ω-3 PUFAs對小鼠炎癥性腸病調節性T細胞影響的研究

馮曉玲 高鴻亮

炎癥性腸病（inf lammatory bowel disease，IBD）分為潰瘍性結腸炎與克羅恩病，是特發性腸道炎癥疾病，具有發病早、病程緩和易復發特點，患者發病后需要接受長時間治療，嚴重影響患者正常生活[1]。目前僅了解IBD 發病主要由遺傳、腸道細菌、環境以及腸道免疫系統失調等眾多因素一同導致[2]。炎癥反應過程與機體免疫系統功能關系密切，探究腸道炎癥發生時機體免疫功能變化對于了解腸道炎癥疾病合理免疫治療方案制定具有重要意義。調節性T細胞（Treg）可通過細胞之間相互作用與因子釋放達到減少輔助T細胞增殖、抑制促炎因子分泌、減少免疫損傷和鞏固免疫耐受的目的[3]。ω-3 多不飽和脂肪酸（ω-3 polyunsaturated fatty acids，ω-3 PUFAs）作為人體正常運轉必需脂肪酸之一，其主要由二十碳五烯酸與二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid，DHA）組成，不僅可以為機體提供能量，還可以作為藥物治療自身免疫性疾病，甚至能夠抑制T細胞及淋巴細胞增殖[4]。本研究以IBD 小鼠為模型，進一步明確ω-3 PUFAs對IBDTreg細胞的影響。

材料和方法

一、材料

1.動物和試劑：小鼠來自新疆醫科大學第五附屬醫院動物研究中心，三硝基苯磺酸、維甲酸（美國Sigma公司），ω-3 PUFAs、DHA、飽和脂肪酸硬脂酸（美國Peprotech公司），RPMI- 1640 培養基、PBS 磷酸鹽緩沖液（上海士峰生物科技有效公司），胎牛血清（美國Thermo Scientif ic公司），annexinV- FITC 凋亡檢測試劑盒（上海碧云天公司），FITC- anti-CD4、

PE- ant- CTLA- 4、APC-anti-Foxp3、PE-anti- CD39、PE- anti- CD25、anti-CD3、anti-CD28 單克隆抗體、固定/通透液、高爾基體阻斷劑BD Golgistop 蛋白轉運抑制劑（丹麥eBioscience公司），鼠CD4+CD25+Treg 分離試劑盒（上海強智生物科技有限公司），TGF-β、IL-2（南京歐凱生物公司），CFSE 及anti-CD3/CD28 beats（美國Gibcolifetechnologies 公司），白介素-10（IL-10）、Foxp3 以及干擾素-γ（IFN-γ）酶聯免疫吸附試劑盒（美國Invitrogen公司）。……