彌漫型大B細胞淋巴瘤EZH2、XIAP和Survivin蛋白表達水平及意義

盧 輝 孫亞瓊 張 倩

彌漫型大B細胞淋巴瘤屬于臨床常見的侵襲性淋巴瘤，占到成人非霍奇金淋巴瘤的1/3，近年來其發病率呈現升高趨勢。彌漫型大B細胞淋巴瘤具有獨特的臨床病理學表現，因此早期診斷極為困難，患者預后較差[1]。近年來研究顯示細胞凋亡調控異常是腫瘤發生的病理基礎，因此臨床對于腫瘤細胞凋亡的相關研究日益增多。組蛋白甲基轉移酶EZH2同彌漫型大B細胞淋巴瘤的發生具有一定的關聯，通過應用EZH2抑制劑可以在一定程度抑制腫瘤細胞增殖。目前人類凋亡抑制蛋白家族中的X連鎖凋亡抑制蛋白(XIAP)和生存素(Survivin)蛋白屬于作用較強的人類凋亡抑制蛋白，前者可以應用Caspase蛋白酶激活與核因子途徑激活發揮抗凋亡作用，后者則具有腫瘤特異性，其過度表達可以抑制或者阻斷細胞凋亡過程，同腫瘤發生和發展關系密切[2]。本研究分析了彌漫型大B細胞淋巴瘤Zeste同源物增強子2(EZH2)、X連鎖凋亡抑制蛋白(XIAP)和生存素(Survivin)蛋白表達水平，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月至2020年2月我院保存的彌漫型大B細胞淋巴瘤組織92例作為觀察組，納入標準：①均經病理學確診；②臨床資料保存完整；③未行抗腫瘤治療。排除標準：合并有其他惡性腫瘤。同時選取反應性增生淋巴結組織50例作為對照組。2組臨床資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 2組一般資料比較

1.2 實驗方法

將獲取的標本在10%中性甲醛溶液中固定48 h，石蠟包埋4 μm厚度切片，采用免疫組織化學法染色，采用Roche Benchmark XT全自動免疫組化染色。嚴格按照試劑盒說明書操作，試劑由深圳晶美生物技術有限公司提供，由已知EZH2、XIAP、Survivin陽性切片作為陽性對照，以PBs代替一抗作為陰性對照。

1.3 結果判斷

對染色強度和陽性細胞比例進行評分，染色強度：無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽性細胞比例：陽性細胞比例≤10%為1分，>10%～50%為2分，>50%～75%為3分，>75%為4分。染色強度和陽性細胞比例得分之積≥6分為陽性表達。

1.4 統計學處理

數據分析統計采用SPSS 19.0軟件，計量資料采用均數±標準差表示，2組間比較使用t檢驗，計數資料比較使用卡方檢驗，相關性采用Spearman秩相關分析。檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 觀察組和對照組EZH2、XIAP和Survivin蛋白表達比較

觀察組EZH2、XIAP和Survivin蛋白陽性表達率明顯高于對照組(P<0.05)，見表2。

表2 觀察組和對照組EZH2、XIAP和Survivin蛋白陽性表達比較(例，%)

2.2 EZH2、XIAP和Survivin蛋白表達與彌漫型大B細胞淋巴瘤臨床病理特征關系

彌漫型大B細胞淋巴瘤臨床分期Ⅲ～Ⅳ期EZH2、XIAP和Survivin蛋白表達陽性率明顯高于臨床分期Ⅰ～Ⅱ期(P<0.05)，見表3。

表3 EZH2、XIAP和Survivin蛋白表達與臨床病理特征關系(例，%)

2.3 相關性分析

EZH2與XIAP、Survivin蛋白表達呈正相關(γ=0.547、0.360，P均<0.05)，XIAP與Survivin蛋白表達呈正相關(γ=0.581，P<0.05)。見表4。

表4 相關性分析/例

3 討論

淋巴瘤屬于血液系統常見的惡性腫瘤之一，臨床主要分為霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤，后者又按照細胞起源分為T細胞非霍奇金淋巴瘤與B細胞非霍奇金淋巴瘤，以B細胞非霍奇金淋巴瘤最為常見，近年來隨著工業化加速以及環境惡化，其發病率呈現升高趨勢[3]。彌漫性大B細胞淋巴瘤目前在發展中國家占到所有淋巴瘤的3/5，屬于高度異質性B細胞來源的惡性腫瘤，呈現彌漫性增生，由于腫瘤細胞核超過正常的巨噬細胞核，因此侵襲性高，但是經過化療治療近2/5患者可以得到有效緩解，但是仍會有部分患者發生復發和轉移[4]。近年來臨床對于腫瘤分子生物學研究越來越多，大量的研究認為細胞增殖和凋亡之間失去平衡是導致惡性腫瘤發生和發展的重要因素，兩者之間處于平衡狀態維持人體正常的發育和內環境穩定，目前細胞的凋亡調控主要包括Caspase依賴和非Caspase依賴途徑，屬于復雜的網絡體系，包含了體內促進凋亡因子和抑制凋亡因子等多種細胞因子參與的過程，因此對于腫瘤凋亡基因和相關蛋白產物的研究可能成為臨床腫瘤生物靶向治療的新方向[5-6]。

