α2珠蛋白基因CD30 (delGAG)突變的臨床表型分析及產前基因診斷

梁杰 王繼成 秦丹卿 姚翠澤 袁騰龍 梁凱玲 杜麗

(廣東省婦幼保健院 醫學遺傳中心，廣東 廣州 511400)

α地中海貧血(簡稱α地貧)是由于編碼α珠蛋白肽鏈的α珠蛋白基因突變導致α珠蛋白鏈合成減少或缺如，最終導致溶血性貧血的一種遺傳性血紅蛋白病；α珠蛋白基因突變主要是大片段缺失，以及少部分點突變。我國南方人群常見的缺失型突變類型主要是--SEA/、-α3.7/和-α4.2/，非缺失型突變主要是位于α2珠蛋白基因的αCSα/、αQSα/和αWSα/[1-3]。目前HbVar數據庫已報道400余種發生在α2珠蛋白基因的突變類型，但關于CD30 (delGAG)突變的報道較少，鑒于此，我們收集了5例CD30 (delGAG)突變患者及家系對其血液學指標和表型特征進行分析，現報道如下。

1 對象與方法

1.1 對象 2015～2020年就診于廣東省婦幼保健院且經地貧基因診斷確診為CD30 (delGAG)突變的5例患者。所有病例均為廣東籍，年齡為25～39歲，包括成年的4名男性和1名女性。對其中需進行產前診斷的4個家系孕婦，于孕16～22周行羊膜腔穿刺術，抽取羊水行地貧產前基因診斷。

1.2 方法

1.2.1 血常規及血紅蛋白分析 采集所有研究對象外周靜脈血各2ml，EDTA-K2抗凝，應用邁瑞2000血液分析儀和法國Sebia capillary2毛細管電泳儀分別進行血常規檢測和血紅蛋白電泳分析。

1.2.2 DNA制備及地中海貧血基因分析 采用Magpure tissue&Blood DNA KF Kit試劑盒進行外周血DNA提取，采用QIAamp DNA Blood Mini Kit試劑盒從羊水脫落細胞進行胎兒DNA提取，所有操作均按試劑盒說明書進行。應用gap-PCR和聚合酶鏈反應-反向點雜交(polymerase chain reaction-reverse dot blotting，PCR-RDB)方法檢測3種常見的缺失型α地貧，3種非缺失型α地貧以及常見的17種β地貧基因點突變，試劑盒由亞能生物技術有限公司提供。

1.2.3 α珠蛋白基因測序 設計引物分別擴增α1和α2珠蛋白基因，引物序列：α1上游引物：5′-TGGAGGGTGGAGACGTCCTG-3′，下游引物：5′- TCCATCCCCTCCTCCCGCCCCTGCCTTTTC-3′；α2上游引物：5′-GATGGGCGGGAGTGGAGT-3′，下游引物：5'-GGACAGGGGATGGTTCAGC-3′，產物大小分別為1181 bp和1241 bp。PCR擴增產物交由上海英濰捷基生物有限公司進行測序。

2 結果

2.1 血液學分析結果 在5例CD30 (delGAG)突變病例中，4例CD30雜合子的平均紅細胞體積(mean corpuscular volume，MCV)值及平均紅細胞血紅蛋白量(mean corpuscular hemoglobin，MCH)值均降低，呈小細胞低色素性表現，血紅蛋白組分分析正常。另1例--SEA/αCD30α 病例則表現有輕度貧血，除小細胞低色素特征以外，可見35.8%的HbH帶及0.6% Hb Bart’s帶，表現為中間型α地貧。詳細的血液學分析結果見表1。

表1 5例患者血液學指標和基因診斷結果

2.2 基因診斷結果 5例患者中僅1例檢出復合東南亞型α地貧(--SEA/)(病例4)，另外4例均排除常見地貧基因突變類型，詳見表1。如圖1所示，α珠蛋白基因測序結果提示病例4為CD30(delGAG) 純合突變，其余均為CD30 (delGAG)雜合突變。病例5未追蹤到其配偶及胎兒妊娠情況，其余進行產前診斷的4個家系中檢測到2例胎兒為--SEA/αCD30α，1例胎兒為αCD30α/αα，另1例胎兒為--SEA/-α4.2。家系各成員的基因診斷結果詳見表2。

