FOXC1、FAT4及YAP1蛋白在上皮性卵巢癌組織表達水平及意義研究

吳東雅 徐括琴 劉 芳 楊小風

在我國，上皮性卵巢癌的發病率占卵巢腫瘤的50%～70%[1]。在臨床上，上皮性卵巢癌的惡化速度非常快，病死率非常高[2-3]。相關研究在對患者病情進展機制的研究過程中發現，細胞因子水平變化可以促使卵巢上皮細胞發生異常病變，進而促進卵巢癌的發生和病情進展。yes相關蛋白(YAP1蛋白)的表達可以激活HIPPO的信號通路，從而提高了卵巢上皮細胞的轉錄活性，促進卵巢上皮細胞的異常核分離過程[4]；轉錄因子叉頭框架蛋白(FOXC1)的表達，能夠通過穩定癌細胞的轉錄基因的活性，降低癌基因的激活程度，進而穩定癌細胞的生物學特征[5]；果蠅基因ft的同源基因(FAT4)的表達上升，能夠通過提高細胞的變形能力，促進上皮細胞的粘附和轉移，進而促進惡性腫瘤的病情進展[6]。為了揭示FOXC1、FAT4及YAP1蛋白的表達與卵巢惡性腫瘤之間的關系，為臨床上對上皮性卵巢癌的診療或者預后評估提供參考意見，本文收集了我院在2018年1月至2020年1月期間保存的72例上皮性卵巢癌組織標本進行研究，現將結果進行如下報告。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

在上皮性卵巢癌組織標本72例中，年齡范圍為31～70歲，平均年齡(50.20±1.12)歲。納入標準如下：①經病理組織學已確診者；②術前均未行放療、化療者；③相關病理資料完整者。排除標準如下：①非初次治療者；②合并有其他惡性腫瘤者。同時選取正常卵巢組織標本60例，年齡30～68歲，平均年齡49.50歲。

1.2 實驗方法

本次研究將石蠟連續性切片后脫蠟至水，然后再H2O2室溫下孵育10 min，再用磷酸鹽緩沖液沖洗3次(每天3～5 min)，用8%的蛋白粉封閉液(由BSA 購自南京博奧生物科技公司生產)封閉2 h，再倒去封閉液，加入兔來源(濃度1∶1000～1500)一抗，放置于4 ℃冰箱過夜，然后再次用磷酸鹽緩沖液沖洗3次(每天3～5 min)，加入鼠來源( 1∶400～500)二抗，放置于室溫孵育20～30 min，再次用磷酸鹽緩沖液沖洗3次(每天3～5 min)，然后加入辣根酶或堿性磷酸酶作為標記物，放置于室溫孵育10 min，再用磷酸鹽緩沖液沖洗3次(每天3～5 min)，滴加顯色劑(由DAB 購自南京博奧生物科技公司生產)，復染，脫水，封片，完成實驗。

1.3 療效判定

FOXC1、FATA4及YAP1以胞內出血棕黃色顆粒為陽性，采用半定量積分法進行判斷，陽性細胞比例：<5%計為0分，5%～25%計為1分，26%～50%計為2分，51%～75%計為3分，>75%計為4分；染色強度：無著色計為0分，淡黃色計為1分，黃色計為2分，棕黃色計為3分；當陽性細胞比例和染色強度得分之積，>4分則為陽性表達。

1.4 統計學方法

本文所得到的計數資料應用SPSS 19.0軟件包進行數據分析，行χ2檢驗，相關性采用Spearman秩相關分析。以P<0.05表示具有統計學差異。

2 結果

2.1 上皮性卵巢癌和正常卵巢組織中FOXC1、FAT4及YAP1蛋白表達

上皮性卵巢癌組織FOXC1蛋白陽性表達率明顯低于正常卵巢組織，具有統計學差異(P<0.05)，而FAT4和YAP1蛋白陽性表達率明顯高于正常卵巢組織，具有統計學差異(P<0.05)。見表1。

表1 上皮性卵巢癌和正常卵巢組織FOXC1、FAT4及YAP1蛋白表達(例，%)

2.2 FOXC1、FAT4及YAP1蛋白表達與卵巢癌臨床病理特征關系

Ⅲ期、中低分化及有淋巴結轉移患者FOXC1蛋白陽性表達率明顯低于Ⅰ～Ⅱ期、高分化及無淋巴結轉移患者，具有統計學差異(P<0.05)；中低分化及有淋巴結轉移患者FAT4、YAP1蛋白陽性表達率明顯高于高分化及無淋巴結轉移患者，具有統計學差異(P<0.05)；Ⅲ期患者YAP1蛋白陽性表達率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期患者，具有統計學差異(P<0.05)，見表2。

表2 FOXC1、FAT4及YAP1蛋白表達與卵巢癌患者臨床病理特征的關系(例，%)

