胃腸胰神經內分泌腫瘤患者血清CgA、PKB的水平及其臨床意義

劉 倩 馬艷慶 陳 寧 陳曉亮 侯俊杰 楊鹿鳴 李軍娜

胃腸道胰腺神經內分泌腫瘤(gastroenteropancreatic neu-roendocrine neoplasm，GEPNEN)是一組起源于消化道彌散神經內分泌系統的異質性腫瘤群，具有生長緩慢、低度惡性，直至高轉移性等的惡性生物學行為[1-2]。目前，臨床上對此疾病的診斷以影像學檢查、某些相關因子檢測為主[3]。蛋白激酶B(Protein kinase B，PKB)，是一種存在于胞質中的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，在調控細胞生存、凋亡中發揮著重要作用，與許多腫瘤的發生發展存在關聯[4-5]。嗜鉻粒蛋白A(ChromograninA,CgA)可作為1種特征性標志物用于腫瘤患者的診斷和隨訪[6]。CgA充當具有多個蛋白水解位點的前激素，允許產生具有各種生理功能的多種肽，它廣泛分布于支氣管和胃腸道和皮膚的NE系統中。研究表明[7]血清CgA的水平與腫瘤負荷相關并可預測患者的存活率，一些相關研究[8]已經闡明了血漿CgA水平與某些腫瘤嚴重程度之間的相關性。但關于CgA與GEPNEN之間的關系的研究很少，本次試驗將GEPNEN患者作為研究對象，分析PKB、CgA與GEPNEN病理特征的相關關系。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取我院在2016年1月至2019年2月收治的胃腸胰神經內分泌腫瘤患者87例作為觀察組，納入標準：①均經病理學確診；②未接受放化療等抗腫瘤治療；③患者及家屬知情同意。排除標準：合并有其他惡性腫瘤、肝腎功能障礙、免疫系統疾病等。選取同期健康體檢者80例作為對照組。2組研究對象的性別、年齡比較，無統計學差異(P>0.05)，見表1。

表1 2組臨床資料上的比較

1.2 檢測方法

用免疫放射分析法檢測血清中CgA水平，清晨采集所有受試者空腹時的靜脈血5 ml，靜置1 h后，3 000 r/min 離心10 min，分離血清，置于-20 ℃冰箱中保存，待測。使用法國 CISBio的CgA-RIACT試劑盒，操作嚴格按照說明書進行。

ELISA法檢測入組患者血液中PKB水平：抽取所有受試者空腹時的靜脈血5 ml，1 500 r/min 離心10 min后取上清，保存于-20 ℃冰箱中待測。試劑盒常溫放置0.5 h，按試劑盒說明書稀釋標準品，每個濃度均設3個復孔，加樣、配液、洗滌、顯色、終止，最后用酶標儀測量在450 nm波長處的吸光值，繪制線性回歸方程，可計算出樣品濃度。

1.3 統計學方法

本文相關的數據采用了SPSS 22.0軟件包進行分析，其中得出的計量資料采用均數±標準差描述，行t檢驗，多組間比較行方差分析，兩兩行LSD-t檢驗；計數資料行卡方檢驗；相關性采用Pearson相關分析。檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 2組血清CgA、PKB水平比較

觀察組血清CgA、PKB水平明顯高于對照組，具有統計學差異(P<0.05)，見表2。

表2 2組血清CgA、PKB水平比較

2.2 GEPNEN患者血清CgA、PKB水平與臨床病理特征關系

低分化、腫瘤大小>3 cm患者血清CgA和 PKB明顯高于中高分化、腫瘤大小≤3 cm患者(P<0.05)。見表3。

表3 血清CgA、PKB水平與臨床病理特征關系

2.3 相關性分析

將觀察組血清CgA、PKB進行相關分析，結果顯示：血清CgA與PKB呈正相關(γ=0.438，P<0.05)，見圖1。

圖1 相關分析圖

3 討論

神經內分泌腫瘤是1種不常見的腫瘤，起源于肽能神經元及神經內分泌細胞的一組異質性腫瘤，有研究顯示，胃腸道的神經內分泌信號傳導系統的缺陷和異常活化與腫瘤發生、發展及預后有著密切的關系。

