以標準湯劑指標評價三種姜汁炮制姜厚樸的質量

田 方，高 晗，孫福仁，耿彥梅，李雪利，曾永禎，李軍山，2*

(1.神威藥業集團有限公司，河北 石家莊 051430；2.楚雄神威施普瑞藥物研究有限公司，云南 楚雄 675000)

厚樸始載于漢代的《神農本草經》，作為理氣化濕藥，歷來有著廣泛的臨床應用，現有記載的中成藥配方達200多種[1]。厚樸藥材為木蘭科植物厚樸MagnoliaofficinalisRehd.et Wils.或凹葉厚樸MagnoliaofficinalisRehd.et Wils.var.bilobaRehd.et Wils.的干燥樹皮、根皮及枝皮，其味苦、辛，性溫，歸脾、胃、肺、大腸經，具有燥濕消痰、下氣除滿的功效[2]。“不以姜制，則棘人喉舌”，因此厚樸常制成姜厚樸入藥[3]。

姜厚樸的姜汁炮制方法有三種，分別為生姜榨汁、干姜煮汁、生姜煮汁，《中國藥典》采用的是生姜榨汁的方法。不同方法制得的姜厚樸質量不同，通過質量評價可為其炮制工藝提供依據。目前，姜厚樸的質量評價大多數是檢測飲片的性狀、浸出物含量、揮發性成分、色譜圖等[4-9]。近些年來鐘凌云等[3，10-11]針對姜厚樸對大鼠和小鼠胃黏膜損傷的抑制作用、抗炎鎮痛作用進行了藥理研究，從藥效方面對姜厚樸的質量進行了評價。鑒于中藥多以湯劑形式應用于臨床[12]，隨著標準湯劑概念的提出及其在中成藥物質基礎研究中的應用，筆者認為采用標準湯劑的評價指標對飲片質量進行評價較為合理。本實驗將三種姜汁炮制方法制得的姜厚樸分別制成標準湯劑，采用標準湯劑指標初步評價飲片質量，為姜厚樸的炮制工藝提供參考依據。

1 儀器與試劑

日本島津公司高效液相色譜儀(LC-20AT型泵)，真空冷凍干燥機(Tofflon)，CPA225D分析天平(Sartorius)，JM-A5002電子天平(余姚市紀銘稱重校驗設備有限公司)，水循環真空泵(上海申生科技有限公司)，DHG-9140A熱風循環鼓風干燥箱(上海精宏實驗設備有限公司、太倉精宏儀器設備有限公司)，KH3200E型超聲波清洗器(昆山禾創超聲儀器有限公司)，Shunliu-12N型冷凍干燥機(南京順流儀器有限公司)。

厚樸酚(批號111911-201603，中國食品藥品檢定研究院)，和厚樸酚(批號111809-201403，中國食品藥品檢定研究院)；色譜純甲醇(批號20180713，天津科密歐化學試劑有限公司)，分析純甲醇(批號20190228，北京益利精細化學品有限公司)。鮮姜、干姜購自于山東，厚樸藥材來自道地產區四川[8]，經原河北省藥品檢驗研究院孫寶惠主任中藥師鑒定，均為正品，且經檢測各項指標均符合2015年版《中國藥典》要求。

2 方法與結果

2.1 姜厚樸的制備

2.1.1 厚樸飲片制備 取厚樸藥材，刮去粗皮，洗凈，潤透，切成直徑為2～5 mm的絲，備用。另取部分厚樸藥材，刮去粗皮，備用。

2.1.2 姜厚樸制備 生姜榨汁：取生姜，洗凈，搗爛，加0.7倍量水，壓榨取汁，再加水適量，壓榨取汁，合并兩次汁液，使得生姜汁∶生姜=1∶1(mL/g)。取厚樸絲，加生姜汁拌勻，悶潤1 h，用文火炒干，取出晾涼。用量為厚樸絲∶生姜=100∶10，制得3批飲片。

干姜煮汁：取干姜片，洗凈，加6倍量水，煮沸后煎煮20 min，取煎液即得干姜汁。取厚樸絲，加干姜汁拌勻，悶潤至姜汁被吸盡，用文火炒干，取出晾涼。用量為厚樸絲∶干姜=100∶3.3，制得3批飲片。

生姜煮汁：取生姜，切片，加水煮湯，另取刮去粗皮的厚樸藥材，置于姜湯中，反復燒淋，并用微火加熱共煮，至姜液被吸盡時取出，切絲，干燥，制得3批飲片。

2.2 姜厚樸標準湯劑冷干樣品制備

取9批自制姜厚樸飲片，每個炮制方法取3個樣品，各稱取100 g，至陶瓷煎藥壺中，煎煮兩次，第一煎加8倍量水，浸泡30 min，煮沸，保持微沸煎煮30 min，100目篩網過濾；二煎加7倍量水，煮沸，保持微沸煎煮20 min，100目篩網過濾。合并兩次煎液，減壓濃縮至適量，冷凍干燥，即得。

