竹葉提取物對熱應激奶牛泌乳性能及血清生化、抗氧化和免疫指標的影響

李 義 童津津 栗明月 韓思雨 趙璐宇 方洛云 蔣林樹

(北京農學院動物科學技術學院，奶牛營養學北京市重點實驗室，北京 102206)

近年來，全球變暖日益嚴重，極端高溫天氣頻發，由此產生的氣候特征表現為氣溫超過長期的平均水平、高溫天氣出現的頻率增加以及高溫天氣持續時間增長[1]。因高溫高濕天氣引發的動物熱應激對畜牧業危害巨大。奶牛是一種耐寒畏熱的動物，因其被毛密度大，散熱能力差，在高溫高濕環境下代謝產熱超過自身的散熱能力就會造成奶牛熱應激[2]。熱應激奶牛通過降低采食量來降低機體產熱，而采食量的降低和機體代謝途徑的改變造成奶牛泌乳性能降低[3]。熱應激還會造成機體的氧化應激、炎癥反應，嚴重損害奶牛健康[4-5]。當前評估奶牛熱應激常用的指標是溫濕度指數(temperature-humidity index，THI)，7289為重度熱應激[6]。

我國作為竹子的原產地，自古以來就有飲竹葉茶生津解暑的傳統[7]。竹葉提取物(bamboo leaf extract，BLE)是萃取淡竹葉得到的一種淡黃色粉末，主要活性物質是碳苷類黃酮化合物，具有顯著的抑菌效果，并能提高動物機體的抗氧化能力和免疫功能[8]。張金枝等[9]研究發現，與對照組相比，飼糧添加0.01%的竹葉黃酮可使斷奶仔豬平均日增重提高26.2%，飼料利用率提高17.7%，腹瀉率降低35.9%，經濟效益提高36.5%，證明了竹葉黃酮對仔豬生產性能有明顯的促進作用。熱應激愛拔益加(AA)肉仔雞每天補飼1.6 g/kg的竹葉提取物降低了肌肉失水率，提高了肉品質[10]。侯昆等[11]研究發現，竹葉提取物提高了患隱性乳房炎奶牛的生產性能，增強了機體抗氧化能力和免疫功能，降低了乳中體細胞數(SCC)。本實驗室前期的研究發現，在全混合日糧(TMR)中添加1.3 g/kg DM的竹葉提取物顯著提高了非熱應激奶牛的泌乳性能、抗氧化能力和免疫功能[12]。然而，竹葉提取物對熱應激奶牛泌乳性能及血清相關指標影響的研究還未見報道。因此，本試驗旨在探究竹葉提取物對熱應激奶牛泌乳性能及血清生化、抗氧化和免疫指標的影響，為竹葉提取物用于緩解奶牛熱應激提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 試驗動物及飼養管理

試驗選取24頭胎次[(3.3±0.3)胎]、體重[(559.2±37.4)kg]、產奶量[(37.6±0.8)kg/d]、泌乳天數[(185.7±16.9)d]相近的健康荷斯坦奶牛。每天07:00、13:00和18:00對奶牛進行投料，自由采食，充足飲水。牛棚內每隔5 m裝有1臺懸掛式風扇(青州市開發區潤江溫控設備廠)。在試驗期間，當環境溫度高于20 ℃時，風扇以2 m/s的速度開始運轉。在奶牛擠奶前的20 min，奶牛被統一趕到擠奶廳進行噴淋降溫。使用精準飼喂設備(Insentec公司，荷蘭)對每頭試驗牛進行單槽飼喂，通過試驗牛對應的耳標號控制飼槽開關，從而避免試驗組奶牛和對照組奶牛錯誤采食。記錄試驗牛每天的采食量。使用阿菲金自動擠奶設備(90°并排平行畜欄結構，阿菲金公司，以色列)對試驗牛每天早、中、晚擠奶3次并記錄每天的產奶量。

1.2 試驗材料

試驗所用竹葉提取物購自陜西某天然制品有限公司，其組分包括總黃酮(41.2%)、粗灰分(20.5%)、粗蛋白質(CP，13.2%)、水溶性多糖(15.4%)和其他成分(9.7%)。

