OTUD1在非小細胞肺癌中的表達及其與臨床病理特征的相關性

王延朋 王啟船 柳云飛 謝 陽 陳濤利 高新雅

目前，隨著環境惡化、吸煙人口及職業暴露的上升，肺癌發病率已居世界癌癥首位，其中75%～80%患者為非小細胞肺癌(NSCLC)，因其5年生存率低，病死于浸潤轉移和復發的患者占90%以上，其中，NSCLC不良預后的重要原因為相關基因異常表達[1-2]。泛素-蛋白酶體系統(UPS)是細胞內蛋白降解途徑，其降解途徑屬于可逆過程；去泛素化酶(DUBs)在細胞生長、凋亡、遺傳性腫瘤、神經退行性疾病等中發揮著重要作用，其主要成員為卵巢癌結構域蛋白酶(OTUD)，在人類腦、肺、腎等組織內有廣泛表達[3-4]。然而，肺癌組織病理與OTUD1基因表達相關性的報道尚不多見。本研究旨在探究OTUD1在NSCLC中的表達情況。現將結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年2月至2019年10月在南陽市第二人民醫院治療的70例NSCLC患者，選取其癌組織石蠟標本(n=70)及對應癌旁組織(n=70)。男性44例，女性26例；年齡50～75歲，平均(58.05±0.20)歲；病理類型：腺癌32例，鱗癌32例，其它6例；TNM分期：Ⅰ期10例，Ⅱ期17例，Ⅲ期20例，Ⅳ期23例；40例有吸煙史，25例有淋巴結轉移。所有標本均于手術中采集。本院醫學倫理委員會審核并通過本研究。

1.2 免疫組織化學染色及評分

NSCLC及癌旁正常組織切片均應用免疫組織化學S-P法對其進行染色。滴加一抗兔抗人OTUD1抗體4 ℃過夜，室溫將其置于生物素化的二抗辣根過氧化物酶中繼續孵育30 min。DAB顯色，蘇木精復染，封片后觀察并攝片。由2名專業病理科醫生獨立評估免疫組織化學結果，根據切片中細胞是否顯色、深淺評分，對染色強度進行詳細的分類：無著色為0分；淺黃色為1分；深黃色為2分；棕褐色為3分。計算每100個細胞中陽性細胞所占百分比，其中占比<1/3為1分；>1/3～2/3為2分；>2/3為3分。2組評分相乘，陰性(-)<1分；陽性(+)2～4分；強陽性(++)>5分。OTUD1低表達0～4分，OTUD1高表達5～7分。

1.3 觀察指標

(1)比較肺癌組織、癌旁正常組織OTUD1表達水平。(2)采用COX回歸分析性別、年齡、吸煙與否、淋巴結有無轉移、TNM分期、病理類型與OTUD1蛋白表達的相關性。(3)經Kaplan-Meier及COX回歸分析影響患者預后的相關因素。

1.4 統計學方法

使用SPSS 22.0分析數據。計數資料使用頻數表示，卡方檢驗進行比較；使用Kaplan-Meier及COX進行相關性分析。P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 肺癌組織、癌旁正常組織OTUD1表達水平比較

肺癌組織的OTUD1高表達率為48.57%(34/70)，顯著高于癌旁正常組織的5.71%(4/70),差異有統計學意義(χ2=35.840，P<0.05)。

2.2 OTUD1與非小細胞肺癌臨床病理特征的關系

非小細胞肺癌淋巴結轉移者組織中OTUD1表達率高于無淋巴結轉移者，TNM分期Ⅰ～Ⅱ者低于TNM分期Ⅲ～Ⅳ者(P<0.05)。見表1。

表1 不同臨床特征間OTUD1表達水平比較/例

2.3 NSCLC患者生存的影響因素分析

經Kaplan-Meier及COX回歸分析顯示：淋巴結轉移、TNM分期、OTUD1表達是患者生存的影響因素(P<0.05)，見圖1。見表2。

表2 NSCLC患者生存的影響因素分析表

圖1 NSCLC患者OTUD1表達情況與生存分析圖

3 討論

隨著外科手術方式的改進及綜合治療方案的實施，以及分子生物靶向藥物的出現，肺癌患者的臨床治療取得較大的進展，但總體5年生存率仍不樂觀，因此倡導個體化和精準化治療成為目前的主流治療模式[5-6]。

近幾年，臨床廣泛關注泛素化酶與DUBs對于細胞周期調控及其與腫瘤發生的關系[7]。OTUDs屬于去泛素化酶家族一個重要成員，OTUD1為最早在體外證實可以發揮去泛素化酶活性作用的OTUD蛋白，包含1個由130個氨基酸組成的OTUD結構域，且高度保守[8-10]。去泛素化酶可將泛素從泛素連接底物上移除，發揮調節細胞的增殖、周期進程、轉錄激活及信號傳導等過程。目前關于OTUD1作用機制有以下兩種觀點，一種觀點認為[11]，OTUD1可誘發p53依賴的細胞凋亡及抑制細胞增殖；另一種觀點認為[12]，OTUD1可以與SMAD2/3結合，被抑制磷酸化的SMAD2/3可以通過蛋白酶體途徑進行降解。姜維娜等[13]研究報道，OTUD1在結腸癌組織中的表達較癌旁組織高3.5倍，癌組織中OTUD1的蛋白表達水平也明顯高于癌旁組織。段菲[14]、熊金升[15]等分別在乳腺癌及膠質細胞瘤中發現OTUD1在癌細胞組織中高表達的生物學行為。OTUD1高表達可作為預后不良的標志物，其在卵巢癌和胃腺癌中促進癌細胞的侵襲、轉移，通過抑制RAS泛素化促進肺癌的發展。本次研究證實了OTUD1在NSCLC組織中的表達顯著高于正常肺組織，然而，其與其他臨床及病理特征之間的相關性不顯著，表明在NSCLC的發生發展中OTUD1高水平與之有著重要關系，上述研究的發現，可為以后關于肺癌的個體化及精準化治療提供新的治療方向。國外學者研究報道[16]，OTUD1在結直腸癌組織中的表達水平與TNM分期、淋巴結轉移、腫瘤浸潤深度呈正相關，且可作為無進展生存期和總生存期的一個獨立預后因素。本次研究發現淋巴結轉移、TNM分期及OTUD1高表達與患者的生存質量相關，與上述研究報道相一致。本次研究中，與OTUD1低表達患相比，OTUD1高表達患者預后較差，進一步表明，OTUD1高表達患者可能為預后高危人群。本研究對OTUBl蛋白在NSCLC中的作用機制提供了初步的實驗依據，相信進一步深入研究將為NSCLC的診治及新型化療藥物的研制提供新的方向。

綜上，OTUD1在NSCLC組織中高表達，與不良預后顯著相關，可以作為評估預后的獨立因素，并為NSCLC的生物靶向治療提供了一個新的思路。