PD-L1與缺氧誘導的肺癌細胞自噬及增殖相關性的研究

劉輝，楊小瓊，朱煙林，何芋香，劉杰，譚渝

646000四川 瀘州，西南醫科大學附屬醫院 呼吸與危重癥醫學科

近年來，以程序性死亡受體相關配體(programmed death 1/programmed death-1 ligand 1，PD1/PD-L1)抑制劑為代表的免疫療法在惡性腫瘤治療方面取得突破性進展，提高了晚期非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者的客觀緩解率[1]。既往研究多集中在單一免疫檢測點通路，然而免疫相關不良反應的出現，腫瘤微環境本身的復雜性限制了PD1/PD-L1通路在免疫治療中的研究進展[2]。有研究表明[3-5]，在缺氧等應激狀態下，腫瘤細胞內的溶酶體可對受損的細胞器及相關分子進行吞噬降解、再利用，即自噬，以此免受腫瘤微環境的負向影響，從而促進自身的存活。然而，腫瘤微環境尤其是缺氧微環境中，免疫檢測點PD1/PD-L1在腫瘤細胞自噬相關通路中的影響機制尚未明確。本研究通過缺氧誘導H1299肺癌細胞自噬，同時給予一種特異性的磷脂酰肌醇三激酶(phosphatidylinositide 3-kinases，PI3K)自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine，3-MA)進行干預，觀察缺氧誘導因子1α(hypoxia-inducible factor 1-alpha，HIF-1α)、自噬通路相關的微管相關蛋白1輕鏈3-Ⅱ(microtubule-associated protein 1 light chain 3-Ⅱ，LC3-Ⅱ)、AKT和免疫檢查點PD-L1的基因表達水平，以及細胞增殖情況，探討PD-L1在腫瘤細胞自噬相關通路中的作用，為研究肺癌細胞藥物耐受、逃避免疫系統攻擊的機制，提供新的思路和方法。

1 材料與方法

1.1 試劑及器材

人肺腺癌細胞株H1299購自西南醫科大學醫學基礎研究中心；缺氧培養箱(三通氣培養箱，Thermo公司)；CCK-8檢測試劑盒購于碧云天生物技術有限公司； EntiLinkTM1st Strand cDNA Synthesis Kit購于ELK Biotechnology公司、一抗為單克隆兔抗人的HIF-1α購于abcam公司、兔抗人的LC3-II購于CST公司，二抗HRP-Goat anti Rabbit購于ASPEN公司。……