E-cad、Snail在垂體腺瘤組織中的表達及其意義

代紅偉 楊 揚 李 惺

垂體腺瘤是顱內常見的良性腫瘤，具有較高的發生率，約占顱內腫瘤的12%[1]。E-鈣黏蛋白(E-cad)是1種同親型結合、Ca2+依賴的細胞黏著糖蛋白，E-cad已被證實在肝癌、乳腺癌等惡性腫瘤中表達降低[2]。而Snail蛋白則具有抑制E-cad表達，從而增強腫瘤細胞侵襲能力的作用。本研究主要采用免疫組化方法檢測垂體腺瘤中E-cad、Snail蛋白的表達水平，具體內容如下。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選取2013月7月至2014年7月于我院行垂體腺瘤切除術患者60例(經蝶手術34例，經開顱手術26例)作為實驗組，其中男性31例、女性29例，年齡25～64歲，平均年齡(35.21±2.63)歲。另選癌旁正常組織60例作為對照組，其中男性32例、女性28例，年齡25～64歲，平均年齡(35.41±2.82)歲。該研究已經我院醫學倫理委員會審核通過。

納入標準： 患者均符合《外科學》(第8版)垂體腺瘤診斷標準[3]；垂體腺瘤為單一分泌類型者；年齡在25～65歲；了解本研究并自愿簽署知情同意書。

排除標準：垂體腺瘤卒中或囊變者；垂體腺瘤為混合型分泌者；凝血功能嚴重障礙者；心、肝、腎等重要器官嚴重障礙者；對研究及隨訪不能配合者。

1.2 方法

主要試劑： 鼠抗人E-cad單克隆抗體購自北京中衫生物工程公司；兔來源Snail抗體購自北京博奧森生物技術有限公司；二抗試劑:二步法兔/鼠通用免疫組化試劑盒，抗體使用前按說明進行稀釋。

病理切片染色： 使用石蠟對病理組織進行包埋，4 μm后連續切片，將切片置于60 ℃的烤箱中30 min，再使用二甲苯脫蠟；將切片放進4 ℃經冷藏后的枸櫞酸鹽緩沖液中，微波修復后自然冷卻；滴入一抗，孵育6 h；滴入二抗，孵育30～60 min；滴加新配的DAB顯色劑在切片上，顯色越2 min后用自來水沖洗；蘇木精復染3 min，脫水后用中性樹膠封片；用PBS代替一抗作陰性對照，用已知垂體腺瘤切片作陽性對照。

資料收集：收集所有患者術前臨床病理資料，包括年齡、性別、腫瘤大小、KNOSP分期及復發情況，通過門診復查和電話等方式隨訪患者術后5年生存情況。

1.3 觀察指標

對比兩組受試者組織中E-cad、Snail蛋白陽性表達率；分析E-cad、Snail蛋白表達與垂體腺瘤臨床病理特征的關系；分析E-cad、Snail表達水平與垂體腺瘤患者存活時間的關系。

1.4 統計學方法

應用SPSS 22.0進行研究資料分析。觀測資料中主要為計數資料以例數及率描述。組間比較為卡方檢驗或校正卡方檢驗(統計量為χ2)，相關分析為Spearman相關檢驗。 生存等時間隊列資料建立Kaplan-Meier乘積限生存曲線模型，組間生存率比較為Logrank檢驗。檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 兩組受試者組織中E-cad、Snail蛋白陽性表達對比

實驗組患者組織中E-cad陽性表達率為18.33%，對照組受試者組織中E-cad陽性表達率為86.67%，實驗組患者組織中E-cad陽性表達率顯著低于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。實驗組患者組織中Snail蛋白陽性表達率為51.67%，對照組受試者Snail蛋白陽性表達率為8.33%，實驗組患者組織中Snail陽性表達率顯著高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 兩組受試者組織中E-cad、Snail蛋白陽性表達對比(例，%)

2.2 實驗組E-cad、Snail蛋白表達的相關性

由Spearman相關性分析結果顯示，E-cad與Snail蛋白表達水平呈負相關(γ=-0.425，P=0.000)。見圖1。

圖1 E-cad、Snail蛋白陽性表達的相關數據散點圖

2.3 E-cad、Snail蛋白表達與垂體腺瘤臨床病理特征的關系

在60例垂體腺瘤患者中，E-cad與Snail蛋白表達均與年齡、性別及腫瘤直徑無相關性(P>0.05)。KNOSP分期Ⅰ、Ⅱ期患者E-cad陽性率顯著高于Ⅲ、Ⅳ期患者,差異有統計學意義(P<0.05)。有復發患者E-cad陽性率顯著低于無復發患者，差異有統計學意義(P<0.05)。KNOSP分期Ⅰ、Ⅱ期患者Snail蛋白陽性率顯著低于Ⅲ、Ⅳ期患者,差異有統計學意義(P<0.05)。有復發患者E-cad陽性率顯著高于無復發患者，差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 E-cad、Snail蛋白表達與垂體腺瘤臨床病理特征的關系/例

