獻(xiàn)血者紅細(xì)胞意外抗體檢出率、反應(yīng)強(qiáng)度和特異性分析

朱紅芹 林紅

獻(xiàn)血者血液中的意外抗體可導(dǎo)致獻(xiàn)血者血型鑒定困難、醫(yī)院交叉配血不合，甚至可引起溶血性輸血反應(yīng)。《全血和成分血使用》（WS/T 623-2018）中規(guī)定血漿及冷沉淀凝血因子的輸注原則之一為獻(xiàn)血者意外抗體篩查陰性可直接進(jìn)行ABO相容性輸注。意外抗體篩查工作是在血站進(jìn)行還是在醫(yī)院進(jìn)行，并未做出明確規(guī)定。現(xiàn)將近3年來本中心無償獻(xiàn)血者意外抗體檢出、反應(yīng)強(qiáng)度和特異性等進(jìn)行分析，研究制定獻(xiàn)血者意外抗體篩查策略，現(xiàn)報告如下。

材料與方法

1 研究對象 2017年01月～2019年12月本中心捐獻(xiàn)血液的18～60周歲無償獻(xiàn)血者作為研究對象，共201741人捐獻(xiàn)血液，血液標(biāo)本294321份。

2 儀器與試劑 伽利略Galileo NEO全自動血型儀（美國Medson公司），光學(xué)顯微鏡(日本Olympus公司)，卡式孵育箱（瑞士DiaMed公司）、卡式離心機(jī)（瑞士DiaMed公司）。抗-A、抗-B（美國Immucor公司、長春博德生物技術(shù)有限公司、上海血液生物醫(yī)藥有限公司）、抗-AB(荷蘭Sanquin公司)、ABO試劑紅細(xì)胞（美國Immucor公司、上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司）；抗-D (美國Immucor公司、上海潤普生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司、美國BioRad公司)、抗-C、抗-E(英國Millipore公司)、D2(荷蘭Sanquin公司)、D3(美國Immucor公司)、D4（上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司）；篩選細(xì)胞、國產(chǎn)譜細(xì)胞、抗-M、抗-N、抗-P1、抗-H、抗-IgG、C3d（上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司）；進(jìn)口譜細(xì)胞（美國Medson公司、荷蘭Sanquin公司）；微柱凝膠卡（西班牙Diagnostic Grifols公司、瑞士DiaMed公司）等，所有試劑均在有效期內(nèi)使用。

3 方法

3.1 血型定型方法：使用伽利略全自動血型儀U型微板法進(jìn)行ABO血型正、反定型（加O型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞）、RhD定型。

3.2 意外抗體確認(rèn)和抗體特異性鑒定方法：確認(rèn)RhD陰性、ABO正反定型不符、O細(xì)胞凝集及醫(yī)院反饋有意外抗體的血液標(biāo)本，使用篩選細(xì)胞和/或譜細(xì)胞試管法鹽水立即離心（IS）、4℃增強(qiáng)、37℃孵育、間接抗球蛋白試驗(yàn)（IAT）確認(rèn)及鑒定。對檢出特異性意外抗體的紅細(xì)胞進(jìn)行抗原確認(rèn)，通過自身對照排除自身抗體存在。

4 統(tǒng)計學(xué)處理 方法應(yīng)用SPSS 23. 0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。計數(shù)資料比較采用卡方檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

1 不同性別意外抗體的檢出率比較 2017～2019年共有201741人次（重復(fù)獻(xiàn)血多次只算1人次）獻(xiàn)血，587人檢出意外抗體，檢出率0.29%。男性獻(xiàn)血者意外抗體檢出率為0.22%，與女性獻(xiàn)血者0.40%相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=48.325，P＜0.05）。RhD陰性獻(xiàn)血總?cè)藬?shù)1272人，檢出意外抗體20人，檢出率1.57%；同樣地，女性意外抗體檢出率（3.16%）高于男性獻(xiàn)血者的0.52%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=13.659，P＜0.05），見表 1。

表1 總獻(xiàn)血人群及RhD陰性獻(xiàn)血人群意外抗體的檢出率統(tǒng)計（人）

2 不同年齡段獻(xiàn)血者意外抗體的檢測率比較2017～2019年共采集294321人次獻(xiàn)血者血液，共檢出意外抗體623例次，檢出率0.21%，見表2。其中年齡小于25歲年輕獻(xiàn)血者意外抗體檢出率最高（0.27%），超過56歲年長獻(xiàn)血者的意外抗體檢出率最低，不同年齡組獻(xiàn)血者意外抗體檢出率比較，具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=40.012，P＜0.05）。

