規模化豬場豬圓環病毒2型感染的實驗室診斷

徐春志 ，藺俐仲 ，鄧珊珊 ，張 海 ，景書灝 ，楊 源 ，劉 艷 ，袁 林 ，袁 標

（1. 貴陽市動物疫病預防控制中心，貴州 貴陽 550081；2. 貴陽市草地站，貴州 貴陽 550081；3. 清鎮市農業農村局，貴州 貴陽 551400；4. 息烽縣農業農村局，貴州 貴陽 550300）

豬圓環病毒（PCV）屬圓環病毒科圓環病毒屬，為無囊膜單股環狀負鏈DNA病毒[1]，分為PCV1、PCV2和PCV3共3個血清型[2]。PCV1對豬只無致病性。PCV2是斷奶仔豬多系統衰竭綜合征（PMWS）的主要病原，表現為斷奶后仔豬，特別是6～8周齡仔豬，以發熱、精神不振、被毛粗亂、消瘦、皮膚蒼白、咳嗽、呼吸困難為常見癥狀。PCV3是一種從豬體內鑒定的新亞型，其臨床癥狀和致病機制尚不明確[3]。豬瘟（CSF）是由豬瘟病毒（CSFV）引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起豬以繁殖障礙為主的動物傳染病，也被稱為“豬藍耳病”。偽狂犬病（PR）是由偽狂犬病病毒（PRV）引起的多種家畜和野生動物以發熱、奇癢（豬除外）及腦脊髓炎為主要癥狀的一種急性傳染病。

試驗通過采用ELISA方法對貴州省某規模化豬場送檢的懷孕母豬、產房母豬、后備母豬、種公豬、哺乳仔豬、保育仔豬6個豬群90份血清樣本進行豬瘟病毒、豬藍耳病病毒、偽狂犬病病毒gB蛋白、偽狂犬病病毒gE蛋白血清抗體檢測；采用熒光PCR方法對送檢的90份血清樣本和1份豬淋巴結組織進行豬瘟病毒、豬藍耳病病毒、偽狂犬病病毒和豬圓環病毒2型核酸檢測。旨在確診該規模化豬場保育仔豬異常死亡原因，以期為該豬場防控策略的制定提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 檢測樣本

采集某規模化豬場豬血清樣本90份（其中：懷孕母豬20份、產房母豬10份、后備母豬17份、種公豬3份、哺乳仔豬20份、保育仔豬20份），病死豬淋巴結組織樣本1份。經調查，該豬場分別免疫過豬口蹄疫O型滅活疫苗、高致病性豬藍耳病弱毒疫苗、豬瘟傳代細胞苗和豬偽狂犬病gE基因缺失苗。具體免疫程序如下：FMD（每4個月免疫1次）；CSF（種公豬每年春、秋各免疫1次；種母豬配種前10 d免疫1次，產后10 d加強免疫1次，以后每次免疫應于產后進行，妊娠期不再免疫）；PRRS（種公豬每年春、秋各免疫1次；后備種豬配種前5～6周和2～3周各免疫1次；生產母豬配種前12 d免疫1次，以后每5個月免疫1次）和PR（種公豬每年春、秋各免疫1次；后備種豬配種前7 d免疫1次，以后每隔4個月免疫1次）。

1.2 檢測試劑盒

豬瘟病毒、豬藍耳病病毒、豬偽狂犬病病毒gB蛋白、豬偽狂犬病病毒gE蛋白ELISA抗體檢測試劑盒以及豬瘟病毒、豬藍耳病病毒、豬偽狂犬病毒、豬圓環病毒2型熒光PCR檢測試劑盒均購自無錫優聯生物技術有限公司。

1.3 檢測方法及結果判定

采用ELISA抗體檢測試劑盒對采集的90份血清樣本分別進行豬瘟病毒、豬藍耳病病毒、豬偽狂犬病病毒gB蛋白和豬偽狂犬病病毒gE蛋白抗體檢測；對送檢的血清樣本和病死豬淋巴結樣本采用豬瘟病毒、豬藍耳病病毒、豬偽狂犬病病毒和豬圓環病毒2型熒光PCR檢測試劑盒分別進行檢測。檢測方法和檢測結果判定參照試劑盒說明書進行。

2 結果與分析

2.1 不同豬群豬瘟抗體檢測結果

不同豬群采集的90份血清樣本經豬瘟病毒ELISA抗體檢測試劑盒進行檢測，結果見表1。

由表1可知，懷孕母豬、產房母豬、后備母豬、種公豬、哺乳仔豬、保育仔豬6個豬群豬瘟抗體平均陽性率為87.78%，其中，懷孕母豬、產房母豬、哺乳仔豬群的抗體陽性率均為100%，種公豬和保育仔豬群抗體陽性率均低于農業農村部要求的大于70%標準。

2.2 不同豬群豬藍耳病抗體檢測結果

不同豬群采集的90份血清樣本經豬藍耳病病毒ELISA抗體檢測試劑盒進行檢測，結果見表2。

由表2可知，懷孕母豬、產房母豬、后備母豬、種公豬、哺乳仔豬、保育仔豬6個豬群豬藍耳病抗體平均陽性率為70.00%，其中，懷孕母豬、產房母豬群抗體陽性率均為100%，種公豬、哺乳仔豬和保育仔豬群抗體陽性率均低于農業農村部要求的大于70%標準。

