羌活炮制工藝研究

饒 智，陳光宇，何 群，瞿昊宇*，謝夢洲*

(1.湖南中醫藥大學，湖南 長沙 410208；2.湖南省藥食同源功能性食品工程技術研究中心，湖南 長沙 410208；3.湖南中醫藥大學 中醫診斷研究所，湖南 長沙 410208)

羌活為傘形科植物羌活NotopterygiumincisumTing ex H.T.Chang或寬葉羌活N.franchetiiH.de Boiss.的干燥根莖和根，主要產于四川、甘肅、云南等地，在我國有數千年應用歷史，是中醫藥常用藥材，具有解表散寒、祛風除濕、止痛的功效，用于風寒感冒、頭痛項強、風濕痹痛、肩背酸痛，為歷版中國藥典收載，以飲片入藥。2015版《中國藥典》羌活飲片炮制規定：“除去雜質，洗凈，潤透，切厚片，干燥?！备鞣N版本的中藥炮制規范中羌活的炮制工藝基本上皆為凈制、軟化、切制和干燥，皆無確切和具體的工藝參數，其工藝具有變數大、欠規范、可操作性不強、批間差異大、重復性差等缺點，從而影響羌活飲片的質量。為使羌活炮制工藝科學、客觀、量化、數字化、可操作性強，故本實驗以浸出物、揮發油、羌活醇、異歐前胡素為評價指標，參照2015版《中國藥典》一部、各種炮制規范及相關文獻，對羌活進行炮制工藝參數優化研究，優選出科學、合理、穩定、可行的羌活炮制工藝參數，為工業化生產提供質量一致的羌活飲片。

1 儀器與藥材

1.1 儀器

Ultimate 3000高效液相色譜系統(賽默飛世爾科技(中國)有限公司；包括G1316A四元梯度泵、G1313A標準型自動進樣器、G1316A恒溫箱、G1314A紫外檢測器、Agilent Chemstation 色譜工作站)；中文液晶臺式超聲波清洗器(昆山美美超聲儀器有限公司)；ME204E型電子分析天平(上海梅特勒-托利多儀器有限公司)；TCS-100型電子臺秤(上海乾峰電子儀器有限公司)；PW135型中草藥粉碎機(天津泰斯特儀器有限公司)；SHH.W21電子三用水箱(北京中興偉業儀器有限公司)；QY-1中藥切片機(溫州頂歷醫療器械有限公司)；HWS-80B型恒溫恒濕培養箱(天津市意博高科實驗儀器廠)；101-0AB型電熱鼓風干燥箱(北京中興偉業儀器有限公司)。

1.2 藥材及試劑

羌活購于甘肅省隴西縣，經王智老師鑒定為傘形科植物羌活NotopterygiumincisumTing ex H.T.Chang的干燥根莖和根；羌活醇對照品(批號：111820-201705)購自中國食品藥品檢定研究院(國家藥品標準物質)，供含量測定用(羌活醇含量99.9%，ID：D9EE-H3BD)；異歐前胡素對照品(批號：B21546-20 mg，BZO，HPLC≥98%，LOT：Y1808H46133)購自上海源葉生物科技有限公司；乙腈為色譜純，水為重蒸餾水；液相色譜柱(月旭，Ultimate? XB-C18，4.6 mm×250 mm，5 μm)。

2 方法與結果

2.1 羌活浸出物測定

將羌活飲片粉碎過二號篩，取羌活飲片粉末4.000 g，精密稱定，用乙醇作溶劑，按照2015版《中國藥典》四部通則2201浸出物測定法202頁“2.醇熱浸法”測定[1]。

2.2 羌活揮發油測定

按照2015版《中國藥典》四部通則2204揮發油測定法203頁進行測定[2]，具體操作如下：將羌活飲片粉碎過二號篩，取羌活飲片粉末，精密稱定70.00 g(相當于含揮發油0.5～1.0 mL)，置2 000 mL圓底燒瓶中，加水700～1400 mL與玻璃珠5粒，振搖混合后，連接揮發油測定器與回流冷凝管。自冷凝管上端加水使充滿揮發油測定器的刻度部分，并溢流入燒瓶時為止。置電熱套中緩緩加熱至沸，并保持微沸約5 h，至測定器中油量不再增加，停止加熱，放置片刻，開啟測定器下端的活塞，將水緩緩放出，至油層上端到達刻度0線上面5 mm處為止。放置2 h，再開啟活塞使油層下降至其上端恰與刻度0線平齊，讀取揮發油量，并計算供試品中揮發油的含量(%)。

2.3 羌活醇和異歐前胡素含量測定[3]

