實(shí)時(shí)直接分析質(zhì)譜法快速鑒別大果飛蛾藤藥材*

陳志永，楊媛媛，崔小敏，胡 靜，任 慧△

1 陜西省中醫(yī)藥研究院，陜西 西安710003；2 西安市食品藥品檢驗(yàn)所

大果飛蛾藤Porana sinensisHemsl.為旋花科Convolvulaceae飛蛾藤屬porana植物，廣泛分布于廣東、廣西、湖南、湖北等地［1-2］。丁公藤Erycibe obtusifoliaBenth.為廣東、廣西地區(qū)傳統(tǒng)民間用藥，具有祛風(fēng)勝濕、消腫止痛的功效［3-5］。近年來(lái)，由于臨床用藥需求的增加，加之生態(tài)環(huán)境惡化，丁公藤藥材已不能滿(mǎn)足人們的臨床用藥需求［6-7］。通過(guò)對(duì)丁公藤藥材主產(chǎn)地廣西、浙江、江蘇、安徽等地的商品藥材進(jìn)行調(diào)查發(fā)現(xiàn)，大果飛蛾藤已經(jīng)成為丁公藤藥材的主流替代品［7］。但目前關(guān)于大果飛蛾藤的研究報(bào)道依然較少，開(kāi)展大果飛蛾藤的質(zhì)量控制研究，對(duì)滿(mǎn)足患者臨床用藥需求，保障瀕危稀缺中藥材丁公藤資源的可持續(xù)利用意義重大。

實(shí)時(shí)直接分析離子源（direct analysis in real time ionization source，DART）是一種直接離子化設(shè)備，其操作簡(jiǎn)單，用毛細(xì)管蘸取樣品液即可實(shí)現(xiàn)樣品檢測(cè)，簡(jiǎn)化了分離流程，近年來(lái)在中藥質(zhì)量控制領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用［8-9］。本課題組在前期研究中，建立了秦皮、前胡、獨(dú)活、補(bǔ)骨脂、白芷應(yīng)用實(shí)時(shí)直接分析質(zhì)譜的快速鑒別方法，并探討了不同類(lèi)型香豆素在實(shí)時(shí)直接分析質(zhì)譜中的裂解規(guī)律，所建立的鑒別方法簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確、綠色［10］。秦建平等［11］建立了應(yīng)用DART/QTOF-MS 鑒定龍血竭中多種酚酸類(lèi)成分的方法，該方法能夠?qū)崿F(xiàn)龍血竭藥材質(zhì)量的快速評(píng)價(jià)。本研究首次建立了大果飛蛾藤藥材基于DART-MS 的快速鑒別方法，該方法試劑耗費(fèi)少，樣品檢測(cè)周期短，具有較好的應(yīng)用前景。

1 儀器與試藥

質(zhì)譜分析由DART 離子源（美國(guó)IonSense 公司）和Finnigan Surveyor LCQ DECA XPplus 離子肼質(zhì)譜（美國(guó)賽默飛公司）完成，信息采集通過(guò)Xcalibar1.3 軟件進(jìn)行。東莨菪素（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110768-200504），綠原酸（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110753-200413），甲醇為分析純。3 批次大果飛蛾藤經(jīng)陜西省中醫(yī)藥研究院鑒定，均為正品，標(biāo)本存放于陜西省中醫(yī)藥研究院中藥研究所，藥材批號(hào)、收集地、收集時(shí)間見(jiàn)表1。

表1 大果飛蛾藤藥材信息

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品制備精密稱(chēng)取不同批次大果飛蛾藤樣品粉末0.5 g，加甲醇25 mL，加熱回流提取0.5 h，放冷，濾過(guò)，濾液濃縮至干，加甲醇定容至1 mL，即得供試品溶液。取東莨菪素、綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品，分別加甲醇制成1 mg/mL 的對(duì)照品溶液。DART 定性鑒別采用熔點(diǎn)管蘸取供試品溶液進(jìn)行檢測(cè)。