2.3 不同豬群豬偽狂犬病病毒gB蛋白抗體檢測結果

不同豬群采集的90份血清樣本經豬偽狂犬病病毒gB蛋白ELISA抗體檢測試劑盒進行檢測，結果見表3。

由表3可知，懷孕母豬、產房母豬、后備母豬、種公豬群的豬偽狂犬病病毒gB蛋白抗體陽性率均為100%，所有豬群的抗體陽性率均達到農業農村部要求的大于70%標準。

2.4 不同豬群豬偽狂犬病病毒gE蛋白抗體檢測結果

不同豬群采集的90份血清樣本經豬偽狂犬病病毒gE蛋白ELISA抗體檢測試劑盒進行檢測，結果見表4。

由表4可知，6個豬群中懷孕母豬群檢測出4份豬偽狂犬病病毒gE蛋白抗體陽性樣本，陽性率為20.00%（4/20），其余豬群未檢測出陽性。由于該豬場疫苗免疫使用的為豬偽狂犬病gE基因缺失苗，提示懷孕母豬群可能存在偽狂犬病野毒感染。

2.5 病毒核酸檢測結果

對送檢的90份血清樣本和1份淋巴結組織采用熒光PCR檢測方法分別進行豬瘟病毒、豬藍耳病病毒、偽狂犬病病毒和豬圓環病毒2型核酸檢測，結果顯示：豬瘟病毒、豬藍耳病病毒和偽狂犬病病毒核酸檢測均為陰性，豬圓環病毒2型核酸檢測淋巴結組織顯示陽性，說明該豬場存在豬圓環病毒2型感染，結果見圖1。

3 討論

1）近年來，隨著集約化養殖的不斷擴大，以PCV2為主的PCV感染已成為我國豬群的一種常見多發性疫病。自1991年PCV2在加拿大北部被發現以來[4]，世界各地相繼報道了PCV2的存在，我國大陸地區在2000年首次報道[5]。吳瑗等[6]對浙江省及周邊地區2007—2012年PCV2的感染情況進行檢測，總陽性率為41.4%；李玲等[7]報道2008—2011年中國部分地區PCV2的感染率高達78.3%；廖啟順等[8]報道2009—2011年云南部分豬場PCV2的感染率為91.3%；邵萌等[9]報道2010—2012年陜西地區PCV2的陽性率為82.9%；鄧靜等[10]報道2010—2013年四川地區PCV2的陽性率為70.7%；蔣新華等研究人員[11]報道2013—2017年江西省10個地區的1 082份疑似病料進行的PCV2病原學檢測，總體陽性率為56.4%。上述研究表明，我國豬群的PCV2陽性率處于較高的趨勢，已成為威脅豬場生物安全的主要病原之一。

表1 不同豬群豬瘟病毒ELISA抗體檢測結果

表2 不同豬群豬藍耳病病毒ELISA抗體檢測結果

表3 不同豬群豬偽狂犬病病毒gB蛋白ELISA抗體檢測結果

表4 不同豬群豬偽狂犬病病毒gE蛋白ELISA抗體檢測結果

2）此次試驗對貴州省某規模化豬場6個豬群分別進行了豬瘟病毒、豬藍耳病病毒、偽狂犬病病毒gB蛋白免疫抗體和偽狂犬病病毒gE蛋白感染抗體調查，結果發現豬瘟病毒、豬藍耳病病毒、偽狂犬病病毒gB蛋白免疫抗體總體陽性率分別為87.78%、70.00%和88.89%，偽狂犬病病毒gE蛋白感染抗體陽性率為4.44%；對90份血清樣本和1份病死保育仔豬淋巴結組織進行豬瘟病毒、豬藍耳病病毒、偽狂犬病病毒和豬圓環病毒2型核酸檢測，結果顯示淋巴結組織豬圓環病毒2型核酸陽性。試驗結果表明，引起該養豬場保育仔豬死亡的原因為豬圓環病毒2型感染。雖然該豬場6個豬群豬瘟病毒、豬藍耳病病毒和偽狂犬病病毒gB蛋白免疫抗體總體陽性率達到了農業農村部要求的大于70%標準，但是仍然有部分豬群的免疫抗體陽性率低于農業農村部要求，如種公豬和保育仔豬群的豬瘟病毒抗體陽性率分別為66.67%和60.00%；種公豬、哺乳仔豬和保育仔豬群豬藍耳病病毒抗體陽性率分別為66.67%、35.00%和40.00%。懷孕母豬群出現了偽狂犬病病毒gE蛋白抗體陽性，提示該豬群可能存在偽狂犬病毒野毒感染。

3）豬瘟、豬藍耳病、豬偽狂犬病、豬圓環病毒2型對養豬業的影響非常大，尤其是在生豬養殖高度密集的規模化豬場，豬只一旦發病后果極為嚴重。目前市面上均有商品化疫苗，養殖場要選擇與該地區流行的毒株核酸同源性較高的疫苗進行免疫，以避免疫苗免疫效果不好或免疫失敗。同時要根據實際情況，制定適合自身的免疫程序，做好免疫抗體監測，加強免疫抗體評估；對免疫抗體不合格的要及時分析原因進行補免；對異常死亡的豬只要進行實驗室檢測分析，并嚴格落實消毒和無害化處理措施。養殖場應重視豬場生物安全防護措施，嚴格執行生物安全規程，對于有條件的種場建議及時開展動物疫病凈化工作。