應用離子色譜法檢測白酒中乙酸含量

胥小榮，王照友，王艷英，孔慶巖

（1.承德市食品藥品檢驗檢測中心，河北承德 067000；2.承德市雙橋區(qū)市場監(jiān)督管理局，河北承德 067000）

我國的白酒歷史最為悠久。白酒由1種或多種糧谷釀造而成，通常以高粱、大米、小麥、大麥和玉米為原料[1]。此外，有些白酒由諸如小米與薏仁（我國的珍珠大麥）等類的禾本科植物經(jīng)發(fā)酵、蒸餾工序釀造而成。選擇何種原料釀酒取決于釀酒人的釀制需求。白酒的類型主要有清香型、濃香型、醬香型（似醬油味），占據(jù)白酒總份額的60%～70%。不同香型的白酒呈味酸不盡相同，比如清香型白酒呈味酸主要為乙酸、濃香型白酒呈味酸主要為己酸、老白干主要呈味酸為乳酸等[2-3]。

目前，檢測乙酸的方法主要有氣相色譜法、液相色譜法、離子色譜法和分光光度法等方法[4]。白酒屬于易揮發(fā)的樣品，選取不同的檢測設備會對檢驗數(shù)據(jù)結果有一定的影響，應用離子色譜法，樣品前處理簡便不容易造成損失，檢測時間短，儀器具有高靈敏度，結果準確等特點。本文選取離子色譜法為白酒中乙酸的測定方法，通過查閱資料建立離子色譜法檢驗白酒中乙酸的方法，并結合自身在實驗過程中的經(jīng)驗，對試驗過程進行了一定的優(yōu)化，主要針對當前運用離子色譜法測定白酒酒中乙酸方法研究關注點少、考慮的關鍵控制點不全、檢測時間較長等問題。優(yōu)化檢測分析方法能夠對全面把控白酒生產(chǎn)過程中的質(zhì)量、保證食品安全起到更加有效的監(jiān)督作用，促進食品行業(yè)朝著更安全更嚴謹?shù)姆较虬l(fā)展。

《白酒分析方法[附修改單]》（GB/T 10345—2007）中未規(guī)定乙酸、己酸的檢驗方法，白酒產(chǎn)品相關標準的理化要求項目總酸都是以乙酸計，但均未規(guī)定檢驗方法，目前，白酒分析方法（征求意見稿）中單列出乙酸、己酸的檢驗方法，且乙酸只能使用氣相色譜法進行檢測。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

白酒，市售；乙酸鈉標準溶液，天津市大茂化學試劑廠；乳酸鈉標準溶液，國藥集團化學試劑有限公司。

1.2 儀器與設備

離子色譜儀（配備電導檢測器和自動再生抑制器），型號：ICS1600，賽默飛；超純水儀，型號：Milli.Q，美國 Millipore公司；電子天平，型號ML802/02，梅特勒儀器（上海）有限公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 色譜條件

ASll-19陰離子分離柱（4 mm×250 mm），AGll-19保護柱（4 mm×100 mm）；淋洗方式：等度淋洗；流動相：設備自動生成所需淋洗液，KOH溶液；檢測器：電導檢測器；流動相流速：1.00 mL/min；柱溫箱溫度：35 ℃；樣品進樣量50 μL[5]。

1.3.2 樣品前處理

柚皮苷在大鼠在體單向腸灌流模型上的吸收特征研究…………………………………………………… 陳潤芝等（9）：1194

取10.0 mL樣品放入50 mL離心管中，在10 000 r/min條件下離心15 min，取上清液0.50 mL至100 mL容量瓶中，超純水定容至刻度，搖勻并靜置10 min，取10.0 mL此液，過0.22 μL水相過濾膜，棄去前面3.00 mL，收集后面清液，上機檢測[5]。

1.3.3 方法建立

（1）色譜柱設定。選擇陰離子色譜柱，目前市售陰離子色譜柱主要為ASl1、ASl 1-HC、ASl9等類型，進行分離對比實驗。通過乙酸和乳酸混合標準溶液出峰時間、峰型、數(shù)據(jù)結果因素，選出最佳的色譜柱類型。

（2）流速設定。根據(jù)參考文獻及相關方法設定5種不同流速，分別為0.50 mL/min、0.75 mL/min、1.00 mL/min、1.25 mL/min和 1.50 mL/min，根據(jù)實驗結果選擇最適流速。

（3）柱溫設定。選擇不同柱溫，規(guī)避環(huán)境溫度對實驗造成的影響，參照液相色譜法流動相溫度控制，選取25 ℃、30 ℃、35 ℃、40 ℃和45 ℃，根據(jù)實驗結果選擇最佳柱溫。

（4）淋洗度設定。查閱相關文獻，淋洗條件可選擇等度洗脫與梯度洗脫；淋洗液淋洗度分別為2 mmol/L、3 mmol/L、5 mmol/L和8 mmol/L，根據(jù)實驗結果選擇最佳淋洗度。

2 結果與分析

2.1 白酒測定方法的建立

2.1.1 色譜柱

根據(jù)1.3.3（1）條件進行實驗，發(fā)現(xiàn)色譜柱ASl1-19是一種高容量、強親水性色譜柱，出峰時間適當，峰型好，適用白酒中乙酸和乳酸同時測定。