1.3 試驗設計

試驗時間為2019年7—8月，在北京周邊某牛場進行。試驗階段環境溫度和相對濕度較高，日平均環境溫度為(28.3±0.1)℃，日平均環境相對濕度為(48.8±0.3)%，日平均THI為75.9±0.5，奶牛在自然條件下處于熱應激狀態。通過測定每天多個時間點的環境溫度和相對濕度并計算日平均THI，分析奶牛的熱應激程度及變化趨勢。試驗牛被隨機分為2組，每組12頭。對照組飼喂TMR，試驗組在TMR基礎上添加1.3 g/kg DM的竹葉提取物。TMR組成及營養水平見表1。試驗期35 d，其中預試期14 d，正試期21 d。

表1 TMR組成及營養水平(干物質基礎)

1.4 樣品采集與指標測定

1.4.1 TMR的采集與分析

在整個試驗階段，每周采集2次TMR，-20 ℃保存。在試驗結束后，將所有TMR樣品混合均勻，分別取樣測定DM、粗脂肪(EE)、CP、酸性洗滌纖維(ADF)、中性洗滌纖維(NDF)、粗灰分、鈣(Ca)和磷(P)含量。使用WPL-125BE型電熱恒溫干燥箱(吳江臺德烘箱電爐制造有限公司)將樣品烘至恒重，測定DM含量(方法編號：930.15，AOAC)[13]。使用SER 148/6型脂肪測定儀(香港嘉盛科技有限公司)測定EE含量(方法編號：945.16，AOAC)[13]。使用KDY-9830型凱氏定氮儀(深圳市科拓電子有限公司)測定CP含量(方法編號：945.16，AOAC)[13]。使用2000i型脂肪分析儀(安康科技有限公司，美國)測定ADF和NDF含量。使用SX2-2.5-12A型馬弗爐(上海柏欣儀器設備廠)測定粗灰分含量(方法編號：942.05，AOAC)[13]。使用UV752N型分光光度計(上海佑科儀器儀表有限公司)，采用比色法測定P含量。使用PinAAcle500型原子吸收光譜分析儀(珀金埃爾默有限公司，美國)測定Ca含量。

1.4.2 牛舍THI的測定

使用ST-172型溫濕度記錄儀(創立科技環球有限公司，美國)在24 h內，每隔15 min記錄1次環境溫度和相對濕度，并計算日平均THI。THI的計算公式[6]為：

THI=0.81Td+(0.99Td-14.37)RH+46.3。

式中：Td為環境溫度(℃)；RH為環境相對濕度(%)。

1.4.3 奶牛直腸溫度和呼吸頻率的測定

在正試期第1、11、21天，使用獸用直腸體溫計(鄭州豪潤齊電子科技有限公司)測定奶牛06:00、14:00、22:00的直腸溫度，并計算日平均值。在測定直腸溫度后，使用秒表和計數器測定1 min時間內奶牛的腹部和胸廓起伏次數作為呼吸頻率，測定2次并取平均值。

1.4.4 奶樣的采集與處理

在正試期第1、11、21天，采集每頭試驗牛早、中、晚的奶樣。擠奶前擦干凈乳房，棄去頭3把奶，使用DHI奶樣瓶采集奶樣。將早、中、晚的奶樣按照4∶3∶3的比例混合，得到50 mL的待測奶樣，加入2-溴-2-硝基-1,3-丙二醇作為防腐劑，進行乳成分分析。使用FTA型乳成分分析儀(Delta公司，荷蘭)對奶樣中乳蛋白率、乳脂率、乳糖率及SCC進行分析。

1.4.5 血樣的采集與處理

在正試期第1、11、21天，奶牛晨飼前30 min采集奶牛血樣。通過尾靜脈采血法將血樣采集到規格為10 mL的血清分離膠真空采血管(上海康德萊有限公司)中。使用Sorvall MTX 150型臺式離心機(賽默飛世爾科技有限公司，美國)將采集到的血樣在4 ℃下3 000×g離心15 min得到血清樣本。將血清分裝到2 mL的凍存管中-80 ℃保存備用。

