一種由大體積惡性胸腔積液中分離腫瘤細胞的方法初探

王閆飛 梁震 劉勇 寇芙蓉 姜丹鳳 鄭艷群 劉巍 朱步東

惡性胸腔積液（malignant pleural effusion, MPE）是晚期惡性腫瘤常見并發癥，如非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）、乳腺癌、淋巴瘤等[1]。分離和鑒定MPE中腫瘤細胞及其基因突變類型對于疾病診斷、病情評估以及治療策略的制定有重要臨床意義。目前，有多種方法用于從MPE中分離腫瘤細胞，如激光捕獲顯微切割技術、流式細胞分選技術以及磁珠捕獲等，但這些方法共同缺點是不能實現從大體積MPE中高通量分選腫瘤細胞，部分技術在分選過程中還需對細胞進行固定和染色，使得分離細胞不能進行后續培養和分析，進一步限制了這些方法的廣泛運用[2-4]。

本研究基于腫瘤細胞與正常細胞在細胞分離液中沉降系數不同，聯合運用細胞分離介質Percoll和Ficoll通過密度梯度離心方法分離、富集大體積MPE中的腫瘤細胞。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取2018年8月-2018年10月于北京大學腫瘤醫院日間病房門診操作室進行胸腔積液引流的20例連續的伴MPE的晚期肺癌患者，留取一次引流操作收集的全部胸腔積液，胸腔積液量500 mL-1,000 mL。患者平均年齡（60.9±11.4）歲，男性13例，女性7例，男女比例1:0.54。所有患者均經病理確診為肺癌，其中腺癌18例，小細胞癌2例。其中10例肺腺癌患者已進行腫瘤組織二代基因測序（next-generation sequencing, NGS）基因檢測，檢測實驗室與panel不限。所有患者胸腔積液脫落細胞學均找見腫瘤細胞。本研究經醫學倫理委員會批準，所有患者均簽署了知情同意書。

1.2 試劑 Percoll細胞分離液（上海前塵生物科技有限公司），Ficoll-PaqueTMPLUS單核細胞分離液（GE Healthcare），RPMI-1640培養基（Thermo Fisher）。……