蛋氨酸銅對2～4月齡長毛兔生產性能、血清生化指標及血清含銅酶活性的影響

張永翠 王恩玲* 嚴俊麗 伏桂華 王宇文 譚清元 梁啟軍 楊 磊 解紅梅**

(1.山東畜牧獸醫職業學院，濰坊 261061；2.諸城市龍都畜牧獸醫站，諸城 262200；3.臨沂市郯城縣廟山鎮畜牧獸醫站，臨沂 276000)

銅元素作為動物生長必需的微量元素之一，能夠增強動物體的造血功能、促進有機物的代謝和生長繁殖、維護動物的毛發正常生長和色澤、增強機體抵抗力[1]，在毛皮動物飼糧中添加一定量的銅可以提高其生長性能和毛皮品質[2-3]。飼糧中添加適宜水平的銅有利于提高動物的生長性能和營養物質消化率，并且不同銅源的促生長效果存在差異[4-5]。目前，在動物生產中銅的添加形式主要有無機銅、有機銅2種。無機銅是飼糧中銅元素的主要添加形式，但是由于無機銅的吸收利用率低，導致高劑量添加銅成為畜禽養殖中的普遍現象[6]。高劑量的銅不但危害動物自身健康，而且最終會沉積到畜禽產品中，過量的銅還會隨排泄物進入土壤和水源，對生態環境造成極大破壞[7-8]。有機銅以蛋氨酸銅應用較為廣泛，其具有利用率高、穩定性好的特點，轉運吸收不需要額外的配位反應，節省了小腸的載體蛋白，減少了與鋅、鐵等離子的競爭拮抗反應，減少能量的損耗[9-10]。我國農業農村部發布的第2625號公告《飼料添加劑安全使用規范》已經對動物飼糧中銅的添加量作出進一步限制，其中規定肉兔配合飼料或全混合日糧中，銅的最高限量為25 mg/kg(包含飼料原料本底值)。蛋氨酸銅在畜禽飼糧中的應用研究已經比較廣泛，但其在長毛兔飼糧中的應用研究較少且研究結論不盡相同。因此，本試驗在長毛兔飼糧中添加不同水平的蛋氨酸銅，研究其對2～4月齡長毛兔生產性能、血清生化指標、血清含銅酶活性及內臟發育情況的影響，探討2～4月齡長毛兔對蛋氨酸銅形式銅的需要量，旨在為我國長毛兔飼養中蛋氨酸銅的應用提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 試驗動物及分組

選用180只剛剪完胎毛的2月齡蒙陰長毛兔，隨機分為6組，每組10個重復，每個重復3只試驗兔。試驗兔要求體重差異不顯著(P>0.05)、公母各1/2、健康狀況良好，并采取驅蟲保健、疫苗接種等必要的抗病防疫措施。試驗兔舍自然通風、采光，于每天06:00、18:00飼喂，自由采食，自由飲水。預試期7 d，正試期53 d。

1.2 試驗飼糧及試驗設計

基礎飼糧參照中華人民共和國標準(審定稿1994)安哥拉毛兔飼養標準配制，其組成及營養水平見表1。以蛋氨酸銅(蛋氨酸銅中銅含量為17.1%，蛋氨酸含量為78.5%)為銅源，在基礎飼糧中分別添加0、10、20、40、80及160 mg/kg銅，配制6種試驗飼糧，試驗飼糧中銅含量的實測值分別為2.65、12.53、21.38、41.82、83.11及159.37 mg/kg。用環模制粒機將飼糧壓成直徑4 mm的顆粒飼料，通風避光處保存備用。

表1 基礎飼糧組成及營養水平(風干基礎)

1.3 樣品的采集與制備

正試期結束后，試驗兔空腹稱重記為宰前活重。每組隨機抽取6只試驗兔，心臟采血10 mL，離心機以3 000 r/min離心10 min，分離所得血清分裝于離心管中，置于-20 ℃冷凍保存，用于血清生化指標、血清含銅酶活性以及鈣、磷含量的測定。

1.4 測定指標與方法

1.4.1 生產性能指標

記錄試驗正式開始時試驗兔體重和試驗結束時試驗兔的體重，統計試驗期間(不包括預試期)的喂料量，計算平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。

試驗結束后，對長毛兔剪毛，稱取實際剪毛的重量，并記錄為產毛量。兔毛直徑采用光學纖維直徑分析儀和纖維投影儀進行測定。

將試驗兔用頸椎錯位法致死、屠宰，剝離內臟器官并稱重。剝離皮張，用于測定皮張面積，量取肩部、腰部、臀部長度，取平均值為皮張寬度，量取頸部中間至尾根長度，為皮張長度，計算皮張面積。