2.3 姜厚樸飲片標準湯劑中厚樸酚與和厚樸酚含量測定

2.3.1 色譜條件與系統適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水(78∶22)為流動相，檢測波長為 294 nm。理論塔板數按厚樸酚色譜峰計算應不低于3 800。

2.3.2 對照品溶液制備 取厚樸酚對照品、和厚樸酚對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每 1 mL含厚樸酚 20 μg、和厚樸酚10 μg的混合溶液，即得。

2.3.3 供試品溶液制備 取本品粉末約 0.1 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇 25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率 250 W，頻率 40 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.3.4 測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各 10 μL，注入液相色譜儀測定，即得。見圖1、圖2。

圖1 對照品色譜

圖2 供試品色譜

2.3.5 方法學考察 (1)精密度考察。按照“2.3.3”項下方法制備樣品1份，按照“2.3.1”項下色譜條件平行進樣6次，結果見表1。厚樸標準湯劑中厚樸酚峰面積RSD為1.14%，和厚樸酚峰面積RSD為1.26%，表明儀器精密度良好。

表1 精密度測定結果

(2)重復性考察。按照“2.3.3”項下方法，平行制備樣品6份，按照“2.3.1”項下色譜條件進樣測定，測定結果見表2。厚樸標準湯劑中厚樸酚平均含量為0.562%，RSD為1.25%；和厚樸酚平均含量為0.367%，RSD為1.32%，表明該方法重復性良好。

表2 重復性考察結果 (%)

(3)穩定性試驗。取一份已制備好的供試品，分別于放置0、2、4、6、8、12 h后按照“2.3.1”項下色譜條件進樣測定，結果見表3。厚樸標準湯劑供試品在12 h內厚樸酚平均含量為0.569%，RSD為0.96%；和厚樸酚平均含量為0.372%，RSD為1.39%，表明供試品在12 h內較穩定。

表3 穩定性考察結果 (%)

(4)加樣回收率試驗。分別精密稱取厚樸酚對照品20 mg、和厚樸酚對照品10 mg，置于10 mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液。取本品粉末(編號YP1-2)約0.05 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入對照品儲備液150 μL，甲醇25 mL，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，分別用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，即得。實驗結果見表4。厚樸酚與和厚樸酚總量加樣回收率為97.62%～98.76%，平均回收率為98.16%，RSD為0.43%。

表4 厚樸酚、和厚樸酚準確度考察結果 (n=6)

2.4 姜厚樸飲片標準湯劑中其他指標測定

分別對標準湯劑的出膏率、pH值、浸出物含量進行測定：①理論出膏率測定：量取煎煮提取液總體積(室溫)V(mL)，攪拌均勻后精密吸取25 mL提取液至干燥至恒重的蒸發皿中，水浴蒸干后，于105 ℃干燥3 h，干燥器中冷卻后，迅速精密稱定重量m1(g)，若藥材重量為m2(g)，則理論出膏率為m1/25×V/m2×100%；②pH測定方法：參照《中國藥典》2015年版通則0631 pH值測定法；③浸出物測定：取標準湯劑凍干粉末約2.5 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入乙醇100 mL，按照醇溶性浸出物測定法(《中國藥典》2015年版 通則2201)項下的熱浸法測定。結果見表5，3組不同姜汁炮制方法制得的姜厚樸飲片含量和提取液pH無明顯差異，由生姜榨汁制得的姜厚樸標準湯劑出膏率、標準湯劑含量、含量轉移率明顯高于其他兩種。由于厚樸酚與和厚樸酚在水中的溶解度較小[13]，而姜厚樸標準湯劑為姜厚樸經水提制成，故含量轉移率較低。

表5 不同姜汁炮制方法制得姜厚樸標準湯劑測定結果

采用上述標準湯劑指標初步評價姜厚樸的飲片質量，最終選擇生姜榨汁為姜厚樸的姜汁炮制工藝，該結果與現行版《中國藥典》規定的炮制方法一致。

3 討論

研究[14-24]表明，厚樸酚及和厚樸酚是姜厚樸中抗菌、抗炎、抗腫瘤的主要活性成分，2015版《中國藥典》以厚樸酚和和厚樸酚總量為指標成分控制厚樸藥材及飲片的質量，而在厚樸相關復方中，也常以厚樸酚和和厚樸酚作為指標成分評價復方制劑的質量，因此本實驗選定厚樸酚與和厚樸酚總量作為姜厚樸標準湯劑的評價指標。

我國幅員遼闊，不同地域人群的體質差異較大，地方用藥習俗和藥材加工方法差異也較大，各地炮制方法往往并不能全面地被藥典收載進去。如何結合現代中藥研究技術考證流傳下來的何種炮制方法最為適宜，這是一項大工程。本實驗僅以姜厚樸標準湯劑指標初步評價飲片的質量，而實際上姜厚樸多是經過組方應用于臨床，由于多味中藥可能產生相互影響，單方標準湯劑指標尚不能全面評估組方標準湯劑的質量。本實驗旨在為姜厚樸的炮制工藝提供研究思路，不能代替臨床藥理研究，且選用的是道地產區四川的厚樸藥材，不同產地厚樸制得的姜厚樸標準湯劑質量如何，有待進一步研究。