HPLC-MS/MS 測定復合包裝材料中2,4-二氨基甲苯

張延超，劉 帥，張玉婷，吳 燕

（天津市藥品檢驗研究院，天津 300070）

藥品包裝材料與結構形式，尤其是直接接觸藥品的包裝材料，對保證藥品穩定性起重要作用。由于藥包材與藥品的接觸時間可長達整個藥品的有效期，因此對藥包材生物安全性的重視應等同于對藥品本身安全性的重視［1，2］。復合包裝材料由于具有良好阻氧性、阻水性與高阻滲性，更好地滿足藥品包裝的特定需求，因而廣泛用于藥用包裝［3，4］。由于這種材料的工藝特點，需要在幾層之間添加膠粘劑，形成穩定的復合材料。膠粘劑的主要成分為芳香族聚氨酯膠粘劑，通常會殘留一些游離的芳香族異氰酸酯。當這種游離的芳香族異氰酸酯接觸空氣中的水時，就會水解而生成2，4-二氨基甲苯［5，6］。2，4- 二氨基甲苯具有較強的致癌性，與內容物接觸之后，容易遷移到內容物中［7］。人體服用后可能會出現惡心、嘔吐、頭痛、失眠、溶血性貧血等癥狀，嚴重者可致癌，對人體健康造成危害［5］。

現有國家衛生標準主要通過使用氣相色譜法和氣相色譜-質譜法兩種方法測定2，4-二氨基甲苯含量。但這類方法需要衍生化前處理，操作繁瑣、檢驗周期長、檢驗成本高，同時有毒有害試劑的使用對實驗人員和環境都會造成傷害［7,8］。因此，有必要開發出更加快速、簡便、環保的方法檢測復合包裝材料中2，4-二氨基甲苯的含量。

本文建立了高效液相色譜-串聯質譜法測定復合包裝材料中的2，4-二氨基甲苯，既能降低基質的干擾，又能提供高選擇性、高靈敏度和高精確度的分析。同時此方法無需衍生化前處理，從而簡化試驗前處理過程，縮短檢驗周期，降低檢驗成本，避免有毒有害試劑對檢驗人員和環境的傷害。

1 儀器、試劑與材料

儀器：島津LC/MS-8050 液相色譜質譜聯用儀，Solution 色譜工作站；HHS 型電熱恒溫水浴鍋HBYQ；Mill Advantage A10 純水儀。試劑：乙腈（MERK，色譜純）、甲酸（SIGMA，色譜純）、超純水。對照品：2，4-二氨基甲苯（Dr Ehrenstorfer，純度：99.8%，批號G150549）。材料：移液器、量瓶、2 ml 樣品瓶、濾膜（0.22 μm）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：ZORBAX Eclipse Plus C18（50 mm×2.1 mm，1.8 μm），PN 959757-902；流動相：0.1%甲酸水溶液（60%）-乙腈（40%）；進樣量：2 μl ；柱溫：35 ℃；流速：0.25 ml/min。離子源：ESI+，正離子掃描；離子源接口電壓：4.5 kV；霧化氣：氮氣3.0 L/min；干燥氣：空氣10 L/min；碰撞氣：氬氣；脫溶劑管溫度：250 ℃；加熱模塊溫度：400 ℃；掃描模式：多反應監測（MRM）；MRM 參數見表1。

表1 2,4-二氨基甲苯MRM 參數

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 取2，4-二氨基甲苯對照品約10 mg，精密稱定，置10 ml 量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，作為2，4-二氨基甲苯儲備液，濃度約為1 mg/ml。用水逐級稀釋配制濃度為1.0、2.0、5.0、20、50和100 ng/ml 的系列對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 將樣品剪碎，取2 g，精密稱定，至250 ml 磨口硼硅玻璃燒瓶中，精密加入100 ml 水，煮沸回流1 h，冷卻后加水補足重量，經0.22 μm微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液。

2.3 系統適用性試驗 取對照品和供試品溶液按色譜條件測定。色譜圖見圖1。

圖1 對照品（A）供試品（B）色譜圖

2.4 標準曲線的建立 取“2.2.1”項下系列對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣，記錄色譜圖，以濃度為橫坐標（X），以峰面積為縱坐標（Y），得標準曲線的線性方程為Y=11 466.523 7X-3 486.934 1（r=0.999 9），結果表明，2，4-二氨基甲苯在1.0～100.0 ng/ml 范圍內線性關系良好。

2.5 精密度試驗 取2，4-二氨基甲苯對照品濃度為5 和20 ng/ml 的溶液，分別重復測定6 次。結果峰面積的RSD 分別為0.86%和0.59%（n=6）。表明儀器精密度良好。

2.6 穩定性試驗 取2，4-二氨基甲苯對照品濃度為5 和20 ng/ml 的溶液，分別在室溫放置0、12 和24 h，進行測定。結果峰面積RSD 分別為0.63%和0.85%（n=3）。表明對照品溶液室溫放置24 h 穩定。

2.7 檢出限 取2，4-二氨基甲苯儲備液用水逐級稀釋，經測定，信噪比（S/N）為2 ～3 時，溶液濃度為0.2 ng/ml，確定2，4-二氨基甲苯檢出限（LOD）為10 ng/g。

2.8 定量限 取2，4-二氨基甲苯儲備液用水逐級稀釋，經測定，信噪比（S/N）為10 時，溶液濃度為0.5 ng/ml，確定2，4-二氨基甲苯定量限（LOQ）為25 ng/g。

2.9 回收率試驗 將樣品剪碎，取2 g，精密稱定，置250 ml 磨口硼硅玻璃燒瓶中，分別加入標準中間液（10 μg/ml）200 μl，精密加入100 ml 水，煮沸回流1 h，冷卻后加水補足重量，經0.22 μm 微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液，同一濃度平行制備6 份，計算回收率。結果2，4-二氨基甲苯平均回收率為84.11%，RSD 為1.68%（n=6）。見表2。

表2 2,4-二氨基甲苯回收率試驗結果（n=6）

2.10 重復性試驗 取回收率試驗制備溶液，平行制備6 份，結果顯示RSD 為0.59%（n=6）。

2.11 樣品提取試驗 將供試品溶液測得峰面積代入標準曲線，進行計算。結果4 批樣品均未檢出2,4-二氨基甲苯，見表3。

表3 復合包裝材料2，4-二氨基甲苯提取試驗結果

3 討論

本研究建立了用高效液相色譜-串聯質譜法對復合包裝材料中2，4- 二氨基甲苯的含量的檢測方法。試驗的線性系數、精密度、穩定性、回收率、重復性等技術指標滿足相關分析檢測要求。本方法具有高靈敏度、高精確度的優點，同時此方法無需衍生化前處理，從而簡化試驗前處理過程。便于市場監管，保障人民健康。