1.4.6 血清生化指標的測定

按照試劑盒(南京建成生物工程研究所)操作步驟，采用放射免疫分析法測定血清三碘甲狀腺原氨酸(T3)和甲狀腺素(T4)含量；使用GF-D200型全自動生化分析儀(山東彩虹分析儀器有限公司)測定血清乳酸脫氫酶(LDH)活性及葡萄糖(GLU)、游離脂肪酸(NEFA)含量；按照試劑盒(南京建成生物工程研究所)操作步驟，采用酶聯免疫吸附法(ELISA)測定血清糖皮質激素(GC)、腎上腺素(EPI)和前列腺素-2(PGE-2)含量。

1.4.7 血清抗氧化指標的測定

按照試劑盒(南京建成生物工程研究所)操作步驟，對血清丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性進行檢測。

1.4.8 血清免疫指標的測定

按照試劑盒(南京建成生物工程研究所)操作步驟，采用ELISA對血清干擾素-γ(IFN-γ)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素-1(IL-1)、白細胞介素-1β(IL-1β)、白細胞介素-2(IL-2)、白細胞介素-6(IL-6)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)和免疫球蛋白M(IgM)含量進行檢測。

1.5 數據統計分析

使用SPSS 23.0軟件對奶牛呼吸頻率、直腸溫度、干物質采食量、泌乳性能和血清指標進行交叉分組的雙因素方差分析，采用Duncan氏法進行多重比較。試驗數據用平均值和均值標準誤(SEM)表示，P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著，0.05

2 結 果

2.1 試驗期日平均THI的變化趨勢

如圖1所示，從預試期第7天開始，日平均THI均大于72，即奶牛進入熱應激狀態。在正試期第5天到第19天奶牛處于中度熱應激狀態，且日平均THI表現為先增后減的變化趨勢，正試期第11天日平均THI最高(86.5)。

圖1 牛舍日平均THI變化曲線

2.2 竹葉提取物對熱應激奶牛呼吸頻率和直腸溫度的影響

由表2可知，試驗組熱應激奶牛的呼吸頻率極顯著低于對照組(P<0.01)，直腸溫度與對照組相比有降低的趨勢(P=0.09)。

表2 竹葉提取物對熱應激奶牛呼吸頻率和直腸溫度的影響

隨著奶牛熱應激狀態的持續，第11天(THI=86.5)的呼吸頻率極顯著高于第1(THI=73.5)、21天(THI=74.8)(P<0.01)；而第1、11、21天的直腸溫度無顯著差異(P>0.05)。

2.3 竹葉提取物對熱應激奶牛干物質采食量和泌乳性能的影響

由表3可知，試驗組熱應激奶牛的產奶量和乳脂率極顯著高于對照組(P<0.01)，乳中SCC與對照組相比有降低的趨勢(P=0.09)，但干物質采食量、乳蛋白率和乳糖率與對照組無顯著差異(P>0.05)。

表3 竹葉提取物對熱應激奶牛干物質采食量和泌乳性能的影響

隨著奶牛熱應激狀態的持續，干物質采食量極顯著降低后又極顯著升高(P<0.01)；第11、21天的產奶量極顯著低于第1天(P<0.01)；第11天的乳脂率顯著高于第1天(P<0.05)；第1、11、21天的乳蛋白率、乳糖率和乳中SCC差異不顯著(P>0.05)。

2.4 竹葉提取物對熱應激奶牛血清生化指標的影響

由表4可知，試驗組熱應激奶牛的血清腎上腺素含量極顯著高于對照組(P<0.01)，血清前列腺素-2含量顯著高于對照組(P<0.05)，血清游離脂肪酸含量與對照組相比有升高的趨勢(P=0.06)，但血清糖皮質激素、三碘甲狀腺原氨酸、甲狀腺素、葡萄糖含量及乳酸脫氫酶活性與對照組無顯著差異(P>0.05)。

