流式細胞儀篩選環(huán)磷酰胺誘導骨髓嗜多染紅細胞微核的技術(shù)方法分析

張 雯 趙 康 汪梅花

（延安大學附屬醫(yī)院 陜西延安 716000）

引言

微核實踐研究是臨床用于細致檢查被檢測物所含遺傳性毒物的專業(yè)性測驗形式，目前在臨床實踐病毒檢測中使用效果顯著，已得到較大范圍的使用。由于傳統(tǒng)人工方式在微核數(shù)值檢測的具體性檢測中工作量較大，找尋相對準確的微核率較為困難，且存在一定程度上的干擾因素。流式細胞儀在實際使用中效率高、操作簡便等優(yōu)勢較為突出，且其實際檢測結(jié)果較為準確，因此常用于骨髓嗜多染紅細胞微核率的數(shù)值檢驗之中。

一、資料與方法

（一）一般資料

本次實踐探究的主要研究對象包括符合研究條件的雄性SD 大鼠和雄性KM 小鼠各10 只，小鼠的實際體重在20 克左右，大鼠的實際體重在200 克左右，大鼠與小鼠的最大生存月齡為一個半月。抽調(diào)的所有實踐研究對象經(jīng)檢測全部符合相關(guān)研究標準，對參與實踐研究的對象進行標識處理，同時進行科學化的小組分配，確保實踐研究效率的充分保障。

（二）研究方法

本次實踐研究中涉及的主要試劑包括：環(huán)磷酰胺、Sorensen’s 緩沖液、AO 水溶液、氯化鈉、戊二醛水溶液等。主要使用儀器包括：臨床流式細胞儀、離心機械、顯微鏡等。環(huán)磷酰胺藥物使用時需配合生理鹽水進行調(diào)和。對分配完成的各個實驗小組進行差異性的藥物劑量投入，明確注射體積，對實驗對象的腹部進行藥物注射，藥物注射完成24 小時后進行標本樣本收集[1]，以此為基礎(chǔ)進行后續(xù)實踐研究。借助單一性質(zhì)的AO 與FCM 進行骨髓嗜多染紅細胞微核的數(shù)值檢測，與此同時，將流式細胞儀篩選出來的環(huán)磷酰胺用以處理SD大鼠和KM 小鼠，將二者體內(nèi)骨髓內(nèi)部含有的骨髓嗜多染紅細胞以及較為成熟的骨髓紅細胞的微核數(shù)量進行測定，計算出相應(yīng)微核率后及時進行對比分析。

（三）實驗觀察指標

借助流式細胞儀對相關(guān)實驗提取物進行細胞數(shù)值分析，將流式細胞儀篩選出來的環(huán)磷酰胺用以處理SD 大鼠和KM 小鼠，將二者體內(nèi)骨髓內(nèi)部含有的骨髓嗜多染紅細胞以及較為成熟的骨髓紅細胞的微核數(shù)量進行測定。借助流式細胞儀進行相關(guān)監(jiān)測的同時，醫(yī)療技術(shù)人員同時借助顯微鏡完成鏡檢工作。

二、結(jié)果

實踐研究過程中當環(huán)磷酰胺的實際含量升高時，SD 大鼠和KM小鼠骨髓中的骨髓嗜多染紅細胞以及較為成熟的骨髓紅細胞的實際數(shù)值逐漸增加，并且呈現(xiàn)出具有一定規(guī)律性的數(shù)量關(guān)系，采用多種計數(shù)方式進行實踐研究環(huán)節(jié)的數(shù)值評定，并未發(fā)現(xiàn)較大的數(shù)據(jù)研究差異（P＞0.05）。參與實踐調(diào)查研究的小鼠中檢測到多數(shù)的細胞群分布現(xiàn)象[2]，其中包括：骨髓嗜多染紅細胞、較為成熟的骨髓紅細胞、含微核的較為成熟的骨髓紅細胞等。通過觀察可有效區(qū)分微核細胞與未含微核細胞之間的區(qū)別。以此確定流式細胞儀對于此類微核細胞的區(qū)分存在一定程度上的主管性質(zhì)。與此同時，借助實踐研究發(fā)現(xiàn)不同使用劑量的環(huán)磷酰胺對于實驗對象的影響。實踐研究樣本經(jīng)AO 試劑染色后，待觀察的細胞狀態(tài)顯示為良好，骨髓嗜多染紅細胞與較為成熟的骨髓紅細胞相比二者在染色后存在顯著差異，其中骨髓嗜多染紅細胞可發(fā)出熒光，而較為成熟的骨髓紅細胞無此類現(xiàn)象。人工鏡檢檢測中發(fā)現(xiàn)，與常規(guī)性的細胞相比，含有微核的紅細胞實際體積較大，借助WinMDI 軟件對細胞群體的占據(jù)比例進行檢測過程中，可發(fā)現(xiàn)當CP 的實際含量增多且其濃度上升到一定程度后，隨機出現(xiàn)了細胞抑制性情況。

三、討論

AO 作為一種熒光性染料劑，因其對生物基因所具有的親和度，當與單鏈核算或者雙鏈核酸進行有效結(jié)合后將產(chǎn)生差異性的熒光反應(yīng)。環(huán)磷酰胺（cyclophosphamide）在進入生物體內(nèi)后將于生物肝臟內(nèi)部進行分子轉(zhuǎn)化，其在生物體外并無明顯的抗腫瘤活性功能，但在生物體內(nèi)將氧化酶轉(zhuǎn)化為醛磷酰胺后，存在一定程度上的不穩(wěn)定性，其在生物腫瘤細胞中還可進一步分解成丙烯醛、酰胺氮芥等。探究臨床流式細胞儀篩選環(huán)磷酰胺以此誘導骨髓嗜多染紅細胞微核的有效技術(shù)形式的主要目標為提升流式細胞儀器在臨床探究中的實際使用性能。臨床探究中生物的骨髓細胞與其他細胞相比極具特異性，有核細胞的實際數(shù)值將在一定程度上對MN 的檢測數(shù)值進行存在影響，本次實踐探究活動中借助借助單一性質(zhì)的AO 與FCM 進行骨髓嗜多染紅細胞微核的數(shù)值檢測，可在保存檢測樣本完整性的同時進行數(shù)值測定，有效對微核及不微核的紅細胞進行測定，檢測大鼠骨髓中的嗜多染紅細胞數(shù)量，將醫(yī)療器械檢測結(jié)果與人工鏡檢結(jié)果相對比，其統(tǒng)計學上的數(shù)值差異不大。

綜上所述，臨床流式細胞儀在臨床應(yīng)用中具有一定程度上的實用價值[3]，可用以篩選環(huán)磷酰胺以此誘導骨髓嗜多染紅細胞微核的具體數(shù)值檢測，并值得在醫(yī)療服務(wù)研究領(lǐng)域進行更深一步的拓展。