表2 不同年齡段獻(xiàn)血者的意外抗體檢出情況（人次）

表3 意外抗體特異性及反應(yīng)強(qiáng)度統(tǒng)計（例次）

3 抗體特異性及反應(yīng)強(qiáng)度分析 對檢出的623例意外抗體的特異性及反應(yīng)強(qiáng)度進(jìn)行統(tǒng)計，見表3。檢出的623例意外抗體中，自身抗體2例，同種抗體375例，包括ABO血型系統(tǒng)11例，H血型系統(tǒng)1例，Rh血型系統(tǒng)18例，MNS血型系統(tǒng)115例，P血型系統(tǒng)205例和Lewis血型系統(tǒng)25例。其中，P、MNS和Lewis血型系統(tǒng)共計占全部檢出的同種抗體的92.00%（345/375）。另外有246例意外抗體未鑒定出特異性，并且反應(yīng)強(qiáng)度為1+以下比例為66.26%（163/246）。

討 論

獻(xiàn)血者抗體篩查的必要性一直是有爭議的話題。江蘇省血液中心一直對全部RhD陰性獻(xiàn)血者標(biāo)本進(jìn)行抗體篩查，并從2012年開始使用全自動血型儀進(jìn)行ABO、RhD定型，反定型時增加O型細(xì)胞，增加了意外抗體的檢出幾率。我們對近3年來檢出的意外抗體進(jìn)行了回顧性分析，發(fā)現(xiàn)本地區(qū)意外抗體在檢測頻率、特異性和實(shí)驗(yàn)反應(yīng)強(qiáng)度方面均有不同于其它地區(qū)的特點(diǎn)。

按人統(tǒng)計檢出率為0.29%，按人次統(tǒng)計檢出率為0.21%，均高于文獻(xiàn)報道的漯河0. 07%[1]、南陽0.05%[2]、蘇州 0.084%[3]、安 陽 0.196%[4]、 低 于泰州0.37%[5]、廣州0.48%[6]。這可能與獻(xiàn)血人群的地域分布、遺傳多樣性、不同篩查方法等有關(guān)。從性別來看，女性獻(xiàn)血者意外抗體檢出率0.40%明顯高于男性獻(xiàn)血者檢出率0.22%，同樣地，RhD陰性女性獻(xiàn)血者意外抗體檢出率遠(yuǎn)高于男性獻(xiàn)血者，這與泰州、廣州、石家莊[5-7]等地情況一致，女性意外抗體檢出率高于男性已成為共識。這種情況與女性自身產(chǎn)生紅細(xì)胞抗體的能力強(qiáng)于男性，妊娠增加免疫應(yīng)答有關(guān)[8]。因此，為了降低輸血反應(yīng)，有些國家女性獻(xiàn)血者的血漿不輸注給受血者[9]。

在檢出意外抗體的587名獻(xiàn)血者中有237名為長期堅持獻(xiàn)血的重復(fù)獻(xiàn)血者，僅有1次檢出意外抗體的重復(fù)獻(xiàn)血者為196人。每次獻(xiàn)血均被檢出抗體的獻(xiàn)血者有26人，其他重復(fù)獻(xiàn)血者不能每次均被檢出，可能與反應(yīng)強(qiáng)度低，O細(xì)胞凝集不明顯，篩查時全自動血型儀未判斷陽性有一定的關(guān)系，也可能與獻(xiàn)血者抗體的持續(xù)、消逝時間有關(guān)。除了抗-A1、抗-B，同一獻(xiàn)血者重復(fù)檢出的抗體特異性并不相同，由于抗體存在時間的差異，同時不同批次篩選細(xì)胞所攜帶的抗原種類也不相同，也是影響抗體是否檢出以及特異性不一致的另一個原因，限制了對獻(xiàn)血者抗體持續(xù)、消逝時間的探究。而有研究數(shù)據(jù)顯示，在確定的最常見特異性中，發(fā)現(xiàn)抗-D最持久，而抗-M最短暫[10]。

從表2不同年齡段獻(xiàn)血者的意外抗體檢出情況分析，18～25歲人群的檢出率最高，56～60歲人群檢出率最低，這與文獻(xiàn)報道漯河地區(qū)[1]、周口地區(qū)[11]檢出率隨年齡增長而升高不一致，與海南地區(qū)報道的檢出率相一致[12]。這可能與篩查方法有關(guān)，雖然統(tǒng)計了醫(yī)院反饋的意外抗體陽性樣本，但單采血小板ABO同型輸注不進(jìn)行ABO配型，有可能存在意外抗體未被發(fā)現(xiàn)；也可能與本中心獻(xiàn)血者人群以青年18～35歲為主，導(dǎo)致這個年齡段檢出率增高；也可能與統(tǒng)計方法有關(guān)，重復(fù)檢出者多集中在18～35歲，因這部分獻(xiàn)血者在不同年齡獻(xiàn)血，未進(jìn)行扣除。

對抗體的特異性進(jìn)行分析，表3顯示檢出Rh血型系統(tǒng)抗體18例，反應(yīng)強(qiáng)度2＋以上比例為77.18%，其中17例為女性。紅細(xì)胞上Rh復(fù)合物存在豐富的抗原表位，免疫原性僅次于ABO系統(tǒng)，Rh抗原強(qiáng)度為D＞E＞C＞c＞e。本中心對所有確認(rèn)RhD陰性獻(xiàn)血者，均須使用篩選細(xì)胞篩查意外抗體，如篩查陽性，須對紅細(xì)胞進(jìn)行兩次洗滌處理，才能發(fā)往醫(yī)院供患者使用。