2.1.2 流速

根據(jù)1.3.3（2）條件進行實驗，發(fā)現(xiàn)不同數(shù)量級流速對實驗結果影響比較大。①在低流速0.50 mL/min和0.75 mL/min時，由于流速比較低，致使壓力偏低，存在出峰時間靠后、峰寬大、靈敏度不高等問題；②中流速1.00 mL/min時，流速適度，壓力適中，出峰時間達到預期目標、峰型完美，靈敏度高；③高流速1.25 mL/min和1.50 mL/min，流速較高，致使系統(tǒng)壓力偏高，直接影響色譜柱使用時效，造成試驗成本過高。通過實驗數(shù)據(jù)，綜合考慮各種因素，最后選擇1.00 mL/min為本實驗流速。

2.1.3 柱溫

根據(jù)1.3.3（3）條件進行實驗，在確定流速為1.00 mL/min的條件下，結果發(fā)現(xiàn)溫度低，出峰時間較晚，溫度高，峰分離不好，故選擇35 ℃為柱溫箱的溫度。

2.1.4 淋洗條件的選擇

根據(jù)1.3.3（4）條件進行實驗，由于乙酸和乳酸2種物質(zhì)極性差異不大，且出峰時間較早，無需選擇梯度洗脫，只需等度即可，根據(jù)出峰時間、分離度、峰型以及泵壓力等條件，選擇淋洗濃度為2.0 mmol/L。

2.2 方法學考察

2.2.1 線性范圍與檢出限

在0.8～1.6 mg/L、0.4～0.8 mg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，進行了7個不濃度水平標準工作液的測定，以組分質(zhì)量濃度（X）為橫坐標，以組分峰面積（Y）為縱坐標，進行標準曲線線性擬合，線性相關系數(shù)R均＞0.99，線性良好；檢出限在0.000 1～0.072 8 mg/L。

2.2.2 回收率

根據(jù)不同白酒中乙酸和乳酸含量，國家安全標準中有關指標規(guī)定，選取0.8 mg/L、1.0 mg/L、1.2 mg/L 3個不同濃度，添加至樣品中進行回收率測定實驗，來驗證設定的實驗方法的準確度。

通過實驗獲得組分測定回收率為95%～112%，回收率結果的相對標準偏差（RSD）在1.07%～10.23%，準確度較好。由此可見，此試驗方法設計合理。

2.2.3 精密度

根據(jù)《化學分析方法驗證確認和內(nèi)部質(zhì)量控制要求》（GB/T 32465—2015），選取代表性樣品進行精密度驗證。每個樣品同一濃度進行實驗次數(shù)為6，根據(jù)試驗結果計算相對標準偏差。通過計算得知，相對標準偏差為3.38%～4.97%，該精密度符合化學分析方法檢測技術要求，證明該檢測方法精密度良好。

2.3 實際樣品測定

由于目前國家安全標準中涉及產(chǎn)品參數(shù)技術規(guī)定主要有乙酸和乳酸，本試驗主要進行乙酸、乳酸測定。取15種白酒用該法進行2種組分測定，其離子色譜圖見圖1，各組分測定結果見表1。

表1 不同白酒中有機酸含量測定結果

圖1 2種有機酸混合標準溶液離子色譜圖

白酒的品質(zhì)體現(xiàn)在呈味物質(zhì)含量多少，呈味物質(zhì)主要是乙酸乙酯、乙酸己酯等，酯類物質(zhì)形成與白酒中有機酸形式直接相關，白酒中主要有機酸是乙酸和乳酸，其含量大小是白酒質(zhì)量的一個重要標志。通過試驗法可以看出，不同品種中有機酸含量差異比較大，乙酸和乳酸含量高的樣品，市場售價相對較高，有機酸含量較低，符合國家安全標準的樣品，樣品品質(zhì)一般，市場售價也較低。通過對不同香型白酒中乙酸的測定，雖然含量較高的乙酸和乳酸分離度不夠高，但是整體基線平穩(wěn)，各組分色譜峰形尖銳，色譜峰分離度較理想，說明檢測方法穩(wěn)定、實用。

3 結論

本實驗通過對影響因素如色譜柱、流速、柱溫和淋洗液濃度等分析，確定一種適合檢驗檢測機構或白酒企業(yè)檢驗室白酒中乙酸和乳酸組分利用離子色譜進行實驗的分離的條件，建立運用離子色譜法快速測定白酒中乙酸含量的實驗方法。結果表明，色譜柱選擇ASl1-19，流速為1.00 mL/min，柱溫30 ℃，淋洗濃度為2 mmol/L，乙酸和乳酸組分分離效果理想。該實驗方法具有操作簡便、靈敏度高、檢驗時間短等優(yōu)點，完全適于檢驗檢測機構與白酒企業(yè)中白酒中乙酸含量快速測定。提高乙酸和含量檢測分析方法效率，能夠對全面把控白酒生產(chǎn)過程中的質(zhì)量、保證食品安全起到更加有效的監(jiān)督作用，促進了食品行業(yè)朝著更安全更嚴謹?shù)姆较虬l(fā)展。