1.4.2 血清生化指標

血清總蛋白(total protein，TP)、白蛋白(albumin，ALB)、球蛋白(globulin，GLB)、尿素氮(urea nitrogen，UN)含量采用日本和光純藥工業株式會社提供的試劑盒，在日立7180型全自動生化儀上進行測定，白球比(albumin/globulin ratio，A/G)為ALB與GLB含量的比值。

1.4.3 血清含銅酶活性

血清銅鋅超氧化物歧化酶(copper/zinc-superoxide dismutase，Cu-Zn SOD)和銅藍蛋白(ceruloplasmin，CP)活性采用南京建成生物工程研究所生產的試劑盒，在UV762型紫外分光光度計上測定吸光度值后，按照試劑盒說明計算得出。

1.4.4 血清鈣、磷含量

血清鈣、磷含量采用日立7180型全自動生化分析儀進行測定。

1.4.5 內臟器官發育

試驗結束后，空腹稱量試驗兔體重，為宰前活重；剝離肝臟、心臟、腎臟、脾臟并稱重，并根據以下公式計算內臟器官指數：

肝臟指數=肝臟重量(g)/宰前活重(kg)；心臟指數=心臟重量(g)/宰前活重(kg)；腎臟指數=腎臟重量(g)/宰前活重(kg)；脾臟指數=脾臟重量(g)/宰前活重(kg)。

1.5 數據處理與分析

采用SPSS 13.0軟件的單因素方差分析程序對試驗數據進行方差分析，并采用Duncan氏法進行多重比較檢驗，試驗數據用平均值±標準誤表示，P<0.05表示組間差異顯著。

2 結果與分析

2.1 蛋氨酸銅對2～4月齡長毛兔生產性能的影響

由表2可知，各組試驗兔的初始體重無顯著差異(P>0.05)。銅添加量對試驗兔的ADFI無顯著影響(P>0.05)。銅添加量為40 mg/kg時ADG最高，F/G最低，但與銅添加量為20、80 mg/kg時無顯著差異(P>0.05)。銅添加量對試驗兔的產毛量、毛直徑、皮張面積均無顯著影響(P>0.05)。隨銅添加量的增加，產毛量、皮張面積呈現先升高后降低的趨勢。

表2 蛋氨酸銅對2～4月齡長毛兔生產性能的影響

2.2 蛋氨酸銅對2～4月齡長毛兔血清生化指標的影響

由表3可知，銅添加量對對2～4月齡長毛兔血清TP、ALB、GLB、UN含量及A/G均無顯著影響(P>0.05)。隨著銅添加量的增加，血清GLB呈含量先升高后降低的趨勢。

表3 蛋氨酸銅對2～4月齡長毛兔血清生化指標的影響

2.3 蛋氨酸銅對2～4月齡長毛兔血清含銅酶活性的影響

由表4可知，銅添加量對血清Cu-Zn SOD活性的影響顯著(P<0.05)，銅添加量為20 mg/kg時血清Cu-Zn SOD活性最高，為69.33 U/mL，顯著高于銅添加量為0和10 mg/kg時(P<0.05)，與銅添加量為40、80和160 mg/kg時差異不顯著(P>0.05)。銅添加量對血清CP活性的影響顯著(P<0.05)。銅添加量為20 mg/kg時血清CP活性最高，為227.30 U/L，顯著高于銅添加量為0、40和80 mg/kg時，與銅添加量為10、160 mg/kg時差異不顯著(P>0.05)。

表4 蛋氨酸銅對2～4月齡長毛兔血清含銅酶活性的影響

2.4 蛋氨酸銅對2～4月齡長毛兔血清鈣、磷含量的影響

由表5可知，銅添加量對2～4月齡長毛兔血清鈣、磷含量無顯著影響(P>0.05)。

表5 蛋氨酸銅對2～4月齡長毛兔血清鈣、磷含量的影響

2.5 蛋氨酸銅對2～4月齡長毛兔內臟器官發育的影響

由表6可知，銅添加量對2～4月齡長毛兔肝臟指數、腎臟指數、心臟指數、脾臟指數均無顯著影響(P>0.05)。

表6 蛋氨酸銅對2～4月齡長毛兔內臟器官發育的影響

3 討 論

3.1 蛋氨酸銅對2～4月齡長毛兔生產性能的影響

一般來講，有機微量元素的吸收利用率要高于無機微量元素。Mcdowell[11]研究指出，動物對飼糧中不同銅源的吸收率有差異。晏家友等[12]研究表明，飼糧中添加甘氨酸銅可提高肉兔的ADG，較對照組提高15.63%。對于毛皮動物，在水貂[13]、藍狐[14]、銀狐[15-16]的研究中發現，與硫酸銅相比，氨基酸銅的相對利用率分別為113.41%、127.91%、116.46%，氨基酸銅能更好地被動物吸收利用。本試驗表明，以蛋氨酸銅為銅源，長毛兔飼糧中添加量為20 mg/kg時，ADG比對照組提高54.78%，比10 mg/kg組提高19.37%，與上述研究基本一致。

