喉癌及癌前病變中hPOT1的表達及其與HP感染的相關研究

楊艷青 張麗萍 張立榮 朱 文

（黑龍江省哈爾濱市第四醫院，黑龍江 哈爾濱 150026）

喉癌的發生是一個多因素綜合作用的結果，如常見喉癌發生的危險因素有吸煙、飲酒、食管反流、生物學因素等。近幾年有報道：HP感染增加喉癌的發病風險，二者的關系較為密切[1]。最初發現hPOT1基因組織是一種癌癥基因是美國的兩名學者，這種癌基因在出現之后會存留于真核細胞內，因此有被稱為“看家基因”，能夠非常優秀的支持端粒功能同時使患者體內的染色體更佳穩定，促進細胞加速生長與衍生，以上作用皆反映了此因子的重要性[2-6]。至目前為止，對于喉部癌癥和癌前病變的臨床研究中，HP感染和人端粒保護蛋白表達情況調查相對較少見。本研究通過免疫組化檢測喉癌及癌前病變組織中hPOT1的表達及HP的感染情況，探討喉癌及癌前病變中hPOT1的表達及與HP感染的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 所有標本均來自本院病理科存檔蠟塊（2015—2018年）。HE切片經鏡下病理檢查證實為喉乳頭狀瘤、喉角化癥、喉鱗狀上皮不典型增生、喉鱗狀細胞癌，其中喉乳頭狀瘤、喉角化癥、不典型增生均視為喉癌前病變；喉鱗狀細胞癌視為喉癌。共100個樣本（手術前均未進行治療），其中喉癌前病變、喉癌各50例。喉不典型增生HE切片見圖1，喉鱗狀細胞癌HE切片見圖2。

1.2 試劑 檢測鼠抗hPOT1單抗所使用的儀器為美國進口產品，需使用的各種試劑盒與抗體提供商為江蘇衡州生物技術有限公司提供，包含免抗HP、試劑盒——免疫化學組織SP與DAB。

1.3 方法 蠟塊切3～4 μm厚白片，免疫組化采用SP法，按說明書步驟操作。

圖1 喉不典型增生（HE×20）

圖2 喉鱗狀細胞癌（HE×20）

1.4 結果判定 細胞核與胞質是為顯示人端粒保護蛋白顯色的主要定位所在，顆粒狀，除特殊情況外多半顯示為棕黃色。數據計算標準：在顯示器上隨機定位五點，記錄下對應視野對其進行評分，標準為染色程度和陽性細胞比率顯示。其中，染色陽性細胞評分中0分：≤5%；1分：6%～25%；2分：26%～50%；3分：≥51%。染色程度分級標準如下。0分：99%以上不著色；1分：顏色輕且淺黃色；2分：表現正黃色；3分：棕褐色。將兩組患者的基線評分險相乘，若結果高于4分，表示患者為癌癥陽性，若再0≤X≤3分，表示為陰性。

HP判定標準：幽門螺桿菌菌體呈棕黃色表達。

1.5 統計學處理 應用SPSS16.0統計軟件包進行數據分析，計數資料行χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 hPOT1表達及HP感染情況 喉癌前病變、喉癌患者hPOT1表達陽性率分別為38%、86%，經χ2檢驗有統計學意義，χ2=24.448，P=0.000。喉癌患者的hPOT1表達陽性率明顯高于喉癌前病變患者。見表1。hPOT1表達及HP感染情況見圖3、圖4。

圖3 喉不典型增生HP感染（×20）

圖4 喉乳頭狀瘤HP感染（×20）

喉癌前病變、喉癌患者HP感染陽性率分別為66%、24%，經χ2檢驗有統計學意義，χ2=17.818，P=0.000。喉癌前病變患者的HP感染陽性率明顯高于喉癌患者。見表1。

2.2 HP陽性組和HP陰性組患者中hPOT1蛋白表達的變化 喉癌前病變HP陰性組、陽性組患者hPOT1蛋白表達的陽性率分別為11.76%、51.51%，HP陽性組高于HP陰性組，經χ2檢驗有統計學意義，χ2=7.525，P=0.006。見表2。HP陽性組和HP陰性組患者中hPOT1蛋白表達的變化見圖5、圖6。

圖5 喉不典型增生hpot1陽性表達胞質（×20）

圖6 喉鱗狀細胞癌hpot1陽性表達胞質（×20）

喉癌HP陰性組、陽性組患者hPOT1蛋白表達的陽性率分別為84.21%、91.66%，HP陽性組高于HP陰性組，經χ2檢驗沒有統計學意義，χ2=0.421，P＞0.05（P=0.516）。見表2。

表1 喉癌前病變、喉癌患者hPOT1蛋白表達及HP感染情況

表2 HP陽性組和HP陰性組患者中hPOT1蛋白表達的變化

3 討論

喉癌是頭頸部科室中發病率最高的惡性腫瘤疾病之一，在全身所有惡性腫瘤中占比為5.7%～7.6%，鱗狀細胞癌則是其病理類型。對于喉癌臨床中的致病因素目前仍未完全明確，其中長期吸煙與酗酒、人類乳頭狀瘤病毒、性激素以及放射性損傷等可能與喉癌的發病相關，近來有研究表明：HP感染可能是喉癌發生發展的危險因素之一[7-10]。喉癌的發生發展是一個長時間、多階段的過程。hPOT1屬于端粒單鏈結合蛋白，它也許在調控端粒的長度、保護末端和分裂細胞過程中能起作用，DNA的損傷結果致使端粒功能重度失活，阻礙了轉細胞的正常生長機制，這也是導致腫瘤疾病得以不斷增殖的原因之一[11-13]。但是，有關喉癌的發生機制與發展研究有關報道仍舊較少。

本研究選擇免疫組化法進行檢測，結果顯示：喉癌前病變、喉癌患者HP感染陽性率分別為66%、24%，經χ2檢驗，二者感染情況有顯著性差異（P＜0.05）。結果提示：喉癌前病變患者中HP感染陽性率高于喉癌，HP感染可能在喉癌的早期事件中發揮一定的作用，但在喉癌組織中HP感染陽性率反而低于癌前病變，原因可能是由于喉癌組織中的環境改變了，而這種改變后的環境不適合HP的存活，最終導致在喉癌組織中HP的表達降低，具體機制還有待于今后更深入的研究。本研究結果進一步提示：HP感染可能是喉癌的致病因素之一，可能參與喉癌的發生。本研究結果與Titiz等[14]文獻報道相符合。盡量根除HP感染可能會降低癌前病變的發生[14-18]，進而降低喉癌的出現。所以，為控制喉癌發生可通過盡早清除HP感染完成，對限制疾病發生具有重要意義。