實時熒光PCR探針法檢測丙型肝炎病毒核酸的應用效果分析

邵長年

[摘要]目的：分析對接受丙型肝炎病毒核酸檢查的患者實施實時熒光PCR探針法檢測方式的應用效果。方法：選擇2018年12月至2020年12月，在血站環境中拿到的樣本40例丙型肝炎病毒感染患者及40例健康體檢者作為研究對象，均接受實時熒光PCR探針法檢測，并分為觀察組（40例，丙型肝炎病毒感染患者）和對照組（40例，健康體檢者）。結果：對比兩組研究對象的PCR檢出結果、觀察組HCV-RNA陽性血清分型檢出結果，與對照組相對比，觀察組抗-HCV陽性檢出人數、ALT異常人數更多，1b型檢出人數最多，3b型檢出人數最少，數據對比有統計學差異（P<0.05）。結論：對丙型肝炎病毒感染者實施實時熒光PCR探針法檢測，可有效檢出受檢者是否感染有丙型肝炎病毒，且能有效鑒別診斷其具體的病毒基因感染類型，使患者能得到更有針對性的救治。

[關鍵詞]丙型肝炎病毒;核酸檢查;實時熒光PCR;探針法;應用效果

[中圖分類號]R373.21;R440

[文獻標識碼]A

[文章編號]2096-5249（2021）17-0177-02

丙型肝炎病毒是1989年美國科學家邁克爾發現的一種新型病毒種類，此病毒為單股正鏈的RNA病毒，且具有一定傳染性，經血源傳播、母嬰傳播、性傳播等方式，均可造成病毒感染現象，一旦患者因病毒感染而誘發肝炎病癥，則會對其肝功能造成較大損傷，致其肝臟出現慢性炎癥壞死、纖維化等問題，嚴重影響患者的生命健康[1-2]。因此可利用實時熒光PCR探針法檢測方式對丙型肝炎病毒患者進行有效檢查診斷，為醫師的臨床診斷提供有效依據，使患者能盡快得到有效且有針對性的救治。則為進一步探究此檢測方式的應用情況，本研究主要分析了對接受丙型肝炎病毒核酸檢查的患者實施實時熒光PCR探針法檢測方式的應用效果，具體如下。

1資料與方法

1.1一般資料選擇2018年12月至2020年12月，在血站環境中拿到的樣本40例丙型肝炎病毒感染患者及40例健康體檢者作為研究對象，均接受實時熒光PCR探針法檢測，并分為觀察組（40例，丙型肝炎病毒感染患者）和對照組（40例，健康體檢者），其中觀察組女17例、男23例，年齡范圍為19～72歲，平均年齡（45.73±6.32）歲;對照組女19例、男21例，年齡范圍為20～71歲，平均年齡（45.78±6.34）歲。通過應用統計學對比分析后顯示，兩組患者年齡、性別組成等基線資料差異細微（P>0.05），有可比性。納入標準：本研究中所有丙型肝炎病毒感染患者，均符合《丙型肝炎防治指南》中診斷標準[3];研究選擇的所有研究對象及其家屬均自愿簽字同意，并經由醫學倫理委員會同意。排除標準：研究對象合并有其他免疫系統疾病;研究對象合并有其他肝功能障礙病癥;研究對象有長期酗酒問題;研究對象合并有其他藥物性、中毒性疾病。

1.2方法本研究中所有研究對象均接受實時熒光PCR探針法檢測，其檢測方式具體如下：樣本采集：采集所有研究對象的血液樣本，于其清晨空腹時，用一次性非抗凝負壓采血管采集3mL靜脈血，并在2h內送檢，經離心處理后，取上層血清，于-70°C環境下保持。丙型肝炎病毒RNA檢測：利用RT-PCR-熒光探針法對受檢者進行丙型肝炎病毒RNA檢測，用試劑（中山大學達安基因股份有限公司）、熒光PCR擴增儀（北京樂普醫療科技有限責任公司，型號Lepgen-96）對受檢者進行血清中的丙型肝炎病毒核酸檢測。其涉及到的方式有：1RNA提取，首先需提取丙型肝炎病毒的RNA，可直接利用核酸提取試劑（廈門泰普生物科學有限公司）的丙型肝炎病毒分型試劑盒，進行RNA提取;2PCR擴增，向1b亞型、2a/6a亞型、3a/3b亞型及酶系等反應體系中加入10uL的RNA提取物，混合均勻后，將待測物放置在熒光PCR擴增儀中進行PCR擴增，擴增儀參數設定分別為42°C30min、95°C3min、94°C20s、55°C20s、72°C30s，所有檢測均需進行10個循環，后再分別在94°C、60°C條件下擴增15s、45s，30個循環;3PCR-熒光探針分型，擴增完成后，即可進一步檢測其RNA具體類型，將熒光探針設定為FAM-TAMAR、JOE-TAMAR在60°C、45s環境下進行熒光信號收集，有效鑒別診斷丙型肝炎病毒的1b、2a、6a、3a、3b這五種亞型類型。最后統計記錄相關檢測結果及指標數據。