表4 竹葉提取物對熱應激奶牛血清生化指標的影響

隨著奶牛熱應激狀態的持續，血清三碘甲狀腺原氨酸含量極顯著升高(P<0.01)，血清甲狀腺素含量極顯著降低(P<0.01)；第11、21天的血清乳酸脫氫酶活性極顯著高于第1天(P<0.01)；第11、21天的血清葡萄糖含量極顯著低于第1天(P<0.01)；第1、11、21天的血清糖皮質激素、腎上腺素和游離脂肪酸含量差異不顯著(P>0.05)。

2.5 竹葉提取物對熱應激奶牛血清抗氧化指標的影響

由表5可知，試驗組熱應激奶牛的血清超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過氧化氫酶活性極顯著高于對照組(P<0.01)，血清丙二醛含量極顯著低于對照組(P<0.01)。

表5 竹葉提取物對熱應激奶牛血清抗氧化指標的影響

隨著奶牛熱應激狀態的持續，血清丙二醛含量極顯著升高后又極顯著降低(P<0.01)；第11天的血清超氧化物歧化酶活性極顯著低于第1天(P<0.01)；第11、21天的血清谷胱甘肽過氧化氫酶活性極顯著低于第1天(P<0.01)。

2.6 竹葉提取物對熱應激奶牛血清免疫指標的影響

由表6可知，試驗組熱應激奶牛的血清TNF-α和IL-2含量極顯著高于對照組(P<0.01)，血清IL-1和IL-1β含量極顯著低于對照組(P<0.01)，血清IgA含量顯著高于對照組(P<0.05)，血清IgG含量與對照組相比有升高的趨勢(P=0.08)，但血清IFN-γ、IL-6和IgM含量與對照組無顯著差異(P>0.05)。

表6 竹葉提取物對熱應激奶牛血清免疫指標的影響

隨著奶牛熱應激狀態的持續，血清IFN-γ含量極顯著升高(P<0.01)，血清TNF-α(P=0.06)、IL-1β(P=0.09)和IgG含量(P=0.09)有降低的趨勢；第11、21天的血清IL-6含量極顯著高于第1天(P<0.01)；第21天的血清IL-2含量極顯著低于第1天(P<0.01)；第11天的血清IL-1含量顯著高于第1天(P<0.01)；第21天的血清IgA含量顯著高于第1天(P<0.05)；第1、11、21天的血清IgM含量無顯著差異(P>0.05)。

3 討 論

3.1 竹葉提取物對熱應激奶牛生理指標、泌乳性能及血清生化指標的影響

3.1.1 竹葉提取物對熱應激奶牛呼吸頻率和直腸溫度的影響

本研究發現，飼糧添加竹葉提取物顯著降低了熱應激奶牛的呼吸頻率，有降低熱應激奶牛直腸溫度的趨勢，緩解了因熱應激引起的機體穩態失衡。呼吸頻率和直腸溫度是反映奶牛熱應激最直觀的生理指標[14]。奶牛處于熱應激時，首先通過增加呼吸頻率來增加散熱；當奶牛無法通過呼吸散失體內多余熱量時，就會導致奶牛體溫升高，誘發炎癥反應并造成機體代謝紊亂[15]。劉德義等[16]研究發現，熱應激奶牛補飼大豆黃酮可以降低呼吸頻率和直腸溫度，并改善奶牛機體代謝。此外，竹葉提取物可以增加大鼠血清中甘油三酯、高密度脂蛋白含量，促進血管擴張和機體散熱，增強心肌收縮能力，從而調節呼吸頻率[17]。然而，竹葉提取物在反芻動物中的研究報道較少。本研究中，飼糧添加竹葉提取物降低了奶牛的呼吸頻率和直腸溫度，可能是竹葉提取物通過改善奶牛代謝水平，增強了機體散熱能力。研究表明，腎上腺素通過興奮支氣管平滑肌β2受體舒張支氣管從而改善通氣功能[18]。在本研究中，飼糧添加竹葉提取物顯著提高了熱應激奶牛血清腎上腺素含量，對緩解熱應激奶牛呼吸頻率的升高起到積極作用。

