氣相色譜-串聯(lián)質譜法測定豇豆中倍硫磷殘留量的不確定度評定

王超超，耿發(fā)家，李啟卉

（國家輕工業(yè)食品質量監(jiān)督檢測南京站，江蘇南京 211816）

測量不確定度是表征合理地賦予被測量值的分散性，與測量結果相聯(lián)系的參數(shù)[1]。測量不確定度越小，測量結果的準確度、可信度就越高。當測量結果在限量值附近時，測量不確定度直接影響測量結果的判定。本文采用氣相色譜-串聯(lián)質譜法對豇豆中倍硫磷殘留量進行測定，依據(jù)JJF 1059.1—2012[2]《測量不確定度評定與表示》對其進行不確定度評定，并分析影響結果測定的主要因素，為相關的不確定度評價工作提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器及試劑

氣相色譜-串聯(lián)質譜聯(lián)用儀（美國安捷倫公司）；BSA124S-CW電子天平（賽多利斯科學儀器（北京）有限公司）；BFAA-DC24-RT加熱氮吹儀（上海安譜實驗科技股份有限公司）；移液器（艾本德中國有限公司）：倍硫磷（1 000 μg/mL，壇墨質檢科技股份有限公司）。

1.2 試驗方法

1.2.1 標準溶液的配制

用100 μL移液器準確移取100 μL倍硫磷標準溶液（1 000 μg/mL），用乙腈稀釋至1 mL，配成10 μg/mL標準中間液；再分別吸取 20 μL、40 μL、60 μL、100 μL、200 μL 和 400 μL 標準使用液，用空白基質提取液稀釋并定容至10 mL，配成系列標準曲線。

1.2.2 樣品處理

稱取約10 g樣品于45 mL塑料離心管中，加入10 mL乙腈，蓋上離心管蓋，渦旋1 min后超聲提取10 min，再加入5 g氯化鈉，渦旋1 min后，10 000 r/min離心5 min。吸取5 mL上清液加到內(nèi)含750 mg硫酸鎂、150 mg的PSA及15 mg的GCB的10 mL離心管中，渦旋混勻1 min。10 000 r/min離心5 min，吸取1 mL上清液于10 mL離心管中，加入20 μL的內(nèi)標溶液，40 ℃水浴氮吹至近干。再加入1 mL乙酸乙酯進行復溶，過0.22 μm有機濾膜，用于測定。

1.2.3 氣相色譜-串聯(lián)質譜條件

（1）氣相色譜條件。色譜柱為HP-5MS（30 m×0.250 mm×0.25 μm），柱溫箱升溫程序是40 ℃恒溫1 min，以40 ℃/min升溫至120 ℃，保持0 min，再以5 ℃/min升溫至240 ℃，再以12 ℃/min升溫至300 ℃，并保持6 min。進樣口溫度為280 ℃；進樣量為1 μL；不分流進樣；載氣為氦氣，流速為1.0 mL/min。

（2）質譜條件。EI離子源；MRM模式；離子源的溫度為300 ℃；四極桿溫度為180 ℃；傳輸線溫度為320 ℃；電子轟擊源為70 eV，質譜采集參數(shù)見表1。

表1 質譜采集參數(shù)

2 結果與分析

2.1 測量數(shù)學模型的建立

試樣中倍硫磷的殘留量按以下公式計算：

式中：X-試樣中倍硫磷，mg/kg；c-從標準工作曲線得到的倍硫磷溶液濃度，μg/mL；V-提取試樣溶液定容體積，mL；V2-移取試樣溶液體積，mL；V3-移取試樣溶液凈化后定容體積，mL；m-試樣質量，g；1 000-換算系數(shù)。

2.2 不確定度分量的識別

倍硫磷的不確定度來源于測量重復性、被測組分溶液濃度、提取試樣溶液定容體積、移取試樣溶液體積、移取試樣溶液凈化后定容體積和試樣質量等。

2.3 不確定度分量的評定

2.3.1 測量重復性的不確定度

同時稱量豇豆樣品6份，按照同樣測量方法進行平行測量，測量結果見表2。測量重復性的標準不確定度由6次測量結果平均值的標準差表示，u(rep)=0.005 1 mg/kg，urel(rep)=0.039 0。

