不同培養基在沙門氏菌檢驗中的檢出效果觀察

黎青梅 黃煥宜 黎莉 何國華 陳冬玲

（陽江市人民醫院檢驗科 廣東 陽江 529599）

沙門菌為腸道常見的革蘭陰性桿菌，是引起細菌性食物中毒、腸胃炎、傷寒等多種疾病的重要病原體之一[1-2]。沙門菌引起的腸胃炎和腹瀉具有潛伏期短，發展迅速，病情嚴重等特點[3]，全世界每年感染沙門菌的病人約9400 萬，其中最終造成15.5 萬死亡。在我國引起食物中毒的細菌中沙門菌占首位，嚴重威脅人類的身體健康。為了能夠有效找到沙門氏菌的檢驗、分離、鑒定技術，我院對其進行了研究，本文主要針對增菌后在不同培養基中對沙門氏菌檢出效果進行分析。

1.材料

1.1 標本來源

選取2018 年1 月—12 月在陽江市人民醫院因急性腹瀉送檢的肛拭樣本200 例，納入標準：患者糞便如水樣便、稀便、膿血便、黏液便；大便鏡檢白細胞≥5/高倍視野）、可見紅細胞和巨噬細胞；不考慮采集樣本前患者是否使用過抗菌藥物。

1.2 儀器與試劑

SBG增菌液、木糖賴氨酸Tergitol 4（XLT4）培養基、SS平板、木糖賴氨酸脫氧膽鹽（XLD）、沙門菌顯色培養基（CAS）、沙門氏菌診斷血清，恒溫培養箱，生物安全柜，全自動細菌鑒定及藥敏分析儀。

2.方法

2.1 肛拭樣本的接種

本實驗分為實驗組（SBG 增菌液接種法）和對照組（直接接種法）兩組，每例糞便樣本均分別采用SBG 增菌液接種法和直接接種法接種。實驗組先采用SBG 增菌液增菌18 ～24 小時，后再轉種XLT4 培養基、SS 平板、XLD 培養基、CAS 培養基。對照組則未采用增菌法，直接接種XLT4 培養基、SS 平板、XLD培養基、CAS 培養基。35℃培養18 ～24 小時后，觀察平板上菌落生長情況。

2.2 沙門菌的鑒定與分型

選取可疑菌落（在XLT4 培養基、SS 平板、XLD 培養基為中等大小，黑色菌落；CAS 培養基為中等大小，紫色菌落）沙門菌的血清學鑒定和藥敏實驗，血清學實驗鑒定為沙門菌菌株送到廣東省疾病預防控制中心做血清分型。

2.3 統計學分析

為減少誤差，所有培養基均由同組檢驗科醫師進行檢測。應用SPSS23.0 軟件進行統計學分析。計數資料采用卡方檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

3.結果

3.1 增菌對處理提高沙門菌檢出率

實驗組與對照組的沙門菌陽性例數差異有統計學意義（P ＜0.05）。因此，通過增菌處理后，樣本中的沙門菌檢出例數得到顯著提高，更能有效地檢出沙門菌，見表1。

表1 兩組標本沙門菌檢出結果比較（例）

3.2 4 種培養基培養增菌后沙門菌檢出率

為了進一步考察SBG 增菌后何種培養基（XLT4，SS，XLD 和CAS）培養更能有助于沙門菌檢出，對增菌后的200 例標本采用檢出率指標進行評價。其中CAS 沙門菌陽性例數最多，檢出率也最高（27.5%）。XLT4 與SS 檢出率比較，差異無統計學意義（P ＞0.05）；XLT4 與XLD 檢出率比較，差異無統計學意義（P ＞0.05）；XLT4 與CAS 檢出率比較，差異無統計學意義（P ＞0.05）；SS 與XLD 檢出率比較，差異無統計學意義（P ＞0.05）；SS 與CAS 檢出率比較，差異無統計學意義（P ＞0.05）；XLD 與CAS 檢出率比較，差異無統計學意義（P ＞0.05）；即兩兩比較檢出率差異都無統計學意義，見表2。