2.3 相關性分析

上皮性卵巢癌組織FOXC1蛋白與FAT4、YAP1蛋白呈負相關(γs=-0.297和-0.294，P<0.05)，FAT4蛋白與YAP1蛋白呈正相關(γs=0.471，P<0.05)。

3 討論

卵巢一旦出現上皮細胞的異常病變或癌基因的突變，就能夠促進使上皮性卵巢癌的發生，尤其劍與見于合并生殖系統惡性腫瘤家族史者，上皮性卵巢癌的發病率會進一步的升高[7]。在臨床上，上皮性卵巢癌患者的臨床預后整體較差，綜合性治療措施治療后，很多患者的無瘤生存時間、無進展生存期仍然沒有得到改善[8-9]。本文從上皮性卵巢癌患者病灶組織中不同細胞因子和蛋白的表達研究發現：①對于FOXC1、FAT4及YAP1蛋白的表達分析研究，能夠為臨床上卵巢癌患者的血清學腫瘤指標的診斷提供潛在研究指標；②對于FOXC1、FAT4及YAP1蛋白的研究，能夠為卵巢癌患者的臨床預后的評估提供依據。

FOXC1是叉頭轉錄因子家族成員，其能夠通過降低癌基因的激活程度，抑制癌基因轉錄上游啟動子或者增強子的活性，能夠降低癌細胞的轉錄速度，從而抑制癌細胞的持續性自我增殖過程；FAT4是果蠅ft同源基因家族成員，其能夠激活癌細胞內不同腫瘤信號的通路，提高癌細胞內AKT或者NF-KB活性，進而促進癌細胞的生物學特征的改變；YAP1蛋白是HIPPO信號通路家族的重要成員，其能夠提高HIPPO下游腫瘤相關因子的激活，降低癌細胞的凋亡程度，促使癌細胞周期發生紊亂，導致生殖系統惡性腫瘤的發生[10]。有研究指出，FOXC1蛋白在食管癌或者甲狀腺癌患者中表達降低與相關惡性腫瘤的發生存在密切關系[11]，但是對于FOXC1、FAT4及YAP1蛋白的表達與卵巢癌的關系研究卻很少。

本文對于卵巢癌患者病灶組織中FOXC1、FAT4及YAP1的表達分析進行分析結果顯示，在病例組患者中，FOXC1的表達顯著下降，低于卵巢良性組織組，而FAT4及YAP1蛋白的表達陽性率均顯著上升，遠高于卵巢良性組織組，這表明FOXC1、FAT4及YAP1的異常表達可以促進卵巢癌的發生與發展。這可能與FOXC1、FAT4及YAP1以下特性有關[12-14]：①FOXC1的表達下降，失去了其對于癌基因的穩定和沉默作用，導致癌細胞內轉錄基因的激活程度的提高；②FAT4的升高可以提高卵巢上皮細胞的生物學特征的變化，促使上皮細胞發生異型；③YAP1的上升能夠促進HIPPO信號通路的激活，加劇了癌細胞增殖。有研究從卵巢癌病灶組織發現[15-17]，FOXC1蛋白的表達陽性率可平均下降35%以上，尤其是在短期內病情進展速度較快或者遠期病死率較高的卵巢癌患者中，FOXC1下降則更加明顯。從免疫組化染色結果可見，在癌細胞異型性較為明顯的區域，FAT4和YAP1蛋白的染色強度也較深，進一步說明相關細胞因子對于卵巢癌細胞的形態特征的影響。在探討FOXC1、FAT4及YAP1的表達與卵巢癌患者臨床病理特征的關系中發現，在臨床分期和癌細胞分化程度較低或是發生了淋巴結轉移的患者中，FOXC1的表達均下降顯著，說明FOXC1的表達與卵巢癌患者的臨床病理特征密切相關，這主要于FOXC1的表達缺失能夠導致癌細胞細胞成熟障礙有關，促進了癌細胞的浸潤和粘附過程；中低分化及有淋巴結轉移患者FAT4、YAP1蛋白陽性表達率較高，同時在臨床分期較晚的患者中，YAP1蛋白的表達陽性率可進一步的升高，說明相關指標與卵巢癌病情的關系，臨床上可以通過隨訪FAT4及YAP1的表達，進而評估卵巢癌的病情。相關分析研究也可見[18-20]，FOXC1、FAT4及YAP1的表達具有顯著的相關性，這表明某些指標在影響卵巢上皮細胞惡性腫瘤的病變過程中起著重要的作用。

總之，FOXC1的表達在卵巢癌患者中明顯下降，FAT4與YAP1的表達則明顯升高，此外相關指標的表達與卵巢癌患者臨床分期、癌細胞分化程度或者淋巴結轉移密切相關。