CgA 屬于分泌蛋白家族，存在于內分泌組織中的酸性糖蛋白，其由肽激素和神經肽共同分泌。已有研究[9]闡明了血清CgA水平與疾病嚴重程度之間的相關性，可作為內分泌腫瘤的組織、血清標志物。

PKB，也稱為Akt，是人激肽組中的多面激酶之一，PKB信號可反映細胞增殖相關信號，在關于乳腺癌、肺癌等的研究中已得到證實[10-11]。它以3種亞型存在，PKB在磷酸肌醇3激酶(Phosphoinositide 3-kinase,PI3K)介導的各種惡性腫瘤中起著重要作用。研究發現，不同的PKB亞型在腫瘤細胞侵襲和遷移中各發揮著作用[12]。PKB激活在上皮間充質轉化過程中起著中心作用，這是癌細胞侵襲和遷移所必需的細胞程序。然而，每一種PKB亞型的差異行為已經在上皮間充質轉換的調節中表現出來。最近的研究表明[13]，PKBα(akt1)通過抑制凋亡機制或通過限制腫瘤侵襲作為促癌因子在腫瘤發生中起著相互沖突的作用。PKBβ(akt2)促進細胞遷移和侵襲，同樣，PKBγ(akt3)也促進腫瘤遷移。但目前對CgA與PKA在GEPNEN中的研究較少。本研究試圖分析CgA與PKA如何在GEPNEN中作用以及其的相關性，探究其臨床意義。

本研究結果顯示，觀察組血清CgA、PKB水平明顯高于對照組，越來越多的研究表明血清CgA水平與腫瘤負荷呈正相關。腫瘤定位可以確定患者血清CgA水平的總量。PKB是調控細胞生存與凋亡的重要信號物質之一，同人類多種腫瘤的發生發展密切相關。血清CgA升高的檢測表明腫瘤的惡性也可能是由于神經內分泌細胞的增殖，這通常與預后不良有關，并且可能需要不同的治療方法。因此，GEPNEN患者治療期間監測血清PKB和血清CgA是重要的。

研究顯示，低分化、腫瘤大小>3 cm患者血清CgA、PKB高于中高分化、腫瘤大小≤3 cm患者；PKB信號通路被激發，在GEPNEN的發生發展中擔任著重要的角色。如PKB在患者中過度表達，那么其惡性程度就較高，且影響預后。在其他相關研究中也發現[14]，PKB信號通路的表達情況能夠衡量出患者腫瘤的惡性的程度，因此其對腫瘤患者的診斷、治療及預后都存在一定的參考價值。CgA是在神經內分泌細胞中發現的糖蛋白，可用作神經內分泌腫瘤的腫瘤標志物。在疾病嚴重程度高的患者中發現血清CgA增加，對于患有GEPNEN的患者，血清CgA比血清PKB早得多，血清CgA的早期升高為GEPNEN患者提供了早期信號，這一先進信號可以為疾病進展到致命階段之前的治療變化創造一個關鍵窗口。單獨監測血清PKB可能無法提供足夠的疾病指征。血清CgA升高的檢測表明腫瘤的惡性也可能是由于神經內分泌細胞的增殖，這通常與預后不良有關，并且可能需要不同的治療方法。在接受激素治療的患者中，通過早期觀察到血清CgA的升高預測耐藥性，以便在發病早期擇取合適的治療方法[15]，通常，如果僅監測血清PKB，則檢測發生得太晚，無法更改治療方法。血清CgA與PKB呈正相關，兩種指標聯合檢測對GEPNEN的診斷及治療均有重要的臨床意義。

本研究結果提示，GEPNEN患者血清中CgA、PKB呈現高表達，CgA、PKB與腫瘤侵襲、轉移密切相關。在下一步的研究中，需要適當擴大樣本含量，進一步從分子生物學、細胞學等方面確定CgA、PKB蛋白與GEPNEN的關系，為深入確定 CgA、PKB能否作為GEPNEN的診斷分子標志物提供依據。