表2 家系各成員的基因診斷結果

圖1 α2珠蛋白突變的測序圖

3 討論

我國的廣東、廣西等南方地區為地中海貧血的高發區，廣東省育齡人群的α地貧攜帶率達13%以上[4]，α1、α2珠蛋白基因或者調控序列上的點突變均可導致非缺失型α地貧。CD30突變位于α2珠蛋白基因，該突變引起第30號密碼子框內缺失(delGAG)形成一個略短的由140個氨基酸組成的α -珠蛋白鏈，根據研究報道[5]，這種蛋白質較不穩定，易受到水解破壞，其水解可能耗盡紅細胞前體的蛋白水解活性，導致胎兒期過量的γ-鏈無法清除。

本研究納入5例CD30 (delGAG)突變病例，其中4例是CD30雜合子，血液學表現為輕度小細胞低色素，血紅蛋白值正常。此前關于CD30 (delGAG)突變已有文獻報道，Yu等[6]分析了3例CD30雜合子和2例--SEA/αCD30α患者的血液學及臨床表現，本研究的雜合子表型與其基本一致。

本研究檢出1例為復合東南亞型α地貧(--SEA/αCD30α)的中間型表型患者，既往體健，因配合其妻子行產前篩查方被查出。Yu等[6]報道的2例--SEA/αCD30α患者與本研究不同，Hb H帶僅有0.5%和1.6%，Hb Bart’s帶為1.1%和2.3%。其中1例女性患者有貧血和肝脾腫大史，在童年期發生感染引發溶血危機而需輸血，并在7歲進行脾臟切除后無需輸血。陳萍等[7]也報道了1例 --SEA/αCD30α 男性Hb H病患者，自幼黃疸伴肝脾腫大，血液學分析示小細胞低色素性輕度貧血，該病例也顯示高水平的Hb H帶及Hb Bart’s帶。有證據表明，非缺失型Hb H病較缺失型Hb H病表型更為嚴重，通常表現為嚴重的貧血、溶血和脾腫大，輸血治療更為迫切[8]。與其他非缺失型Hb H病相比(如HbH-CS和Hb H-QS)，本研究的中間型病例雖然Hb H水平較高，但貧血嚴重程度較輕[9]。通常高水平的Hb H與臨床癥狀嚴重程度相關，因為Hb H不穩定易在紅細胞中沉淀，形成特征性的Hb H包涵體可造成紅細胞膜損傷。本例患者Hb H含量高可能是由于CD30 (delGAG)形成的α-珠蛋白鏈極不穩定迅速降解，不與β鏈形成四聚體，導致過剩的β鏈自行形成四聚體，但該病例沒有明顯貧血的原因還有待進一步研究。產前診斷的4個家系中，也檢測到1例基因型為--SEA/αCD30α的胎兒，雖然本研究同基因型患者僅表現為輕度貧血無需輸血，但Yu等[6]報道的1例相同基因型的女性患者卻需要進行輸血治療，也曾有報道CD30突變復合ζ-α 地貧出現胎兒水腫[10]，所以此類Hb H病的臨床表現嚴重程度個體差異較大。在臨床遺傳咨詢中，對于這類基因型需要加以解釋說明其表型的多樣性，我們建議謹慎考慮和選擇胎兒去留。

綜上所述，α2珠蛋白基因CD30 (delGAG)突變攜帶者無貧血癥狀，復合其他α地貧突變時，會加重相關血液學表現。由于此突變不在臨床地貧常見基因突變類型檢測范圍內，因而容易造成誤診和漏診，因此應用其他分子方法精確診斷此突變對遺傳咨詢和產前診斷具有重要價值。