2.4 E-cad、Snail表達水平與垂體腺瘤患者存活時間的關系

由Kaplan-Meier生存分析結果顯示，E-cad陽性和陰性患者5年內生存率分別為86.15%和49.01%，差異有統計學意義(Log-Rank：χ2=21.631，P<0.001)。Snail蛋白陽性和陰性患者5年內生存率分別為40.67%和83.36%，差異有統計學意義(Log-Rank：χ2=19.154，P<0.001)，見圖2。

圖2 E-cad和Snail蛋白表達與垂體腺瘤患者總生存率的關系

3 討論

垂體腺瘤是發病率較高的顱內腫瘤之一，好發年齡為20～35歲[4]。該病主要表現為垂體激素異常分泌導致代謝紊亂和器官損害，腫瘤壓迫垂體導致應周圍靶腺體的萎縮，腫瘤壓迫視神經等導致視力降低等，嚴重影響患者的生活質量[5]。垂體腺瘤可分為非侵襲性和侵襲性垂體腺瘤，以及垂體腺癌[6]。其中，非侵襲性垂體腺瘤病灶體積小，無典型表現，臨床隱匿性較強，因此早期較難發現[7]。侵襲性垂體腺瘤能夠入侵周圍的硬膜、骨質、海綿竇等結構。侵襲性垂體腺瘤具有增殖能力強，侵襲能力強，術后復發率高，治愈率低等特點[8]。有文獻指出，侵襲性垂體腺瘤即使通過手術做到鏡下全切，其復發率仍高達20%[9]。因此，早期診斷出垂體腺瘤并進行有效的治療，有利于患者的生命安全。本研究主要采用免疫組化方法檢測垂體腺瘤中E-cad、Snail蛋白的表達水平，探討這兩者在垂體腺瘤病情診斷及預后評估的臨床價值。

有研究報道證實，在侵襲性垂體腺瘤中發現E-cad表達水平降低，E-cad低表達可能作為垂體腺瘤患者預后的評估指標[10]。同時，也有研究指出，在腫瘤惡性進展中，隨著腫瘤惡化程度的加重，E-cad表達水平降低，而E-cad的表達異常則會造成細胞連接出現障礙，起到腫瘤細胞浸潤、轉移的作用，這將促進腫瘤的發生及進展[11]。上皮細胞-間充質轉化(EMT)，是指上皮細胞通過特定程序轉化為具有間質表型細胞的生物學過程。ETM在腫瘤細胞轉移中具有重要作用，E-cad表達減少是其主要特征之一。E-cad廣泛存在與表皮組織中，是一種細胞跨膜糖蛋白，也是調節細胞黏附反應的重要因子，E-cad在維持組織細胞正常分化、增殖中起著重要作用[12]。當E-cad表達降低時組織內細胞黏附強度下降，導致細胞活動能力增加，這增強了腫瘤細胞的侵襲能力[13]。有研究顯示，在惡性腫瘤中，Snail蛋白高表達，E-cad低表達，發生EMT而促進了腫瘤細胞的侵襲和轉移[14]。Snail蛋白是間質細胞表達的標志物，也可調控EMT，主要機制是抑制E-cad的表達在促進EMT進程，增強腫瘤細胞的侵襲能力[15]。本研究結果表明，實驗組E-cad陽性表達率顯著低于對照組，Snail陽性表達率顯著高于對照組。垂體腺瘤中E-cad低表達，Snail蛋白高表達，這與上述言論具有一致性，提示E-cad、Snail蛋白可能作為垂體腺瘤診斷的指標。KNOSP分期Ⅰ、Ⅱ期患者E-cad的陽性率顯著高于Ⅲ、Ⅳ期患者,有復發患者E-cad的陽性率顯著低于無復發患者，KNOSP分期Ⅰ、Ⅱ期患者Snail蛋白的陽性率顯著低于Ⅲ、Ⅳ期患者,有復發患者E-cad的陽性率顯著高于無復發患者，這提示E-cad、Snail蛋白與垂體腺瘤的發生、發展具有相關性，原因在于E-cad、Snail均可調控EMT，對于腫瘤的進展有密切聯系。由Kaplan-Meier生存分析結果顯示，E-cad陽性患者5年內平均存活時間顯著高于陰性患者，Snail陽性患者5年內平均存活時間顯著低于陰性患者，提示E-cad、Snail蛋白均是可影響患者生存的危險因素，對于患者預后具有重要的評估作用。

綜上所述，垂體腺瘤中E-cad陽性表達率較低，Snail蛋白陽性表達率較高，兩者在垂體腺瘤的發生、進展中表達異常，E-cad陰性、Snail蛋白陽性時垂體腺瘤病理分期更高、更易發生復發，且與患者存活時間相關，E-cad與Snail蛋白可能垂體腺瘤病情診斷及預后評估的指標。