白玉妍等[17]研究表明，蛋氨酸酮對烏蘇里貉對針毛、絨毛長度和細度無顯著影響，但0號皮和Ⅰ級皮的數量要比對照組分別高出9.24%和4.06%，說明在烏蘇里貉飼糧中添加蛋氨酸銅可提高毛皮質量。本試驗中，蛋氨酸銅對2～4月齡長毛兔的產毛量、毛直徑、皮張面積均無顯著影響，與上述研究結果一致。其原因可能是因為銅元素作為酪氨酸酶的合成酶，影響黑色素的形成[18]，銅元素主要在加深毛色方面起著重要作用，而在毛直徑、產毛量方面的影響較小。隨著銅添加量的增加，產毛量先提高后降低，其原因是銅添加量增加后長毛兔的體重及皮張面積增大，所以產毛量有所提高；但隨銅添加量繼續提高，長毛兔體重降低，皮張面積減少，產毛量降低。

3.2 蛋氨酸銅對2～4月齡長毛兔血清生化指標的影響

血液中的TP由ALB和GLB組成。本試驗中試驗兔血清TP、ALB、GLB含量都與正常值接近，提示飼糧中營養成分充足，長毛兔的免疫力較強，銅添加量對免疫性能的影響不大。血液中的尿素是蛋白質分解的最終產物[19]，通過鳥氨酸循環合成，是反映蛋白質代謝的重要指標，在飼糧蛋白質含量穩定的情況下，血清中UN含量也比較穩定。本試驗結果表明，銅添加量對血清UN含量無顯著影響，說明在長毛兔的蛋白質代謝過程中銅對蛋白質的利用率并無促進作用。

3.3 蛋氨酸銅對2～4月齡長毛兔血清含銅酶活性的影響

含銅蛋白和含銅酶廣泛存在于自然界中。含銅蛋白和含銅酶涉及生物體內的電子傳遞、氧化還原、氧分子的運送及活化等過程。Cu-Zn SOD可以有效地除去超氧負離子，是一種很好的抗氧化劑，從而起到防止老化、抑制腫瘤發生等作用。在貂、狐等動物的研究中發現，血清中Cu-Zn SOD和CP的活性與飼糧中銅含量相關，隨著飼糧中銅含量的升高，血清中Cu-Zn SOD和CP的活性呈現先升高后降低的趨勢[20-23]。本試驗研究表明，銅添加量顯著影響血清Cu-Zn SOD和CP活性，且血清Cu-Zn SOD和CP活性均以銅添加量為20 mg/kg時最高，隨后呈現降低趨勢，與上述毛皮動物中的研究結果一致。

3.4 蛋氨酸銅對2～4月齡長毛兔血清鈣、磷含量的影響

動物生長需要多種維生素和礦物元素，這些礦物元素之間可能存在拮抗的現象。郝貴增[24]研究表明，飼糧中添加125和250 mg/kg蛋氨酸銅，可使血清鋅含量顯著下降，而對血清鐵含量則無顯著影響。銅添加量對血清鈣、磷含量影響的報道較少。本試驗中，銅添加量對血清鈣、磷含量無顯著影響，說明在飼糧中添加蛋氨酸銅時，可不考慮鈣、磷添加量的問題。

3.5 蛋氨酸銅對2～4月齡長毛兔內臟器官發育的影響

動物的內臟器官重量和指數在一定程度上反映了動物機體的機能狀況，對于理論研究和生產實踐有重要的意義[25-26]。本試驗中，各組試驗兔的肝臟指數、腎臟指數、心臟指數、脾臟指數均無顯著影響，該結果表明，在以蛋氨酸銅為銅源時，20～160 mg/kg的銅添加量并不會對2～4月齡長毛兔內臟器官造成不良影響。

4 結 論

本試驗條件下，以蛋氨酸銅為銅源，飼糧中添加20～40 mg/kg銅時長毛兔有較高的ADG和血清含銅酶活性；綜合本試驗結果并考慮環保要求，推薦2～4月齡長毛兔飼糧中銅添加量為20 mg/kg。