主要色譜峰的相對保留時間RSD在0.08%～1.55%。表明供試品溶液在24h 內穩定性良好。

3.7 當歸飲片甲醇提取成分指紋圖譜的建立及比較分別精密吸取各批供試品溶液10μL，進樣分析，得到各指紋圖譜，統一處理后，導出cdf 文件，使用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統軟件，進行圖形匹配及數據匹配后，建立供試品指紋圖譜，計算相似度，并進行比較。見圖3—4。

16 批次供試品相似度在0.921～0.998 之間，傳統煙熏干燥法的供試品1～8 所生成的對照圖譜與現代控溫控濕干燥法的供試品9～16 所生成的對照圖譜進行比較，二者相似度為0.987。均表明兩種初加工方法所生產的當歸飲片中醇溶性成分相似度高，沒有明顯差別。見表5—6。

表5 不同初加工方法的當歸飲片甲醇提取成分液相指紋圖譜相似度比較

表6 不同初加工方法的當歸飲片甲醇提取成分液相指紋圖譜相似度

圖3 不同初加工方法的當歸飲片甲醇提取成分液相指紋圖譜

圖4 不同初加工方法的當歸飲片甲醇提取成分液相指紋圖譜比較

4 當歸飲片水提取成分液相色譜指紋圖譜比較

4.1 色譜條件與“3.1”項下色譜條件一致。見表4。

4.2 對照品溶液的制備與“3.2”項下對照品溶液的制備一致。

4.3 供試品溶液的制備取當歸飲片粉末（過三號篩）約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入水-甲酸（95∶5）溶液25 mL，密塞，稱定質量，煮沸并保持微沸60 min，放冷，用水-甲酸（95∶5）補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

4.4 精密度考察取同一批當歸飲片水提取溶液，按“3.1”項下色譜條件，連續進樣6 次，記錄色譜圖。結果指紋圖譜相似度的RSD：0.43%；各主要色譜峰的相對保留時間RSD 在0.05%～0.88%。表明儀器的精密度良好。

4.5 重復性考察取同一批當歸飲片6 份，制備水提取溶液，按“3.1”項下色譜條件進樣，記錄色譜圖。結果指紋圖譜相似度的RSD：0.82%；各主要色譜峰的相對保留時間RSD 在0.06%～1.69%。表明該分析方法的重復性良好。

4.6 穩定性考察取同一批當歸飲片水提取溶液，按“3.1”項下色譜條件，分別于0、2、4、8、12 和24 min 進樣，記錄色譜圖。結果指紋圖譜相似度的RSD：1.22%；各主要色譜峰的相對保留時間RSD在0.08%～1.68%。表明供試品溶液在24 h 內穩定性良好。

4.7 當歸飲片水提取成分指紋圖譜的建立及比較分別精密吸取各批供試品溶液10 μL，進樣分析，得到各指紋圖譜，統一處理后，導出cdf 文件，使用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統軟件，進行圖形匹配及數據匹配后，建立供試品指紋圖譜，計算相似度，并進行比較。見圖5—6。

16 批次供試品相似度在0.717～0.995 之間，表明個別供試品之間水溶性成分存在一定的差異，但傳統煙熏干燥法的供試品1～8 所生成的對照圖譜與現代控溫控濕干燥法的供試品9～16 所生成的對照圖譜進行比較，二者相似度為0.936，表明兩種初加工方法所生產的當歸飲片中水溶性成分較為相似，沒有明顯差別。見表7—8。

圖5 不同初加工方法的當歸飲片水提取成分液相指紋圖譜

圖6 不同初加工方法的當歸飲片水提取成分液相指紋圖譜比較

表7 不同初加工方法的當歸飲片水提取成分液相指紋圖譜相似度

表8 不同初加工方法的當歸飲片水提取成分液相指紋圖譜相似度比較

5 小結

本實驗以阿魏酸對照品和藁本內酯對照品作為參照物，利用國家藥典委員會頒布的“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統”軟件進行分析，對兩種初加工方法，即傳統煙熏干燥法和現代控溫控濕干燥法，所生產的當歸飲片中揮發油成分、醇溶性成分和水溶性成分進行了指紋圖譜的比較，其相似度分別為0.998、0.987、0.936，表明兩種初加工方法所生產的當歸飲片整體化學特征較為近似，所含成分沒有明顯差別，不會影響其質量和功效。考慮到環境保護和現代規模化生產模式，應該提倡現代控溫控濕干燥法作為新型初加工方法，并加以推廣。