巨細胞病毒性疾病患兒尿HCMV-DNA水平、并發癥及更昔洛韋治療后轉歸分析

趙代艷 蘇愛芳 郭長根

人巨細胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）是最大動物病毒之一，屬于β 皰疹病毒亞科，因其進入細胞后會導致細胞增大而得名。HCMV在人群中感染廣泛，且多呈隱性感染，潛伏部位多為唾液腺、乳腺、腎臟等［1］，能夠隨著唾液、乳汁、尿液等排出。多數免疫正常個體HCMV 感染無癥狀，但是對于免疫抑制個體及嬰幼兒，一旦發生感染則可出現明顯病癥，尤其是新生兒，后期可出現智力低下、感覺神經性耳聾等后遺癥［2-3］。因HCMV 感染對嬰幼兒健康危害較大，可引起多種并發癥，需及早診治以改善患兒預后［4］。HCMV 為DNA 病毒臨床可通過檢測HCMV-DNA 以診治HCMV 感染?；谝陨纤觯狙芯繑M觀察HCMV 感染性疾病患兒尿HCMV-DNA 水平和并發癥，并分析更昔洛韋治療后轉歸情況，以期為HCMV 感染性疾病患兒的臨床診治提供依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月至2019年9月本院收治的70 例HCMV 感染性疾病患兒為研究對象，患兒均符合HCMV 感染診斷標準［5］，可見黃疸、發熱、腹瀉、肝脾腫大等癥狀，排除合并先天染色體疾病、合并非HCMV 感染性疾病、合并缺血性腦病、膽紅素腦病等腦疾病。70 例患兒中男39 例，女31例；年齡為1～12 個月，平均年齡（4.87±1.59）個月；產期：早產兒4 例，足月兒66 例；生產方式：順產34 例，剖宮產36 例；喂養方式：母乳喂養及混合喂養45 例，人工喂養25 例。另選擇35 例健康幼兒作為對照，其中男20 例，女15 例；年齡為1～12 個月，平均年齡（4.95±1.61）個月；產期：早產兒1 例，足月兒34 例；生產方式：順產19 例，剖宮產16 例；喂養方式：母乳喂養及混合喂養24 例，人工喂養11 例。兩組一般資料比較差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究獲得本院醫學倫理委員會批準，受檢者家屬均知情了解并簽署了知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 HCMV-DNA 檢測

采集兩組兒童新鮮尿液2 mL，于-20℃環境中保存待用。以12 000 r/min 速率將尿液在TGL-16B 高速臺式離心機（上海安亭科學儀器廠）上離心5 min，除去上清液后通過Ficoll 密度梯度離心法獲取PBMC，加入DNA 裂解液混勻振蕩10 min，在100℃環境中靜置10 min，充分裂解后再次以12 000 r/min 速率離心5 min，取上清液5 μL 作為反應模板，進行PCR 擴增（Mastercycler PCR 擴增儀由德國Eppendorf 公司提供）。擴增引物序列：上游5′-TGGGCATCGACTGACGAGCA-3′，下游5′-TTTAGCAGTCTGCATAGCCT-3′。向HCMVPCR 反應管中加入經過處理的5 μL 反應模版，離心1 min；將反應管加入定量PCR 儀器孔樣品反應槽內，按對應順序設置陰性質控品、陽性定量質控參考品（梯度108～104copies/mL）及待檢測標本，并設置樣品名稱、標記熒光基因種類及循環條件，擴增條件：93℃2 min；預變性：93℃50 s、55℃60 s，循環數10 個；93℃30 s、55℃45 s，循環數30 個，進行PCR 擴增，依據標準曲線分析HCMV-DNA拷貝數，HCMV-DNA 試劑盒購自中山大學達安基因股份有限公司，HCMV-DNA＞2.0 log10copies/L為陽性。