2.3.1 色譜條件與系統適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水(44∶56)為流動相；檢測波長為310 nm。理論塔板數按羌活醇峰計算應不低于5 000。

2.3.2 羌活醇對照品溶液的制備 取羌活醇對照品約0.010 0 g，精密稱定，于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，制成每1 mL含羌活醇1.03 mg的羌活醇濃液1；精密移取1 mL羌活醇濃液1于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，制成每1 mL含羌活醇0.103 mg的羌活醇濃液2；再精密移取6 mL羌活醇濃液2于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，制成每1 mL含羌活醇61.8 μg的羌活醇對照品溶液，過0.22 μm微孔濾膜至進樣小瓶中，即得。

2.3.3 異歐前胡素對照品溶液的制備 取異歐前胡素對照品(B21546-20 mg；CAS#482-45-1；上海源葉生物科技有限公司)，精密稱定，置10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，制成每1 mL含異歐前胡素1.04 mg的異歐前胡素濃液1，精密移取1 mL異歐前胡素濃液1于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，制成每1 mL含異歐前胡素0.104 mg的異歐前胡素濃液2；再精密移取3 mL異歐前胡素濃液2于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，制成每1 mL含異歐前胡素31.2 μg的異歐前胡素對照液，過0.22 μm微孔濾膜至進樣小瓶中，即得。

2.3.4 供試品溶液的制備 取羌活飲片樣品粉末(過三號篩)約0.4 g，精密稱定，置100 mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率50 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，各取10 mL濾液置離心管中離心3 min，取上清液過0.22 μm微孔濾膜至進樣小瓶中，即得。

2.3.5 測定法 分別精密吸取對照品溶液5 μL與供試品溶液7 μL，注入液相色譜儀，測定，見圖1-圖4。

圖1 羌活醇對照品HPLC圖譜

圖2 異歐前胡素對照品HPLC圖譜

圖3 羌活飲片供試品HPLC圖譜

圖4 羌活陰性對照品HPLC圖譜(甲醇空白)

2.4 羌活原藥材前處理方法[4-5]

取羌活藥材，除去泥沙、雜草、非藥用部位和蟲蛀、霉敗品，將其放入瀝箕內，用自來水淋濕，旋轉瀝箕(模擬滾筒式洗藥機)1 min，再用自來水沖洗1 min，如此操作數次，直至洗凈為止(無肉眼可見泥沙灰塵等，約5 min)。

2.5 單因素考察悶潤工藝

2.5.1 羌活原藥材吸水實驗 稱取干燥羌活原藥材100 g，放入廣口玻璃瓶中，加水淹沒藥材，按表1時間浸泡，撈出藥材，置瀝箕內瀝至無水滴下，表面無明顯水跡，稱重，一直浸泡至藥材重量不再增加為止，記錄數據。

表1 羌活原藥材吸水實驗結果

增重=不同時間點藥材質量-0 h藥材質量；增重率(%)=不同時間點藥材質量-0 h藥材質量/0 h藥材質量×100%。摸索出泡透藥材所需時間與增重質量(即潤透藥材“內無干心、白心、硬心”所需水量，利于切片即可)。實驗表明，浸泡1 h、增重質量60%左右比較合適。

2.5.2 羌活原藥材悶潤時間考察 稱取藥材100 g，用自來水淋洗使藥材表面全部濕潤，將其放入廣口玻璃瓶中，密閉，置20 ℃電熱培養箱中，并不時搖動瓶子，待表面無明顯水跡，用噴壺均勻噴入清水，邊噴水邊翻動藥材，使藥材表面全部濕潤(約5%)，裝入盆中蓋緊，置20 ℃電熱培養箱中，并不時搖動瓶子，待表面無明顯水跡，再噴水、悶潤，直至潤透(內外含水一致、全體軟化)，見表2。

表2 羌活原藥材悶潤時間考察結果

由表2可知，最佳悶潤時間為2 h，藥材吸水率達42%左右。

2.5.3 羌活原藥材悶潤溫度考察 稱取藥材100 g 3份，用自來水淋洗使藥材表面全部濕潤，將其放入廣口玻璃瓶中，密閉，分別置20 ℃、30 ℃、40 ℃電熱培養箱中，并不時搖動瓶子，待表面無明顯水跡，用噴壺均勻噴入清水，邊噴水邊翻動藥材，使藥材表面全部濕潤，裝入盆中蓋緊，如此反復操作，直至潤透(內外含水一致、全體軟化)，記錄不同溫度軟化所需時間，見表3。

