牦牛胃溶菌酶在解脂耶氏酵母中的重組表達及性質研究

冉 嫆 劉毓均 夏 果 江明鋒

（1.西南民族大學青藏高原研究院，四川成都610041；2.西南民族大學畜牧獸醫學院，四川成都610041）

近年來，消化型溶菌酶(digestive lysozyme)是一種從反芻動物胃中分離出的新型溶菌酶。該酶能抵抗胃蛋白酶的降解，可以在酸性條件下發揮溶菌活性，因此能夠對反芻動物胃中的微生物進行消化分解，并將分解產物作為營養成分加以吸收[1]。反芻動物前胃和真胃的胃黏膜組織均可分泌，其在皺胃組織中表達水平最高[2-3]。

與傳統溶菌酶相比，為適應胃中的蛋白酶及酸性的環境，反芻動物胃溶菌酶發生了許多適應性進化，表現出具有抗菌、耐酸、耐熱及抗胃蛋白酶等優點[4-5]，但在嚴峻的胃環境下保持其溶菌酶活性的機制尚不十分清楚。由于該酶活性和雞蛋清溶菌酶(egg lysozyme, eLYZ)相當，因此可考慮用反芻動物胃溶菌酶代替傳統溶菌酶作為飼料添加劑，減少胃蛋白酶和胃酸對其活性的影響，達到更好的飼喂效果。

據報道，黃牛胃消化溶菌酶2在胃中的高穩定性可能與其胃蛋白酶抗性和胃溶菌酶本身的適應性變化有關[6]。目前，研究人員主要對人溶菌酶(human Lysozyme, hLYZ)和eLYZ的重組表達進行研究[7-9]，反芻動物胃溶菌酶異源表達的研究報道較少。Jiang等[10]克隆并表達了牦牛胃中編碼溶菌酶的cDNA。江偉華等[11]克隆了藏綿羊胃溶菌酶基因并對其進行原核表達，其生物活性為400 U/mL。任洪輝等[12]利用畢赤酵母表達系統對牦牛胃溶菌酶基因進行分泌表達，獲得上清液酶學活性為875.14 U/mg。劉毓均等[13]成功利用畢赤酵母對其進行了分泌表達。……