3.1.2 竹葉提取物對熱應激奶牛干物質采食量和泌乳性能的影響

本研究中，飼糧添加竹葉提取物在不影響干物質采食量的情況下，極顯著提高了熱應激奶牛的產奶量和乳脂率，并有降低乳中SCC的趨勢，緩解了因熱應激造成的奶牛泌乳性能下降。研究表明，熱應激刺激奶牛的厭食中樞，通過降低采食量降低自身代謝產熱；熱應激奶牛增加了飲水量和呼吸頻率，這對采食量和采食時間同樣產生不利影響[3]。然而，因采食量降低造成的熱應激奶牛能量負平衡以及熱應激奶牛機體對營養物質的重分配造成了奶牛泌乳性能的降低[19]。本研究使用的竹葉提取物主要活性成分是黃酮類化合物，大量研究表明，黃酮類化合物能夠提高奶牛生產性能。例如，Zhan等[20]對奶牛補飼苜蓿黃酮，提高了奶牛的抗氧化能力和機體免疫力，并提高了奶牛的泌乳性能。奶牛飼喂富含黃酮類化合物的葡萄提取物降低了肝臟炎癥反應和內質網應激，并在不影響干物質采食量的情況下提高了產奶量[21]。侯昆等[11]對患有隱性乳房炎的奶牛補飼竹葉黃酮，提高了奶牛的產奶性能，增強了機體的抗氧化能力和免疫功能。本研究中，飼糧添加竹葉提取物在不影響干物質采食量的情況下極顯著提高了熱應激奶牛的產奶量和乳脂率，有降低乳中SCC的趨勢，這與前人的研究結果基本一致。值得注意的是，盡管飼糧添加竹葉提取物顯著提高了熱應激奶牛的產奶量，但是，與試驗初期奶牛的平均產奶量相比，飼糧添加竹葉提取物無法完全消除因熱應激造成的產奶量下降。本研究發現，隨著奶牛熱應激狀態的持續，干物質采食量先下降后升高，產奶量變化趨勢與干物質采食量一致，它們與整個試驗階段THI的變化趨勢呈負相關關系。盡管飼糧添加竹葉提取物提高了熱應激奶牛的產奶量和乳品質，但無法完全消除因熱應激造成的泌乳性能下降。

3.1.3 竹葉提取物對熱應激奶牛血清生化指標的影響

本研究發現，飼糧添加竹葉提取物通過提高腎上腺素含量促進葡萄糖和游離脂肪酸的合成，并被大量用于牛奶和乳脂的合成，從而提高了熱應激奶牛的泌乳性能。有研究表明，熱應激信號促進丘腦-垂體-腎上腺皮質軸(hypothalamic-pituitary-adrenal axis，HPA軸)的激活，使下丘腦合成促腎上腺皮質激素釋放激素(CRH)，進一步刺激垂體前葉釋放促腎上腺皮質激素(ACTH)[22]。ACTH激活腎上腺皮質細胞，合成并釋放糖皮質激素來增強靶器官的功能，緩解奶牛熱應激[23]。然而，當奶牛在長期熱應激狀態下，HPA軸受損，其功能減弱，腎上腺功能處于抑制狀態，腎上腺素分泌減少，奶牛血清中的促腎上腺皮質激素和皮質醇含量就會降低[24]。本研究中，飼糧添加竹葉提取物增加了血清糖皮質激素含量，但差異不顯著；值得注意的是，飼糧添加竹葉提取物顯著增加了血清腎上腺素含量，這表明竹葉提取物緩解了奶牛在長期熱應激狀態下對HPA軸的損傷。腎上腺素作為腎上腺髓質的主要激素，能促進熱應激奶牛的心肌收縮，改善心肌血清供應，提高機體代謝和耗氧量，提高血清葡萄糖含量，并激活甘油三酯酶，加速脂肪分解，使血清中游離脂肪酸含量升高，進而促進乳脂合成[25]。本研究中，飼糧添加竹葉提取物有提高血清游離脂肪酸含量的趨勢；提高了血清葡萄糖含量，但差異不顯著。結合本研究中竹葉提取物對泌乳性能的影響，我們推測，盡管飼糧添加竹葉提取物顯著提高了血清腎上腺素含量，并促進了血清葡萄糖和游離脂肪酸的產生，但血清葡萄糖和游離脂肪酸作為乳合成的前體物質被大量用于牛奶和乳脂的合成，提高了熱應激奶牛的泌乳性能。因此，本研究結果表明，飼糧添加竹葉提取物可以通過調節熱應激奶牛血清激素含量，改善熱應激奶牛的機體代謝失衡，進而緩解因熱應激造成的奶牛泌乳性能下降。