表3 羌活原藥材悶潤溫度考察結果

表3結果可知，20、30、40 ℃悶潤均可切片，均未霉變，故悶潤溫度在20～40 ℃均可切片，30 ℃增重值最大，故悶潤溫度定為30 ℃較合適。

2.6 正交設計試驗優選羌活最佳切制工藝參數

2.6.1 正交設計試驗因素水平的確定 影響飲片質量(成分損失率與煎出率)的因素主要有鼓風干燥溫度、飲片厚度、鋪層厚度、翻動次數，考察因素水平參照文獻確定[4-5]，見表4。

表4 正交設計試驗因素水平

2.6.2 正交設計試驗安排及數據統計處理 以浸出物、羌活醇、異歐前胡素、揮發油的含量百分率為評價指標，采用L9(34)正交設計試驗安排表進行試驗，其組合方案見表5。飲片樣品制備：取凈藥材約900 g，按大小品質均分為9份，每份100 g，分別淋洗5 min，30 ℃悶潤2.0 h，1、4、7號切片2 mm，2、5、8號切片3 mm，3、6、9號切片4 mm，濕飲片按表4的因素水平與表5的組合試驗號進行實驗，對9個試驗號所得飲片按照“2.1-2.3”項評價指標及測定方法，結果見表5，極差分析見表6，方差分析見表7。由表6-表7結果可知，以揮發油含量及浸出物含量為評價指標時，因素水平皆無統計意義，各因素可取任意水平；以羌活醇為評價指標時，A因素和D因素皆有統計意義，其水平數按最佳確定，A因素取1水平，D因素取2水平；以異歐前胡素為評價指標時，A因素、C因素和D因素皆有統計意義，A因素取1水平，C因素取2水平，D因素取2水平；B因素誤差最小影響最小(作為誤差項)可取任意水平，即飲片切制厚度無統計意義，對結果影響最小，從降低成本考慮，B因素取3水平；綜合分析可得，A因素取1水平，C因素取2水平，D因素取2水平，最終確定最佳組合為A1B3C2D2，即最佳炮制工藝為40 ℃干燥，切4 mm厚片，堆放1 cm厚，翻動2次。

表5 羌活炮制正交設計試驗安排及實驗結果 (%)

表6 羌活炮制正交設計試驗極差分析結果

表7 羌活炮制正交設計試驗方差分析(完全隨機模型)

2.6.3 羌活炮制正交設計驗證試驗 取除去雜質和泥沙的羌活原藥材3份，每份1 000 g，淋洗5 min，裝入不銹鋼桶中蓋緊密閉，分別置30 ℃電熱培養箱中，用噴壺均勻噴入清水，邊噴水邊翻動藥材，使藥材表面全部濕潤，悶潤2 h，再按正交試驗確定的最佳組合因素水平，即切4 mm，堆放1 cm厚，40 ℃干燥，翻動2次，進行驗證試驗，并與同批次原藥材3份樣品比較，按“2.1-2.3”項評價指標及測定方法，結果見表8。

表8 正交設計驗證試驗結果

由表8結果可知，揮發油、浸出物、羌活醇、異歐前胡素等指標均優于正交設計中最佳的2號，量值傳遞率均達到90%以上，表明優選出的工藝穩定可靠。

3 結語

羌活中含揮發油及揮發性成分(羌活醇、異歐前胡素等)較多，故炮制工藝中盡可能降低悶潤、干燥溫度，試驗結果也證明了溫度不宜過高，避免羌活揮發油及揮發性成分損失。

羌活炮制工藝中的干燥時間以干燥至含水量達5%為標準，故無須考察干燥時間，而且正交設計試驗9個樣品的含水量皆一致，使實驗結果具有可比性。

羌活有兩種基原，即羌活和寬葉羌活，本實驗藥材系羌活，若是寬葉羌活，則炮制工藝參數必須調整，寬葉羌活個頭大，除泥沙難，淋洗時間長，悶潤時間長，干燥時間也長，故須根據藥材來源、質地靈活掌握調整羌活炮制工藝參數。

本實驗悶潤采用恒溫恒濕培養箱，不但可控制溫度，也可控制濕度，設定為RH=80%，使實驗過程中悶潤的濕度參數一致，結果具有可比性。

隨著科學技術的進步中藥炮制逐步走向現代化、智能化，如：干洗法清洗藥材，采用切藥機切片，則無需悶潤軟化，更不需要加熱干燥。本實驗開始采用手工切片，因切的厚度不一，改用切藥機切片，發現可以不經悶潤過程，藥材淋洗后，瀝干水可直接用切藥機切片，若采用干洗技術，無需加熱，則可徹底顛覆傳統的炮制方法。