MMP-9與趨化因子受體7在乳腺癌組織中的表達及臨床意義

呂祥瑞 方卓寧 王孟麗

近年來，乳腺癌患者逐年增多，目前乳腺癌在女性惡性腫瘤中發病率居首位，對女性的身心健康的極大影響，其病死率也不容小覷[1]。基質金屬蛋白酶(MMPS)是一組鋅離子依賴性內肽酶，其中基質金屬蛋白酶-9(MMP-9)是分子量最大的1種，又叫W型膠原酶，是癌基因的1種，MMP-9在正常人體中也會表達[2]，MMP-9能夠降解基底膜及細胞外基質和促進新生血管的形成，是調控癌細胞增長的關鍵因素[3]。趨化因子受體7(chemokine receptor 7，CCR7)是CC類家族成員之一，在多種惡性腫瘤細胞中表達,基因定位于17q12～q21.2，可調節腫瘤細胞的活性，促進進展，阻礙凋亡，其高表達與淋巴結轉移也有一定關聯[4]。

本研究分別檢測MMP-9和CCR7在乳腺癌組織及正常組織中的表達情況，并探討MMP-9與CCR7的表達相關性，進一步分析二者與臨床病理表現之間的相關性，為臨床治療和預后提供參考。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選取本院2017年6月至2018年10月乳腺癌患者65例為觀察組，并選取正常乳腺組織65例作為對照組，所有標本來源都是女性，且術前未經任何放化療和抗腫瘤治療，年齡25～75歲，平均年齡(50.7±5.1)歲。根據《WHO乳腺腫瘤分類標準(2012版)》進行分級：Ⅰ級11 例，Ⅱ級36例，Ⅲ級18例。并進行免疫組化檢測雌激素受體(estrogen receptor，ER)和孕激素受體(progesterone receptor,PR)。

1.2 試劑與方法

兔抗人CCR7多克隆抗體購自北京博奧森生物技術有限公司，CCR7原位雜交試劑盒購自武漢博士德生物技術有限公司。MMP-9的檢測方法是基于Luminex技術的蛋白質全定量檢測 法,試劑盒購自密理博上海貿易有限公司。采用免疫組織化學染色對組織標本進行處理：固定，脫水，透明，浸臘，包埋，切片。注意石蠟組織厚切片，多聚賴氨酸防脫片，二甲苯脫蠟，梯度乙醇脫水。

1.3 結果判斷

觀察免疫組織化學染色切片，MMP-9陽性表現為細胞質出現黃色或棕黃色顆粒，CCR7以細胞膜和(或細胞質染成)黃色或棕黃色顆粒為陽性表達，ER、PR均以細胞核染成黃色顆粒為陽性表達。染色數量所占比例，不超過5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，超過51%為3分。再觀察染色深淺，幾乎不染色為0分，淺染為1分，中強然為2分，深強染為3分。最終根據細胞的染色強度和范圍來綜合計分，不超過3分為陰性(-)，超過4分為陽性(+)。

1.4 統計學分析

采用SPSS 17.0版軟件對所得臨床數據進行統計學處理。計數資料均采取卡方檢驗，MMP-9和CCR7表達與病理表現的相關性采用spearman等級相關以及t檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 MMP-9與CCR-7在正常乳腺組織及乳腺癌組織中的表達

65例乳腺癌組織中MMP-9表達陽性者44例，陽性率為67.7%；CCR-7表達陽性者42例，陽性率為64.6%。65例正常乳腺組織中MMP-9表達陽性者12例，陽性率為18.5%；CCR7表達陽性者11例，陽性率為16.9%。乳腺癌組織中高表達MMP-9和CCR7，見表1。

2.2 乳腺癌組織中MMP-9與CCR7表達與臨床病理特征的關系

MMP-9和CCR-7高表達均與乳腺癌臨床分期和淋巴結轉移有關，淋巴結轉移陽性組MMP-9和CCR7表達陽性率顯著高于淋巴結轉移陰性組，差異具有統計學意義(P<0.05)，與患者年齡、月經情況無相關性(P>0.05)。其中MMP-9高表達還與病理分級、ER、PR有相關性(P<0.05)，見表2。

表1 MMP-9與CCR-7在正常乳腺組織及乳腺癌組織中的表達(例，%)

表2 MMP-9與CCR7表達與乳腺癌臨床病理特征的關系/例

2.3 乳腺癌組織中MMP-9與CCR7蛋白表達的關系

經Spearman等級相關分析顯示，乳腺癌組織中MMP-9與CCR7表達呈正相關(P<0.05)，見表3。

表3 乳腺癌組織中MMP-9與CCR7表達的關系/例

3 討論

近期據研究發現，世界每年新發乳腺癌患者超過一百萬，對惡性腫瘤來說，從原位增殖到侵襲轉移是1個復雜的過程，至少有兩個以上的基因發生變化，基因不僅原有的功能喪失，突變后的基因甚至會促進腫瘤發展，若能早發現、早治療，必然能使患者的生存率提高。

基質金屬蛋白酶(MMPS)是1種可破壞體內組織屏障，并促進腫瘤細胞增殖和侵襲的1種已知因素，是1種肽鏈內切酶，目前已經發現的有23種，它能敲除致密的細胞外基質，從使腫瘤脫離原發灶[5]。腫瘤細胞以酶原的形式分泌MMP-9，MMP-9作用底物多樣化，且Ⅳ型膠原細胞是其特有功能域[6]，故具有高效降解細胞外基質、破壞基膜的作用，與腫瘤進展聯系緊密[7-8]，腫瘤細胞以酶原的形式分泌MMP-9，水解后形成膠原酶并降解基底膜，之后腫瘤細胞沿此缺口向周圍浸潤，導致腫瘤的轉移。本研究顯示，乳腺癌組織中MMP-9的陽性率為67.7%，正常乳腺組織中MMP-9，陽性率為18.5%，乳腺癌組織中MMP-9的陽性率與正常組織對比顯著升高，差異具有統計學意義(P<0.05)。且MMP-9表達率高的腫瘤具有分化差，易淋巴結轉移等特點，與乳腺癌臨床分期、病理分級、ER和PR具有相關性(P<0.05)。

趨化因子受體7(CCR7)在乳腺癌組織中陽性率為64.6%，在正常乳腺組織中陽性率為16.9%，差異具有統計學意義(P<0.05)。且CCR7蛋白的高表達與淋巴結轉移、臨床分期有關，而與年齡、月經狀況、雌激素受體、孕激素受體均無關，實驗結果說明CCR7與乳腺癌淋巴結特異性侵襲轉移關系密切。趨化因子及其受體在腫瘤侵襲和轉移中發揮重要作用，且CCR7已經被證實參與多種癌癥的侵襲和定向遷移，且在多種腫瘤細胞中高表達[9]。趨化因子通過與CCR結合從而發揮趨化調節作用[10]。CCR7能促進干細胞樣腫瘤細胞的增殖，抑制腫瘤細胞對凋亡相關蛋白的敏感性[11]。CCR7作為能夠調節腫瘤生長及轉移的重要分子，在臨床治療方面的研究也越來越深入[12]。

綜上所述，MMP-9和CCR7的陽性表達均與臨床分期、淋巴結轉移相關，差異具有統計學意義(P<0.05)，且MMP-9與CCR7聯合能更加準確、客觀的把握預后，最終達到抑制腫瘤細胞增殖，阻止癌癥轉移，提高患者生存質量的目的。