表2 倍硫磷測量結果

2.3.2 樣品濃度的不確定度

以待測農(nóng)藥定量離子峰面積和內(nèi)標物定量離子峰面積的比值為縱坐標，標準工作溶液質量濃度和內(nèi)標質量濃度的比值為橫坐標，制作成標準曲線，用最小二乘法進行擬合，得到直線方程y=128.25x-0.191，相關系數(shù)為0.998 9。本實驗選擇前2次平行樣的平均值進行評估，2次平行樣的峰面積比值分別為18.566和17.345，由峰面積比值的平均值通過校準曲線方程求得樣品溶液的濃度c=0.142 μg/mL，通過計算，得出u(c)=0.002 2 μg/mL，urel(c)=0.015 4。

2.3.3 校準用標準工作溶液濃度的不確定度

（1）標準物質濃度的不確定度由標準物質的證書可查到，所使用倍硫磷標準物質的濃度的相對擴展不確定度為2%（k=2），將其轉化為相對標準不確定度urel(c1)=0.01。

（2）將標準溶液依次稀釋并配制成校準用標準工作溶液的稀釋不確定度。以位于標準工作曲線中間并與待測樣品溶液中倍硫磷濃度最接近的濃度點0.1 μg/mL進行該不確定度的評估，標準溶液稀釋引入的不確定度見表3。將以上相對不確定度分量進行合成，得到校準用標準工作溶液濃度c標的相對不確定度為：

表3 標準溶液的稀釋引入的不確定度

2.3.4 提取試樣、移取試樣并定容的不確定度

用1 mL乙腈提取試樣，再用1 mL移液器移取1 mL提取液進行氮吹，最后用乙酸乙酯定容至1 mL，各測試環(huán)節(jié)引入的不確定度見表4。

表4 提取試樣、移取試樣并定容引入的不確定度

2.3.5 試樣質量的不確定度

（1）由《電子天平檢定規(guī)程》（JJG 1036—2008）可知，其稱量的最大允差為0.5 mg，假定為矩形分布，則樣品凈重為2次稱量操作所得，則

（2）由電子天平的計量檢定證書可查得天平的重復性為1 mg，假定為矩形分布，則將上述各不確定度的分量合成為

2.4 計算合成標準不確定度

將以上各不確定度進行統(tǒng)計，計算各分量的貢獻大小，結果見表5。將各不確定度分量合成為

表5 各測量結果不確定度及其分量貢獻大小

樣品中倍硫磷殘留量的最終測定結果，取前2次平行樣的平均值0.141 mg/kg，為最佳估計值。因此，uc(X)=X×urel(X)=0.141×0.044 6=0.006 3 mg/kg。

2.5 包含因子及擴展不確定度的計算

在95%置信概率下，取包含因子k=2，將合成標準不確定度乘以包含因子計算得到測量結果的擴展不確定度為U=uc(X)×k=0.012 6 mg/kg。豇豆中倍硫磷殘留量為（0.141±0.013）mg/kg，k=2。

3 討論

倍硫磷是一種高效、廣譜有機磷殺蟲劑，具有中等毒性。國家對豇豆中倍硫磷最大殘留限量要求為0.05 mg/kg。近年來，倍硫磷在豇豆中檢出率較高，部分樣品的倍硫磷殘留量超過國家限量要求[3]。這些檢出結果是否準確、可靠，需要評定其測量不確定度[4-5]。本文通過評價倍硫磷殘留量的不確定度可知，影響測得結果不確定的主要因素是測量重復性，配制標準工作溶液引入的不確定度和校準得到的樣品濃度引入的不確定度。其中，測量重復性影響最大，占比達到40.31%。在檢測過程中，可以通過增加樣品和標準溶液的測量次數(shù)，減少標準溶液稀釋次數(shù)等方式，降低測量不確定度。