頭孢地嗪中潛在基因毒性雜質檢測研究

唐新萍 魏永紅 宋世丘 向以東

（珠海保稅區麗珠合成制藥有限公司 廣東 珠海 519030）

頭孢地嗪鈉為常見的第三代頭孢菌素抗生素，其急性毒性試驗相較其他頭孢類偏低，具有廣譜抗菌活性，其為頭孢地嗪成鹽后的產品，生產的關鍵原料包含AE 活性酯和頭孢地嗪側鏈酸，AE 活性酯中可能引入硫脲[1,2]，頭孢地嗪側鏈酸中可能引入二硫代氨基甲酸銨[3]。硫脲和二硫代氨基甲酸銨為潛在基因毒性雜質。本文研究了兩雜質的檢測方法，并對其進行了驗證，確認該方法靈敏度符合ICH M7[4]的要求。

1.儀器與試劑

戴安U-3000；Sartoris 電子天平。硫脲：天津福晨。二硫代氨基甲酸銨：江西盛偉化工科技。磷酸二氫鉀、無水磷酸氫二鈉、乙腈均為分析純及以上，試驗用水為純化水。

2.方法與結果

2.1 波長篩選

用流動相A（取磷酸二氫鉀0.87g 與無水磷酸氫二鈉0.22g，加水溶解并稀釋至1000ml 混勻）-流動相B（乙腈）=(50:50)，溶解配制硫脲和二硫代氨基甲酸銨濃度為0.1mg/ml，在200 ～400nm 進行波長掃描[2]，結果顯示：二硫代氨基甲酸銨在220nm～250nm 處于強紫外吸收區，硫脲在220nm ～240nm 處于強紫外吸收區。因此選擇230nm 作為檢測波長。

圖1 硫脲紫外吸收分布圖

圖2 二硫代氨基甲酸銨紫外吸收分布圖

2.2 色譜條件

色譜柱：C18。流動相A：取磷酸二氫鉀0.87g 與無水磷酸氫二鈉0.22g，加水溶解并稀釋至1000ml，搖勻。流動相B:乙腈。稀釋劑：流動相A-流動相B(50:50)。檢測波長：230nm。進樣體積：20μl，見表1。

表1 梯度洗脫表

2.3 溶液制備

對照品溶液：用稀釋劑配制1μg/ml 的兩對照品溶液。供試品溶液：取本品用5%碳酸氫鈉溶解并稀釋制成0.05g/ml 溶液。

2.4 專屬性與精密度

分別用對照品溶液連續測試6 次，二硫代氨基甲酸銨和硫脲分離度為5.2，RSD 值均小于5.0%，結果均符合要求。

圖3 專屬性色譜圖

2.5 LOD 和LOQ

取對照品適量逐級稀釋至S/N 約為3 和10。結果均遠小于根據CPDB 的TD50 計算的最大限度的30%，見表2。

表2 LOD 和LOQ 結果表

2.6 線性與范圍

取對照品適量，制成相當于對照品溶液濃度的20%、50%、80%、100%、120%的溶液，每個濃度測試2 次，以各組份濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，作圖并計算回歸方程和相關系數（r ≥0.99），結果均符合規定。

表3 線性回歸結果表

2.7 回收率試驗

取對照品適量，制成相當于對照品溶液濃度的80%、100%、120%的溶液，每個濃度測試3 次，計算回收率。結果均在85%～105%之間，RSD 均小于10%，結果符合規定。

3.結論

本研究建立的頭孢地嗪中硫脲和二硫代氨基甲酸銨的檢查方法，操作簡單，檢查線性范圍廣，靈敏度高，非常適用于該雜質殘留檢查。