人乳腺珠蛋白基因表達和趨化因子CXCL16及CA153在乳腺癌診斷中的應用

鄧 君，郭中曉，洪 華，劉 蔚，梁 敏

(四川省醫學科學院·四川省人民醫院 a.檢驗科，b.圖書館，四川 成都 610072)

乳腺癌是乳腺腺上皮增殖失控的浸潤性腫瘤，極大危害女性身心健康，居惡性腫瘤發病率首位，占全球女性癌癥發病率24.2%[1]，對乳腺癌早期診斷的生物標志物的開發，一直是研究熱點。單一的標志物對乳腺癌診斷具有局限性，人乳腺珠蛋白(HMAM)、趨化因子CXCL16及CA153是與乳腺癌細胞增殖、發生和發展關系密切的標志物[2]，目前尚未見聯合檢測的報道。本研究測定了50例體檢女性、134例良性乳腺腫瘤、104例其他腫瘤和129例乳腺癌患者外周血HMAM、CA153和CXCL16水平，探討對乳腺癌早期診斷的臨床意義，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料2017年1月至2018年12月我院有明確病理診斷的良性乳腺腫瘤患者134例，其中75例纖維瘤和59例脂肪瘤，年齡20～78歲；乳腺癌患者129例，年齡22～77歲；其他腫瘤患者104例，其中39例卵巢癌、18例肝癌、24例肺癌和23例結腸癌，年齡25～76歲。乳腺癌組納入標準：病理學明確診斷為乳腺癌患者，術前未經治療；排除標準：影響內分泌系統和代謝的疾病；合并其他惡性腫瘤；未明確診斷的患者。同期健康體檢女性50例(對照組)，年齡20～79歲。所有研究對象均同意參加本研究并簽署知情同意書。

1.2 研究方法所有研究對象均在手術前空腹采血，HMAM檢測需1 mg/ml EDTA抗凝。

1.2.1總RNA提取及逆轉錄PCR 淋巴細胞分離液-Trizo提取試劑盒分離提取外周血總RNA，逆轉錄PCR法合成第一鏈cDNA，42 ℃反應55 min。-80 ℃凍存備用。

1.2.2實時熒光定量PCR PCR試劑盒由美國R&D生物公司提供，美國Applied Biosystems 7500 快速熒光定量分析儀。HMAM的引物和探針由達安基因生物公司合成。反應體系：模板2 μl，TaqTM(2x) 10 μl，PCR 上下游寡聚核苷酸引物(10 μmol/L)各2 μl，去RNA酶水4 μl，UNG 0.5U，dGTP，dATP和dCTP 各200 μmol/L，dUTP 400 μmol/L，反應條件：95 ℃預變性2 min；94 ℃變性30 s，60 ℃退火延伸30 s，40個循環。72 ℃時熒光檢測，40 ℃ 10 s，1個循環。根據內參，用2-ΔΔCt表示目的基因HMAM mRNA，以 2-ΔΔCt>2 判斷為陽性。

1.2.3CA153的檢測 CA153試劑盒由中生生物公司提供，天津得普IMMELITE WANG化學發光儀測定。

1.2.4CXCL16的檢測 CXCL16試劑盒由上海西唐生物公司提供，美國zenith 340RT酶標儀。

1.3 統計學方法采用SPSS 17.0軟件分析數據。計量資料比較采用單因素方差分析及LSD-t檢驗；計數資料比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組CXCL16、CA153和HMAM水平比較乳腺癌組CXCL16、CA153和HMAM水平高于良性乳腺腫瘤組和對照組，HMAM和CA153高于其他腫瘤組(P<0.05)，見表1。

表1 各組CXCL16、CA153和HMAM水平比較

2.2 不同臨床分期乳腺癌患者HMAM、CA153和CXCL16水平比較Ⅲ+Ⅳ期乳腺癌患者HMAM、CA153和CXCL16水平高于I+II期乳腺癌患者(P<0.05)，見表2。

