HPLC-RID法測定蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖及乳糖含量

趙 芳

（晉中市綜合檢驗檢測中心，山西晉中 030600）

蜂蜜中富含多種糖類、氨基酸、維生素等營養成分，清甜爽口、老少皆宜，飲用蜂蜜具有緩解疲勞、有益身體健康和抗菌消炎、保養皮膚的功效[1-3]。近年來，隨著人們食療養身意識的逐漸提升，純天然蜂蜜和農家土蜂蜜備受歡迎，但市場上的蜂蜜品類較多，部分商家、養蜂戶夸大自身產品的品質、功效，摻水、添加蔗糖或人工轉化糖等情況時有發生，因此相關部門要加強對蜂蜜質量的監測與評價[4]。蜂蜜中的還原糖主要有果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖和乳糖5種，國家標準GB 5009.8—2016[5]中規定食品中上述5種還原糖用高效液相色譜-示差折光檢測器法（High Performance Liquid Chromatography coupled with Refractive Index Detector，HPLC-RID）、高效液相色譜-蒸發光檢測器法（High Performance Liquid Chromatography with Evaporative Light Scattering Detector，HPLC-ELSD）測定，本研究結合實驗室現有儀器條件，參照該標準建立了HPLC-RID測定蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖及乳糖5種還原糖的分析方法，為山西省晉中市綜合檢驗檢測中心開展蜂蜜、糖漿等食品中5種還原糖的檢測提供技術支撐。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

蜂蜜購自某超市；果糖標準物質（編號GBW 10063）、葡萄糖標準物質（編號GBW 10062）、蔗糖標準物質（編號GBW 10067）和乳糖標準物質（編號GBW 10065）均由中國計量科學研究院提供；麥芽糖標準物質（編號CAS 69-79-4，77456）壇墨質檢科技股份有限公司；乙腈（色譜純，德國默克）；實驗用水為一級超純水。

1.2 儀器與設備

1260 infinity Ⅱ高效液相色譜儀（帶示差折光檢測器，美國安捷倫）；XP205分析天平（精度0.000 1 g，瑞士梅特勒－托利多）；VORTEX MS3旋渦混合儀（德國艾卡）；0.22 μm微孔濾膜（日本島津）。

1.3 試樣前處理

準確稱取2 g混勻的蜂蜜試樣于50 mL容量瓶中，用純水定容至刻度，搖勻后用濾紙過濾，棄去初濾液，收集后續濾液過0.45 μm微孔濾膜，上機測試。

1.4 標準溶液配制

1.4.1 混合標準溶液配制

準確稱取果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖及乳糖標準物質各1 g，用超純水溶解、定容至50 mL容量瓶中，搖勻，配制5種還原糖的混合標準溶液。

1.4.2 標準工作系列配制

準確吸取糖混合標準溶液0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL和5.00 mL于5個10 mL容量瓶中，用超純水定容至刻度，即配制成5種還原糖組分質量濃度均為1.0 mg/mL、2.0 mg/mL、4.0 mg/mL、6.0 mg/mL和10.0 mg/mL的標準工作系列。

1.5 液相色譜條件

氨基色譜柱：Kromasil 100-5-NH2（250 mm×4.6 mm）；柱溫：40 ℃；流動相：水+乙腈（30+70，V/V），等度洗脫，流速為1.0 mL/min；檢測器：示差折光檢測器（RID）；檢測池溫度：40 ℃；進樣體積：20 μL；色譜峰保留時間定性；峰面積外標法定量。

2 結果與分析

2.1 色譜的分離分析

在1.5色譜條件下，15 min內能完成果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖和乳糖5種還原糖的分離分析，5種還原糖組分目標峰分離較好，各組分峰形對稱，且蜂蜜試樣中的雜質組分未對5種還原糖的目標峰產生干擾，可進行準確的定性定量檢測。

2.2 方法的線性關系與檢出限

以5種還原糖組分目標峰的峰面積Y為縱坐標，以相對應標準系列濃度點的質量濃度X為橫坐標，繪制標準曲線。以信噪比為3時的進樣濃度確定儀器最低檢出濃度，計算稱樣量為2 g，定容體積為50 mL時5種還原糖的方法檢出限。5種還原糖組分的標準曲線線性方程、相關系數及檢出限見表1。5種還原糖組分在1.0～10.0 mg/mL線性關系良好，相關系數r均大于0.998，方法檢出限均為0.5 g/100 g，符合GB 5009.8—2016的要求。

表1 5種還原糖組分的線性方程、相關系數及檢出限

2.3 方法的加標回收率與精密度

在某已知5種還原糖含量的蜂蜜試樣中添加低、中、高3種濃度的標準溶液，每個添加濃度水平進行6次平行測定，計算方法的加標回收率與精密度RSD。5種還原糖組分加標回收率與精密度的統計結果見表2。蜂蜜中5種還原糖組分低、中、高3種濃度的加標回收率為82.4%～109.7%，相對標準偏差RSD為0.87%～3.77%，表明該方法測定蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖和乳糖的回收率與精密度良好，符合GB/T 27404—2008中的要求[6]。

表2 5種還原糖組分的加標回收率及精密度試驗結果

3 結論

本研究參照GB 5009.8—2016中高效液相色譜法，建立了HPLC-RID測定蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖及乳糖5種還原糖的方法，試樣處理過程簡單、準確度高、精密度好，通過考察方法的線性關系、檢出限、回收率與精密度，均符合GB 5009.8—2016與GB/T 27404—2008中的相關規定，滿足食品檢驗檢測機構對蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖及乳糖5種還原糖準確、快速、高通量的檢測需求，對相關部門加強蜂蜜質量的監督抽檢、風險監測具有參考意義。