本研究發現，隨著奶牛熱應激狀態的持續，血清三碘甲狀腺原氨酸含量極顯著升高，血清甲狀腺素含量極顯著下降，這體現了奶牛在持續熱應激狀態下的一種減少機體代謝產熱的自我調控機制。研究表明，當奶牛處于熱應激狀態時，刺激機體代謝加快，三碘甲狀腺原氨酸需求量及甲狀腺素轉化為三碘甲狀腺原氨酸的效率升高，糖皮質激素分泌活動增強，同時，甲狀腺素的下降限制了熱應激奶牛代謝產熱[26]。此外，熱應激條件下，由于奶牛碳水化合物代謝的改變，降低了奶牛的血清葡萄糖含量，而葡萄糖作為牛奶合成的前體物，其含量的降低是導致熱應激奶牛產奶量下降的原因之一[27]。本研究中，隨著持續熱應激的發生，奶牛血清葡萄糖含量和產奶量都降低了，而血清葡萄糖含量的降低可能與血清乳酸脫氫酶活性的極顯著升高有關。有研究表明，乳酸脫氫酶是糖酵解中無氧酵解的關鍵酶，熱應激奶牛為了保證中樞神經、心臟等重要器官的供氧，致使其他組織采取無氧酵解的方式供能[28]。熱應激奶牛在通過乳酸脫氫酶進行糖酵解的過程中消耗大量葡萄糖，但只產生少量ATP，使機體不過度產熱；此外，乳酸脫氫酶將葡萄糖或者糖原分解為乳酸，增加了糖異生的底物，從而促進了機體的糖異生[29]。此外，乳酸脫氫酶活性增加又會造成動物機體肝功能障礙，對機體健康產生負面影響[30]。而本研究中，飼糧添加竹葉提取物降低了血清乳酸脫氫酶活性，但差異不顯著。

3.2 竹葉提取物對熱應激奶牛血清抗氧化和免疫指標的影響

3.2.1 竹葉提取物對熱應激奶牛血清抗氧化指標的影響

奶牛氧化應激是指奶牛機體氧化作用超過抗氧化作用，導致自由基動態穩衡失衡并造成炎癥細胞浸潤，產生大量的氧化中間產物[31]。研究表明，丙二醛是膜脂過氧化最重要的產物之一，熱應激奶牛血清中丙二醛含量的上升造成了奶牛的膜系統損傷[32]。超氧化物歧化酶是奶牛體內抗氧化酶系的重要組成成員，它能催化超氧陰離子自由基歧化生成氧和過氧化氫，提高機體的抗氧化能力，而谷胱甘肽過氧化氫酶是一種重要的過氧化物分解酶，它能催化還原型谷胱甘肽(GSH)變為氧化型谷胱甘肽(GSSG)，使有毒的過氧化物還原成無毒的羥基化合物，從而保護細胞膜的結構及功能不受損害，熱應激造成了奶牛體內超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過氧化氫酶活性的降低，使得機體清除自由基的能力下降，過氧化物大量沉積，損傷細胞膜結構[4-5]。本研究中，隨著奶牛熱應激狀態的持續，血清丙二醛含量極顯著升高后又極顯著降低，表明丙二醛與THI有明顯的正相關性且反應較為敏感。第11天的血清超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過氧化氫酶活性極顯著低于第1天，表明熱應激導致奶牛持續性的抗氧化能力降低。