1.2.2 治療

HCMV 感染性疾病患兒均予以護肝利膽、降酶及氧療等基礎治療，入院檢查后予以更昔洛韋（山東鳳凰制藥股份有限公司，國藥準字H20051937）靜脈滴注，誘導期使用劑量：每次5 mg/kg 加入5%葡萄糖溶液中靜滴，2 次/d，治療2周；之后進行維持治療，每次5 mg/kg 加入5%葡萄糖溶液中靜滴，1 次/d，治療2 周。

1.2.3 肝功能指標檢測

分別于治療前、治療后抽取患兒股靜脈血1～2 mL，離心后分離血清，檢測肝功能指標，包括總膽紅素（total bilirubin，TBIL）、直接膽紅素（direct bilirubin，DBIL）、丙氨酸氨基轉移酶（alanine aminotransferase，ALT）、堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP），檢測儀器為德國羅氏公司cobas 8000全自動生化分析儀。

1.3 統計學分析

運用SPSS 18.0 軟件進行統計分析，計量資料以（±s）描述，LSD-t 檢驗行行兩組間比較；計數資料用n（%）表示，χ2檢驗；以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 觀察組與對照組尿HCMV-DNA 水平及HCMV-DNA 陽性率比較

觀察組尿HCMV-DNA 水平及HCMV-DNA 陽性率均顯著高于對照組，差異具有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 觀察組與對照組尿HCMV-DNA 水平及HCMV-DNA 陽性率比較（±s）Table 1 Comparison of urine HCMV-DNA level and HCMV-DNA positive rate between the observation group and control group（±s）

表1 觀察組與對照組尿HCMV-DNA 水平及HCMV-DNA 陽性率比較（±s）Table 1 Comparison of urine HCMV-DNA level and HCMV-DNA positive rate between the observation group and control group（±s）

組別觀察組對照組t/χ2值P 值n 70 35尿HCMV-DNA 水平（log10 copies/L）2.45±0.38 1.01±0.27 20.013＜0.001尿HCMV-DNA陽性率（%）43（61.43）0（0.00）33.915＜0.001

2.2 HCMV 感染性疾病患兒并發癥發生情況

HCMV 感染性疾病患兒并發癥可見貧血、肺炎、畸形、視網膜炎、腦炎，見表2。

表2 HCMV 感染性疾病患兒并發癥發生情況Table 2 Complications in children with HCMV infection

2.3 HCMV 感染性疾病患兒治療前后尿HCMVDNA 水平及HCMV-DNA 陽性率比較

治療后，HCMV 感染性疾病患兒尿HCMVDNA 水平及HCMV-DNA 陽性率均較治療前顯著降低，差異具有統計學意義（P均＜0.05），見表3。

表3 HCMV 感染性疾病患兒治療前后尿HCMV-DNA水平及HCMV-DNA 陽性率比較Table 3 Comparison of urine HCMV-DNA level and HCMV-DNA positive rate of children with HCMV infectious diseases before and after treatment

2.4 HCMV 感染性疾病患兒治療前后肝功能指標比較

治療后，HCMV 感染性疾病患兒TBIL、DBIL、ALT 和ALP 水平均較治療前顯著降低，差異具有統計學意義（P均＜0.05），見表4。

表4 HCMV 感染性疾病患兒治療前后肝功能指標比較（±s）Table 4 Comparison of liver function indexes of children with HCMV infection before and after treatment（±s）

表4 HCMV 感染性疾病患兒治療前后肝功能指標比較（±s）Table 4 Comparison of liver function indexes of children with HCMV infection before and after treatment（±s）

組別治療前治療后t 值P 值n 70 70 TBIL（μmol/L）200.75±41.23 67.80±15.76 25.201＜0.001 DBIL（μmol/L）51.42±10.09 12.37±2.95 31.079＜0.001 ALT（U/L）318.65±52.76 68.43±17.14 37.738＜0.001 ALP（U/L）513.29±81.45 385.46±57.30 10.739＜0.001