1.3觀察指標統計分析兩組研究對象的PCR檢出結果，包括統計抗-HCV陽性檢出人數及ALT異常人數，由于HCV-RNA檢出值的升高，抗-HCV陽性及ALT異常的檢出人數也會有所上升，因此通過這兩項指標數據的對比，可有效評估丙型肝炎病毒感染者同健康體檢者間的PCR檢出結果差異性。對觀察組HCV-RNA陽性血清分型檢出結果進行統計分析，即統計經PCR-熒光探針分型檢測后，檢出結果分別為1b、2a、3a、3b這四種基因類型的患者人數，以進一步評估丙型肝炎病毒感染者具體的感染情況。

1.4統計學方法使用SPSS20.0軟件對數據進行統計學分析，使用t和x±s表示計量資料，使用χ2和%表示計數資料，P<0.05表示數據差異有統計學意義。

2結果

2.1兩組研究對象PCR檢出結果的對比在本研究中對兩組研究對象的PCR檢出結果進行對比分析，觀察組抗-HCV陽性檢出人數及ALT異常人數相比于對照組更多。數據對比有統計學差異（P<0.05），詳情如表1所示。

2.2觀察組HCV-RNA陽性血清分型檢出結果的對比在本研究中對觀察組HCV-RNA陽性血清分型檢出結果進行對比分析，其中1b型檢出人數最多，3b型檢出人數最少。數據對比有統計學差異（P<0.05），詳情如表2所示。

3討論

丙型肝炎病毒感染是導致丙型病毒性肝炎的主要原因，且此病毒具有較強傳染性，人群普遍易感，經血源傳播、母嬰垂直傳播等方式，均可導致丙型肝炎病毒感染現象，且丙型肝炎病毒感染后，在病程前期，感染者多無明顯臨床癥狀，極易致其錯失病毒感染前期的最佳診療時間，待其出現食欲下降、腹脹等癥狀時，其肝功能多已受到一定損傷，因此需及時對丙型肝炎病毒感染者或疑似感染者進行有效檢查，使其能得到及時有效的救治[4]。

利用實時熒光PCR探針法檢測方式對丙型肝炎病毒患者進行臨床檢查診斷，在此檢查過程中，PCR主要是指放大擴增特定DNA片段，即于生物體外進行特殊DNA復制，最終通過對其基因序列的觀察判斷，有效鑒別受檢物質的具體情況。而實時熒光定量PCR則主要是在PCR反應體系中加入熒光基因，以便于醫師對PCR進程進行進一步的監控、觀察，有利于醫師對其檢驗結果的評估。同時利用實時熒光PCR探針法，在混有熒光基因的PCR進程中，對經反應后的熒光信號進行收集，可有效提升醫師對檢驗結果診斷的精準度[5-6]。在本研究中，通過健康體檢者同丙型肝炎病毒感染者間，實時熒光PCR探針檢驗結果的對比可知，丙型肝炎病毒感染者的抗-HCV陽性檢出人數及ALT異常人數更多，這主要是由于肝炎病毒感染后，機體會后相應抗體的產生，以抵抗病毒對人體的侵害。而ALT主要存在于肝細胞中，則一旦人體肝臟受到損傷，肝細胞出現異常，則ALT檢測值也會有所變動，因此隨受檢者機體內HCV-RNA檢出值的提升，這兩項指標也會有所變化。在分型檢查方面，1b型檢出人數最多，而隨病毒感染基因類型的不同，其對人體的損傷也會有所不同，干擾素等診療方式也會有所不同。

綜上所述，對丙型肝炎病毒感染者實施實時熒光PCR探針法檢測，可有效檢出受檢者是否感染有丙型肝炎病毒，且能有效鑒別診斷其具體的病毒基因感染類型，使患者能得到更有針對性的救治。

參考文獻

[1]向秀華，李丹，徐文波，等.實時熒光PCR探針法檢測丙型肝炎病毒核酸性能驗證[J].化學工程與裝備，2020，28（10）：256-257.

[2]郭杰，曲沛，李韋杰，等.丙型肝炎病毒核酸定量檢測性能驗證及評價[J].傳染病信息，2019，32（5）：394-398.

[3]饒慧瑛，段鐘平，王貴強，等.《丙型肝炎防治指南（2019年版）》重要更新要點[J].中華肝臟病雜志，2020，28（2）：129-132.

[4]王俊芳.應用雙抗原夾心法和間接法兩種方法檢測丙型肝炎病毒抗體的結果比較[J].中國療養醫學，2019，28（02）：124-126.

[5]張云丹，楊源，王軍，等.I群禽腺病毒血清4型TaqMan探針實時熒光定量PCR檢測方法的建立及應用[J].西北農業學報，2019，28（6）：20-28.

[6]馬紅霞，潘靜靜，李懿，等.實時熒光RT-PCR方法檢測新型冠狀病毒核酸結果分析[J].中華微生物學和免疫學雜志，2020，40（4）：245-249.

（收稿日期：2021-3-19 接受日期：2021-4-30）