本研究結果表明，飼糧添加竹葉提取物降低了熱應激奶牛血清中丙二醛含量，提高了血清超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過氧化氫酶活性，提高了熱應激奶牛的抗氧化能力，起到了緩解奶牛熱應激的作用。竹葉黃酮作為竹葉提取物的主要活性成分，其苯環上具有羥基且支鏈包含碳碳雙鏈，具有明顯的還原性，可以有效分解動物機體因熱應激產生的氧化產物，并提高抗氧化酶活性[33]。Yu等[34]研究表明，通過細胞試驗，竹葉提取物能夠干預叉頭框轉錄因子O(FoxO)信號通路啟動，從而緩解HepG2細胞氧化應激。栗明月等[12]在飼糧中添加竹葉提取物顯著降低了奶牛血清丙二醛含量，并顯著提高了血清超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過氧化氫酶活性。本研究結果顯示，飼糧添加竹葉提取物極顯著提高了血清超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過氧化氫酶活性，并極顯著降低了血清丙二醛含量，表明竹葉提取物能提高熱應激奶牛的抗氧化能力，進而緩解奶牛熱應激。

3.2.2 竹葉提取物對熱應激奶牛血清免疫指標的影響

本研究中，隨著奶牛熱應激狀態的持續，血清IFN-γ含量極顯著升高，而IFN-γ具有調節T細胞輔助細胞分化的作用，與抗炎因子白細胞介素-4(IL-4)相互拮抗[35]，IFN-γ的表達上調會增強機體的炎癥反應，損害奶牛健康。Baldassarre等[36]研究發現，熱應激肉牛血清IFN-γ含量顯著升高并誘發了機體的炎癥反應。奶牛熱應激狀態下血清IL-1和IL-1β含量顯著增加，并作用于神經遞質，誘發厭食反應，抑制瘤胃蠕動，進而降低奶牛產奶量[37]。本研究結果表明，隨著奶牛熱應激狀態的持續，血清IL-1含量升高，但血清IL-1β含量有降低的趨勢。Zhan等[20]研究發現，苜蓿黃酮能夠顯著降低熱應激奶牛的血清IL-1和IL-1β含量，并提高產奶量。本研究中，飼糧添加竹葉提取物同樣極降低了熱應激奶牛血清IL-1和IL-1β含量，降低了熱應激奶牛機體的炎癥反應，并提高了泌乳性能。

IL-2可以刺激T細胞分裂，增強T細胞的殺傷活性，促進NK細胞增殖，促進細胞分泌TNF-α[38]。在本研究中，隨著奶牛熱應激狀態的持續，血清IL-2含量降低，這可能會抑制免疫細胞的增殖，降低熱應激奶牛的免疫功能。而本研究中，飼糧添加竹葉提取物極顯著提高了熱應激奶牛血清IL-2含量，緩解了熱應激造成的奶牛免疫能力下降；飼糧添加葉提取物極顯著提高了熱應激奶牛血清TNF-α含量，這可能與IL-2含量的增加有關。研究表明，TNF-α可以作用于中樞神經系統，促進HPA軸的激活，有利于動員能量和保持內環境穩定[39]。Strong等[40]研究發現，熱應激提高了犢牛TNF-α的mRNA表達水平，促進了HPA軸的激活，進而緩解了熱應激引起的代謝紊亂。B淋巴細胞增殖分化產生特異性免疫球蛋白參與免疫反應，從而提高機體的抗菌、抗病毒能力，而IgA是血清中含量僅次于IgG的一種免疫球蛋白，它能與Fc受體相互作用引起巨噬細胞和中心粒細胞的吞噬作用。本研究結果表明，飼糧添加竹葉提取物顯著提高了熱應激奶牛血清IgA含量，從而提高了熱應激奶牛的抗炎能力。研究表明，奶牛飼喂大豆黃酮同樣能顯著增加血清和乳汁中IgA含量，提高機體免疫力和乳品質[41]。綜上所述，飼糧添加竹葉提取物能通過提高血清TNF-α含量促進HPA軸的激活，緩解代謝紊亂，并通過降低炎性因子含量和增加免疫球蛋白含量，提高機體免疫功能。

4 結 論

飼糧中添加1.3 g/kg DM的竹葉提取物可以降低熱應激奶牛呼吸頻率和直腸溫度，提高熱應激奶牛的產奶量和乳脂率，緩解熱應激奶牛機體的代謝紊亂，提高機體的抗氧化能力，改善機體的免疫功能。

致謝：

感謝北京奶牛中心延慶基地良種場對試驗提供的重要幫助。