廣東地區(qū)HbH病合并β地貧及中重型β地貧合并α地貧患者的血液學特征分析

張艷霞 杜麗 王繼成 秦丹卿 袁騰龍 姚翠澤 梁杰 陳延冰

(廣東省婦幼保健院 醫(yī)學遺傳中心，廣州，511442)

地中海貧血(簡稱地貧)是一類因珠蛋白合成障礙所致的常染色體隱性遺傳性溶血性疾病，主要分為α地貧和β地貧兩類。本病主要見于地中海沿岸國家及東南亞各國，是目前全球分布最廣泛、累及人群最多的一種單基因疾病，全世界大約有9000萬患者與基因攜帶者[1, 2]。本病在我國南方地區(qū)多見，是我國長江以南各省份發(fā)病率最高、影響最大的遺傳病之一，尤其以兩廣地區(qū)和海南為甚，而在廣東省育齡人群的地貧基因攜帶率約為16.8%[3]。α地貧的分子基礎是α2或α1珠蛋白基因發(fā)生缺失或點突變，使α珠蛋白產量下降，胎兒體內過多γ珠蛋白形成Hb Bart’s(γ4)，或成人體內過多的β-珠蛋白形成Hb H(β4)，導致無效造血和紅細胞破壞。α-地貧主要是由類α-珠蛋白基因簇的大片段缺失導致的，缺失范圍從幾kb到整個α珠蛋白基因簇不等。還有少量α地貧是由α珠蛋白基因的點突變導致。

β地貧是由于β珠蛋白基因突變或缺失所致，其基因突變致β鏈的生成完全受抑制者稱為 β0地貧，而基因突變致β鏈的生成部分受抑制者稱為β+地貧[4]。臨床根據(jù)貧血的嚴重程度將β地貧分為輕型、中間型和重型。

1 對象與方法

1.1 研究對象 2005年5月至2020年4月來就診于廣東省婦幼保健院醫(yī)學遺傳中心，經地中海貧血篩查和基因診斷確診的HbH病合并β地貧及中重型β地貧合并α地貧的患者，年齡為1～50歲，(因樣本量較少，故此研究選取1歲以上兒童及成年人患者作統(tǒng)計)，均為廣東地區(qū)漢族人群，所有患者均采集外周血用于血常規(guī)檢測、血紅蛋白電泳分析及地中海貧血基因檢測。

1.2 研究方法

1.2.1 血液學分析 所有患者(不需要空腹)的樣本均為經EDTA-K2真空采血管采集的外周靜脈血，其紅細胞參數(shù)由Syssmex XN5000全自動血液分析儀進行分析，血紅蛋白電泳采用CAPILLARYS 2 FLEX PIERCING全自動毛細管電泳儀及其配套試劑進行分析(法國Sebia公司生產)。

1.2.2 DNA提取和地中海貧血基因檢測 患者基因組DNA由Lab-Aid 820核酸提取儀及其配套的DNA提取試劑(廈門致善生物科技有限公司)提取，所有實驗操作均嚴格按照SOP要求進行。應用gap-PCR和PCR-RDB方法進行地中海貧血基因檢測(亞能生物技術有限公司)，同時利用Luminex200(Luminex Corporation，美國)(試劑采用達安臨床檢驗中心有限公司擴增及雜交試劑)的方法進行基因診斷結果的相互驗證。檢測范圍包括α地貧3種常見缺失型(3.7、4.2、SEA)和3種點突變類型(CS、QS、WS)以及中國人最常見的17種β-地貧的點突變。

1.2.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料用均數(shù)±標準差表示；獨立樣本組間比較采用t檢驗(P<0.05為具有統(tǒng)計學意義)。

2 結果

2.1 血常規(guī)參數(shù)檢測結果 HbH病合并β地貧的患者有19例(男性7例，女性12例)，其血紅蛋白(hemoglobin，Hb)的平均水平為(103.32±16.66)g/L，男性為(120.57±9.82)g/L，女性為(93.25±10.41)g/L；其紅細胞平均水平為(6.23±0.95)×1012/L，男性為(7.26±0.68)×1012/L，女性為(5.63±0.40)×1012/L；男性與女性的Hb及紅細胞計數(shù)(red blood count，RBC)平均水平比較，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)男性與女性的平均紅細胞體積(mean corpuscular volume，MCV)及平均紅細胞血紅蛋白量(mean corpuscular hemoglobin，MCH)平均水平比較，差別沒有統(tǒng)計學意義(P>0.05)；中重型β地貧合并α地貧的患者有19例(男性8例，女性11例)，其Hb的平均水平為(91.89±16.44)g/L，男性為(97.88±12.85)g/L，女性為(87.55±17.37)g/L。其紅細胞平均水平為(4.81±1.10)×1012/L，男性為(5.12±0.85)×1012/L，女性為(4.57±1.20)×1012/L；男性與女性的Hb及RBC平均水平比較，差別沒有統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 兩種類型的中間型貧血患者的血常規(guī)參數(shù)對比