表2 不同臨床分期乳腺癌患者HMAM、CA153和CXCL16水平比較

2.3 乳腺癌患者手術前后HMAM、CA153和CXCL16水平比較乳腺癌患者HMAM、CA153和CXCL16水平在手術后均下降(P<0.05)，見表3。

表3 乳腺癌患者手術前后HMAM、CA153和CXCL16水平比較

2.4 CXCL16、HMAM和CA153對乳腺癌的診斷價值比較單一指標診斷乳腺癌，HMAM特異性最高，CXCL16靈敏度最高，三種指標聯合檢測的靈敏度高于單一指標(P<0.05)，見表4。

表4 CXCL16、HMAM和CA153對乳腺癌的診斷價值比較

3 討論

人乳腺珠蛋白的組織特異性極強，是定位于11q13乳腺癌相關基因，在乳腺癌患者的乳腺組織和外周血的表達顯著升高[3，4]，據報道，20%～80%的乳腺癌有HMAM基因過度表達，與乳腺癌的發生發展密切相關，對于HMAM mRNA表達的監測，將有助于疾病的診斷、治療和預后[5，6]。本研究也發現，HMAM在乳腺癌組的表達具有較高的特異性，其水平與臨床分期有關，且在手術后明顯下降，說明不僅可以輔助診斷乳腺癌，也是后期治療和預后的重要參考指標。

趨化因子的理論和應用研究是目前生命研究的熱門之一。CXCL16是發現的50多種趨化因子之一，在炎癥、腫瘤和AIDS等疾病中發揮著重要作用，在免疫應答方面，CXCL16通過自身作用及與表達其受體的免疫細胞結合，促進粒細胞的遷移和浸潤，對機體的防御功能和免疫損傷起著潛在作用[7～9]。在腫瘤方面，CXCL16及其受體相互作用可促進炎性細胞向病變細胞轉變，與腫瘤轉移和擴散密切相關，對不同類型腫瘤的增殖與浸潤起著關鍵性作用[10，11]。目前，針對CXCL16在乳腺癌的表達和意義的相關報道較為少見，尚未見CXCL16與HMAM和CA153對乳腺癌輔助診斷的報道。本研究發現，乳腺癌組和其他腫瘤組的CXCL16蛋白表達顯著高于對照組和良性乳腺疾病組，而乳腺癌組和其它腫瘤組之間無顯著性差異，在乳腺癌組中，CXCL16蛋白表達與臨床分期有關，且手術后明顯下降。TANG等[12]報道，CXCL16在乳腺癌的表達與正常組織存在顯著差異。湯紅平等[13]報道，CXCL16 蛋白在浸潤性乳腺癌的表達高于良性病變組織和原位癌，而且與腫瘤大小、不同臨床分期和是否淋巴結轉移相關。本研究發現，雖然CXCL16可能有助于乳腺癌早期診斷和預后監測，但卻缺乏診斷特異性，若僅使用CXCL16檢測，可能會對乳腺癌診斷造成假陽性，應結合特異性較高指標，比如HMAM等進行聯合檢測。

CA153是乳腺癌最為重要的特異性較強的標志物，有30%～50%乳腺癌患者血清中CA153會升高，轉移性乳腺癌CA153的陽性率可高達80%，其含量與療效密切相關，是國內外常用的乳腺癌輔助診斷、監測復發、微小轉移的指標[14～16]。本研究同樣發現，CA153在乳腺癌組活性最高，臨床分期級別越高，CA153活性越大，手術后下降。在三種指標中，CA153對乳腺癌診斷特異性僅次于HMAM，但敏感度較低，如果與其他乳腺癌標志物聯合檢測，可提高CA153的臨床診斷價值。

總之，在乳腺癌診斷中，單一的腫瘤標志物檢測具有一定的局限性。將特異性較強的HMAM和靈敏度較高CXCL16和CA153聯合檢測，有助于乳腺癌早期診斷，對乳腺癌預后也有一定的預測作用。