對紅細(xì)胞上A/B抗原水平明顯低于常見表達(dá)水平（如A3或Ax）的樣本采用吸收放散實(shí)驗(yàn)方法確認(rèn)，檢出ABO血型系統(tǒng)抗體11例。檢出1例類孟買型，該獻(xiàn)血者正反定型不符，與抗-H試劑不凝集，經(jīng)意外抗體篩查和驗(yàn)證檢出抗-H抗體，經(jīng)吸收放散試驗(yàn)未檢出B抗原，鑒定Lewis血型為Le（a-b+），PCR-SSP分析，基因型為B101/O02，判斷該獻(xiàn)血者為Bmh類孟買血型。類孟買血型較為罕見，國內(nèi)相關(guān)報道也以個案為主。檢出1例抗-Mur，反應(yīng)較弱，4℃增強(qiáng)試驗(yàn)才能檢出，抗-Mur能夠引起嚴(yán)重的溶血性輸血反應(yīng)和新生兒溶血病（HDN），被認(rèn)為是有臨床意義抗體。

抗-P1一般為冷抗體，血凝反應(yīng)很弱，大部分P2均有抗-P1[13]，本調(diào)查也顯示確定特異性的各類抗體中，抗-P1中反應(yīng)強(qiáng)度≤1+，占比最大（38.05%），罕見抗-P1引起溶血性輸血反應(yīng)和HDN的報道。本調(diào)查中Lewis系統(tǒng)以抗-Leb為主（90.9%），多為冷抗體，37℃沒有臨床意義。偶見Lewis系統(tǒng)抗體在37℃有活性且引起溶血性輸血反應(yīng)的報道[14]。間接抗球蛋白試驗(yàn)陽性的抗-M引起HDN[15]。因此，對這部分抗體以及未確定特異性的抗體需要進(jìn)行37℃間接抗球蛋白試驗(yàn)。抗-M、抗-P1、Lewis抗體及未鑒定出特異性共計590例，其中220例間接抗球蛋白試驗(yàn)陽性，對這部分37℃反應(yīng)的抗體需要引起關(guān)注。

醫(yī)院反饋的交叉配血不合血液均為RhD陽性血液共計24例，經(jīng)鑒定5例IgG型抗體：抗-E，抗-Ce，IgM型抗體中14例具有37℃活性。分析3種途徑數(shù)據(jù)提示，導(dǎo)致反定型O細(xì)胞凝集的意外抗體主要為鹽水反應(yīng)性抗體，如抗-M、抗-P1、抗-Leb，結(jié)合醫(yī)院反饋的均為RhD陽性血液，如用反定型O細(xì)胞作為意外抗體的篩查方法容易遺漏一部分具有臨床價值的抗體，存在局限性。有報道木瓜酶法[16]、單特異性的抗人球蛋白試劑[17]、適用于血型儀的Capture-R法[18]，可增加IgG型抗體的檢出率，同時避免檢出臨床意義不大的IgM型抗體。

《全血及成分血質(zhì)量要求》沒有明確規(guī)定血液中不能含有意外抗體，而部分醫(yī)院參照《全血和成分血使用》對患者使用的血漿及冷沉淀凝血因子進(jìn)行意外抗體篩查。為了保障患者用血安全，IgG型抗體和一部分37℃反應(yīng)具有臨床意義的IgM型抗體均有檢出的必要性。另一方面，因同一獻(xiàn)血者的血漿和冷沉淀凝血因子同時發(fā)到同一醫(yī)院的概率極低，醫(yī)院如對血漿及冷沉淀凝血因子全部進(jìn)行篩查，必將導(dǎo)致同一獻(xiàn)血者的血液被重復(fù)篩查。

我國血站提供臨床醫(yī)院的血液制劑未區(qū)分性別，因此需要考慮對所有獻(xiàn)血者血液進(jìn)行意外抗體篩查，尤其是女性獻(xiàn)血者的血液。使用篩選細(xì)胞進(jìn)行意外抗體篩查及譜細(xì)胞進(jìn)行確認(rèn)，費(fèi)用較高，為避免血站和醫(yī)院重復(fù)進(jìn)行意外抗體篩查，增加患者負(fù)擔(dān)，建議由血站對獻(xiàn)血者血液標(biāo)本進(jìn)行意外抗體篩查和確認(rèn)，并對意外抗體篩查和確認(rèn)方法進(jìn)行驗(yàn)證和遴選，以提高具有臨床意義抗體的檢出率。另一方面，可參照已經(jīng)成功開展的傳染病標(biāo)志物篩查反應(yīng)性獻(xiàn)血者歸隊(duì)方案，屏蔽篩查出的具有臨床意義意外抗體的獻(xiàn)血者，在一定的屏蔽期后，依據(jù)擬捐獻(xiàn)血液品種，確定篩查節(jié)點(diǎn)。如捐獻(xiàn)單采血小板及血漿，需先篩查后采集；捐獻(xiàn)全血可先采集，單獨(dú)篩查。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突