2.2 血紅蛋白電泳檢測結果 HbH病合并β地貧的患者中，HbA2的平均水平為(4.55±0.94)%；男性為(4.33±1.32)%，女性為(4.68±0.58)%，男性與女性的HbA2平均水平比較，差別沒有統(tǒng)計學意義(P>0.05)。中重型β地貧合并α地貧的患者中，HbA2的平均水平為(4.94±2.62)%，男性為(3.85±1.84)%，女性為(5.74±2.80)%；男性與女性的HbA2平均水平比較，差別沒有統(tǒng)計學意義(P>0.05)。HbF平均水平為(32.41±29.90)%，沒有顯著增高。詳細的血紅蛋白電泳結果見表2。

表2 兩種類型的中間型貧血患者的血紅蛋白參數(shù)對比

3 討論

HbH病是α0和α+地中海貧血的雙重雜合子狀態(tài)，根據(jù)其基因突變類型主要分為缺失型和非缺失型兩種類型，根據(jù)累及的珠蛋白基因類型不同，臨床表現(xiàn)差異很大，可表現(xiàn)為輕度到重度貧血癥狀。

重型β地貧的基因型為純合子或復合雜合子狀態(tài)。重型β地貧患兒出生后癥狀進行性加重，如不進行有效干預，難以活到成年。全球每年約有23 000例重型β地貧患兒出生[5]。

本研究的19例HbH病合并β地貧患者的血液學參數(shù)分析顯示，此類患者的Hb平均水平為(103.32±16.66)g/L，為輕至中度貧血，其HbA2為(4.55±0.94)%，這與國內學者阮麗明等[6]報道的142例血紅蛋白H病患者血液學與分子生物學檢測結果分析中的數(shù)據(jù)[缺失型HbH病的Hb平均水平(98.16±14.48)g/L，非缺失型HbH病的Hb平均水平(77.15±9.53)g/L]及HbA2平均水平[缺失型HbH病(1.71±0.43)%，非缺失型HbH病(1.22±0.65)%]都要高；也比陳素琴等[7]報道的中國南方地區(qū)血紅蛋白H病的基因型與表型的相關性研究的數(shù)據(jù)要高；而與黎小紅等[7]報道的64例HbH病的基因類型與血液學相關參數(shù)分析中的數(shù)據(jù)[--/-α合并β地貧的Hb平均水平為(124.04±13.16)g/L]相比有差異，這可能與地域及年齡差異有關。本研究中男性Hb平均水平明顯高于女性，對于這一現(xiàn)象的解釋，除了由于男性生理上Hb正常參考值范圍高于女性外，可能還與此研究中女性患者大部分為來院產檢的孕婦有關。雖然女性在懷孕期間的生理變化，如血容量的擴大，會加重貧血的嚴重性，但此研究中的女性患者貧血程度仍然為輕中度貧血，比單純HbH病患者貧血程度要輕。

本研究的19例中重型β地貧合并α地貧患者的Hb平均水平為(91.89±16.44)g/L，也為輕至中度貧血，比劉小勇[8]及周文英[9]報道的重型 β-地中海貧血Hb平均水平高；本研究中此類患者的HbF平均水平為(32.41±29.90)%，沒有顯著增高。

本研究中，兩種類型的地貧患者中臨床上出現(xiàn)輕中度貧血，比單純HbH病患者及單純重型β地貧患者的貧血程度要輕。本次研究由于病例數(shù)較少，故沒有比較兩種類型地貧患者中未成年人與成年人及孕婦與普通成年女性的血液學參數(shù)。但有文獻報道[10]，非缺失型HbH病患兒在其嬰幼兒后期會逐漸出現(xiàn)貧血癥狀，隨著年齡增大貧血程度加重，而且貧血程度比缺失型HbH患兒更重。

總之，了解HbH病合并β地貧及中重型β地貧合并α地貧患者的血液學參數(shù)表現(xiàn)，有助于今后在產前診斷及遺傳咨詢中向臨床醫(yī)生提供更好的依據(jù)，也有利于給予患者(尤其是夫婦雙方均為地貧的患者)更好更全面的建議。今后，我們將積累和分析更多的包括兒童及孕婦在內的各種病例數(shù)據(jù)，從而獲得更精確的統(tǒng)計學分析結果。