本研究分析了彌漫型大B細胞淋巴瘤Zeste同源物增強子2(EZH2)、X連鎖凋亡抑制蛋白(XIAP)和生存素(Survivin)蛋白表達水平。XIAP屬于包含了497個氨基酸蛋白質，最早在人體胚胎組織中克隆出來，一方面能夠通過Caspase蛋白酶激活級聯反應對細胞的凋亡過程產生抑制作用，另一方面還可以通過核因子2KB途徑激活抗凋亡基因表達過程參與信號轉導產生抗凋亡作用[7]。此外XIAP還能夠抑制線粒體途徑抑制細胞凋亡過程，通過特異性結合過程導致下游Caspase蛋白無法激活阻斷了線粒體凋亡的過程[8]。有報道指出在細胞有絲分裂過程中XIAP可以在細胞周期檢查點激酶發揮作用形成復合物，與濃縮染色體排列在一起后就會發生細胞核膜降解，因此XIAP蛋白可能通過凋亡抑制功能在淋巴瘤的發生進展中有一定作用，并可作為判斷淋巴瘤預后的參考指標[9]。

Survivin具有腫瘤特異性，在正常成人的組織幾乎不表達，而在腫瘤組織中則呈現高表達狀態，過度的表達會抑制細胞的凋亡過程，促進了細胞惡性增長，因此該基因同腫瘤發生和發展密切相關[10]。研究顯示Survivin一方面能夠對Caspase產生影響阻斷多種刺激誘導的細胞凋亡過程；另一方面還可以同細胞紡錘體纖維結合造成Caspase對于細胞紡錘體形成的水解作用被阻滯，發揮對細胞有絲分裂器細胞器完整保護作用[11]。研究顯示Survivin組織分布有明顯的選擇性，能夠加快腫瘤細胞從G1期朝向S 期轉換，具有細胞周期依賴性，同時Survivin 和腫瘤血管形成關系密切，其表達上調后會導致體內血管內皮生長因子、堿性成纖維細胞生長因子等血管形成因子活性，因此提示臨床通過抑制Survivin 的表達既可以維持正常的caspase 促凋亡機理，同時可以通過VEGF 通路的阻斷間接促進腫瘤血管的凋亡性退化，抑制腫瘤生長[12]。

EZH2在胚胎發育早期普遍存在，對于細胞增殖意義重大，并能增強細胞的生存能力。EZH2蛋白是PRC2核心部分，既可以在PcG沉默機制中發揮作用，同時在細胞生殖發育、維持干細胞多功能性及腫瘤的侵襲轉移亦起到重要影響[13]。研究顯示一方面EZH2蛋白具有組蛋白甲基轉移酶活性，能夠發生三甲基化導致PRC1復合物到特定基因位點，造成同細胞分化和增殖抑制基因發生沉默，導致腫瘤發生；另一方面EZH2蛋白可以對組蛋白去乙酰化酶發揮調節作用，參與靶基因轉錄抑制過程，導致細胞G1期縮短，S期增加，促進細胞增殖。近年來有學者指出在胃癌患者大量患者存在EZH2高表達，正常胃黏膜組織則低表達或者不表達，而且同胃癌大小、組織類型、臨床分期以及淋巴結轉移等腫瘤生物學行為具有密切關系[14]。研究發現在彌漫性大B細胞淋巴瘤患者中EZH2的SET區域錯義突變更為常見，對底物的選擇性改變，下調細胞周期中的關鍵腫瘤抑制基因，促進細胞惡性增殖，加速腫瘤的發展惡[15]。

本研究顯示，觀察組EZH2、XIAP和Survivin蛋白陽性表達率明顯高于對照組，說明在彌漫型大B細胞淋巴瘤EZH2、XIAP和Survivin蛋白陽性表達顯著升高。通過患者臨床病理特征分析發現，分期越靠后的彌漫型大B細胞淋巴瘤EZH2、XIAP和Survivin蛋白陽性表達率越高。通過相關性分析發現，EZH2與XIAP、Survivin蛋白表達呈正相關，XIAP與Survivin蛋白表達呈正相關。本研究優勢在于證實了EZH2、XIAP和Survivin蛋白在彌漫型大B細胞淋巴瘤呈現高表達狀態，提示臨床以EZH2、XIAP和Survivin作為治療靶點的可能，但是本研究隨訪時間短，入組病例有限，因此還需擴充樣本量、長期隨訪深入論證。

綜上所述，彌漫型大B細胞淋巴瘤EZH2、XIAP和Survivin蛋白表達水平上調，與臨床分期有一定關系，三者間存在相關關系。