2.2 儀器條件DART 參數(shù)：東莨菪素檢測(cè)模式為正離子模式，綠原酸檢測(cè)模式為負(fù)離子模式。離子化氣體為氦氣，放電針電壓為4.0 kV，格柵電壓+350 V/-200 V，載氣溫度300℃。質(zhì)譜參數(shù)：毛細(xì)管溫度300℃，輔助氣（N2）流速：15 A.U.，毛細(xì)管電壓15.0 V，鞘氣流速30.0 A.U.，噴霧電壓5.0 kV，相對(duì)碰撞能30.0%。

2.3 對(duì)照品的DART-MS和DART-MS/MS分析《中華人民共和國(guó)藥典》（2015 年版）丁公藤質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)薄層色譜鑒別項(xiàng)下以東莨菪素為鑒別成分。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)大果飛蛾藤中富含東莨菪素和綠原酸類(lèi)成分。基于東莨菪素、綠原酸在大果飛蛾藤中含量較高，DART-MS 中響應(yīng)較好，且兩種成分具有廣泛的生理活性，因此本研究選擇東莨菪素、綠原酸為大果飛蛾藤DART-MS 鑒別指標(biāo)性成分。東莨菪素在正離子離子模式下主要檢測(cè)到［M+H］+m/z193 的分子離子。在其二級(jí)質(zhì)譜中觀(guān)察到m/z165［M+H-CO］+等碎片。綠原酸在負(fù)離子模式下主要檢測(cè)到［M-H］-m/z353的分子離子，其二級(jí)質(zhì)譜中性丟失一個(gè)咖啡酸或奎尼酸分子，形成m/z191.0 和179.0 的碎片離子峰。東莨菪素和綠原酸的串聯(lián)質(zhì)譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 東莨菪素（A）和綠原酸（B）的串聯(lián)質(zhì)譜圖

2.4 載氣溫度的選擇升高載氣溫度有利于供試品去溶劑化，使更多被分析物進(jìn)入質(zhì)譜檢測(cè)器，而載氣溫度過(guò)高則會(huì)使樣品分解或碳化，加速樣品流失。本研究對(duì)載氣溫度進(jìn)行優(yōu)化，考察溫度從100℃升高到400℃，溫度間隔50℃。通過(guò)質(zhì)譜分析發(fā)現(xiàn)，信號(hào)強(qiáng)度隨著溫度升高而升高，達(dá)到最大值后，信號(hào)強(qiáng)度開(kāi)始減弱。最終本研究選擇在300℃時(shí)檢測(cè)大果飛蛾藤中東莨菪素和綠原酸。

2.5 定性檢測(cè)采用熔點(diǎn)管蘸取不同批次大果飛蛾藤供試品溶液置于氦氣流中，離子阱質(zhì)譜采集樣品信息。從不同批次供試品溶液質(zhì)譜圖中可見(jiàn)東莨菪素（［M+H］+m/z193）和綠原酸（［M-H］-m/z353）的分子離子峰。利用串聯(lián)質(zhì)譜對(duì)東莨菪素和綠原酸的分子離子進(jìn)行確認(rèn)，增強(qiáng)了大果飛蛾藤DARTMS 鑒別的準(zhǔn)確性。對(duì)比不同批次大果飛蛾藤供試品溶液的質(zhì)譜圖可見(jiàn)，東莨菪素、綠原酸特征峰在供試品中均存在。研究結(jié)果表明，應(yīng)用DARTMS 技術(shù)可以對(duì)大果飛蛾藤藥材進(jìn)行快速鑒別，該方法與薄層色譜鑒別方法相比，具有實(shí)時(shí)、快速、綠色等優(yōu)點(diǎn)。見(jiàn)圖2。

圖2 不同批次大果飛蛾藤樣品在正（A、B、C）、負(fù)（D、E、F）離子模式下的DART-MS譜圖。

3 討論

本研究首次建立了大果飛蛾藤的DART-MS 鑒別方法，該方法以東莨菪素、綠原酸為鑒別指標(biāo)性成分，所建立方法快速、簡(jiǎn)單、綠色，可以實(shí)現(xiàn)大果飛蛾藤的快速鑒別。本研究有望提升大果飛蛾藤藥材質(zhì)量控制水平，推進(jìn)大果飛蛾藤作為丁公藤代用品的應(yīng)用。DAR-MS 技術(shù)用于中藥鑒定，具有原位、直接、快速、高通量等特點(diǎn)，未來(lái)在中藥質(zhì)量控制領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。