表2 增菌后不同培養基沙門菌檢出率比較（n=200）

3.3 4 種培養基增菌后沙門菌準確率

實驗組200 例糞便樣本檢出的可疑沙門氏菌，經廣東省疾病預防控制中心鑒定，確認沙門氏菌49 例。其中，以CAS 培養出的沙門菌準確率最高（98%）。經比較，XLT4 與CAS 準確率差異有統計學意義（P ＜0.05）；其余組合準確率差異均無統計學意義（P ＞0.05）；總體上，采用CAS 培養基培養準確率略高于其它三種培養基，見表3。

表3 增菌后不同培養基沙門菌準確率比較

3.4 沙門菌菌株分型

實驗組經鑒定和血清分型，確診49 株沙門菌，其中以鼠傷寒沙門菌變種為主，其次是腸炎沙門菌和鼠傷寒沙門菌，共占69.38%（34/49），各沙門菌血清型分離結果見表4。

表4 49 株沙門菌血清型分布

4.討論

沙門菌菌體大小約（0.6 ～0.9）×（1 ～3）微米，無芽胞，無莢膜。除雞白痢沙門氏菌和雞傷寒沙門氏菌外，大多有周身鞭毛。營養要求不高，分離培養常采用腸道選擇鑒別培養基。生化反應對本屬菌的鑒別具有重要參考意義。不液化明膠，不分解尿素，不產生吲哚，不發酵乳糖和蔗糖，能發酵葡萄糖、甘露醇、麥芽糖和衛芽糖，大多產酸產氣，少數只產酸不產氣[4]。VP 試驗陰性，有賴氨酸脫羧酶。對熱抵抗力不強，在60℃ 15 分鐘可被殺死。在水中存活2 ～3 周。在5%的石炭酸中，5 分鐘死亡。

增菌是沙門菌培養重要的一步，常用于臨床實驗室細菌的分離培養。SBG 增菌液是一種選擇性培養基，含有蛋白胨、酵母膏粉、甘露醇、亞硒酸氫鈉、磺胺吡啶鈉和磺綠等成分，既可以滿足沙門菌及一般細胞生長繁殖所必需的碳源、氮源和微量元素，有利于受損傷的沙門菌修復，使受損傷的沙門菌恢復到損傷前的穩定的生理狀態，又可以抑制革蘭氏陽性菌和非沙門氏菌的大多數革蘭氏陰性腸道菌，利于沙門菌的分離培養[5]。我院研究糞便標本采用運送培養基和一次性采樣拭子采集，可保證標本運送與保存時致病菌不受影響，可排除分析前標本的影響。

直接接種的糞便樣本檢出率低，本實驗中檢出率僅為4.5%，其原因一方面由于糞便樣本中存在的沙門菌數量少或采樣前服用抗菌藥物導致的沙門菌減少而低于培養的閾值；另一方面由于沙門菌抵抗力不強，在采樣后到接種期間受環境各種因素如溫度、酸堿度的影響，造成不同程度的損傷。綜合以上各種因素的影響最終導致檢出率減低，結果出現假陰性。所以增菌意義重大。

使用增菌液結合培養基培養是檢測沙門菌感染最簡便、最快捷、最經濟實惠的方法，且該方法檢測準確率較高，大大減少了人力資源和實驗材料的浪費， 但在這次研究發現，反復出現了如銅綠假單胞菌、熒光假單胞菌、變形菌、摩氏摩根菌等假陽性菌，使用不同培養基最終檢出率也有一定的差異，不同菌型的細菌區分較為困難，在實際應用中也沒有明確的標準規范，因為不同的病原菌并沒有適合其生長的特定培養基。因此臨床在對沙門菌感染患者進行檢測時，可使用兩種或多種培養基分別進行細菌培養，以提高陽性檢出率，減少漏診或誤診。

綜上所述，本結果表明，SBG 增菌液增菌的實驗組，與直接培養的對照組相比，檢出率明顯提高。通過增菌后，若使用單個培養基可考慮CAS 培養基，沙門菌培養檢出率和準確性較高；若聯合兩種培養建可考慮CAS 培養基和SS 培養基。臨床操作時可根據實際情況選擇培養基類型。