3 討論

HCMV 存在明顯種屬特異性，在人類中傳播較廣。我國為HCMV 感染高發區，相關資料顯示，國內HCMV 平均感染率可高達90%［6］。HCMV 能夠通過飛沫、尿液等體液傳播，其進入人體造成原發性感染后會潛伏于組織內，形成終身感染，多數情況下不會出現明顯癥狀，但當隱性感染者免疫功能下降時，體內HCMV 也隨之活躍而導致出現癥狀表現，成為顯性感染［7-8］。對于胎兒和嬰幼兒而言，母體感染HCMV 后會經胎盤、產道、乳汁等途徑將病毒傳至其體內而導致其感染病毒，而HCMV 感染會累及多個臟器，如心、肝、肺、腎等，引起多種并發癥，危害大。因此，及早發現和早期治療，對降低疾病造成的損害、改善患兒預后具有重要意義。

熒光定量PCR 擴增技術對HCMV-DNA 的定量檢測在HCMV 感染早期診斷中有重要價值，可降低肝、肺、腎等器官并發癥發生率，提高臨床診斷準確率，減少誤診和漏診［9］。本次研究對HCMV 感染性疾病患兒進行尿HCMV-DNA 檢測，并以健康嬰幼兒為對照，結果顯示，觀察組尿HCMV-DNA 水平及HCMV-DNA 陽性率均顯著高于對照組，表明HCMV 感染性疾病患兒尿HCMV-DNA 表達水平較高，在診斷嬰幼兒HCMV感染中具有一定價值。吳德等［10］進行動物實驗研究，結果顯示HCMV 先天性感染仔鼠可見明顯空間學習記憶功能障礙。王澤民［11］研究指出，小兒HCMV 感染是其血液系統受累的中醫病因學基礎之一，能夠導致患兒骨髓造血功能異常，可引發相關性血液系統疾病。本次研究對HCMV 感染性疾病患兒并發癥進行觀察統計，顯示其并發癥可見貧血、肺炎、畸形、視網膜炎、腦炎，所占比例依次為34.29%、24.29%、8.57%、7.14%、7.14%，可見HCMV 感染能夠引起血液系統、肺、腦等組織器官病變，且并發癥發生率較高。

目前臨床治療HCMV 感染性疾病包括基礎對癥治療和抗感染治療，更昔洛韋是抗病毒藥物，能夠抑制皰疹病毒DNA 合成復制，具體作用機制為競爭性抑制脫氧鳥苷三價磷酸鹽和DNA 聚合酶結合，抑制病毒DNA 合成；同時丙氧鳥苷三價磷酸鹽能夠和病毒DNA 結合，終止病毒DNA 鏈延長，繼而抑制病毒復制［12-13］。更昔洛韋在單純皰疹病毒和HCMV 所導致的感染中具有較好治療效果，張佳佳等［14］研究顯示，更昔洛韋治療人類皰疹病毒4 型感染患兒顯效率為60%，可以明顯縮短患兒住院時間，安全有效。本次研究對HCMV 感染性疾病患兒予以更昔洛韋治療，結果顯示治療后HCMV 感染性疾病患兒尿HCMV-DNA 水平及HCMV-DNA 陽性率均較治療前顯著降低，提示更昔洛韋可以明顯抑制HCMV-DNA 復制，可控制HCMV 感染。肝功能損害是HCMV 感染重要表現之一，結果中治療后HCMV 感染性疾病患兒TBIL、DBIL、ALT 和ALP 水平均較治療前顯著降低，與李娟等人［15］研究結果相符，表明更昔洛韋可通過抑制HCMV-DNA 復制減輕肝損傷，使肝功能得到恢復。

綜上所述，HCMV 感染性疾病患兒尿HCMVDNA 水平較高，容易發生多種并發癥，如貧血、肺炎、視網膜炎等，對HCMV 感染性疾病患兒予以更昔洛韋治療，不但能夠有效降低其尿HCMV-DNA水平，且可以較好改善患兒肝功能。