內質網應激相關性細胞凋亡在HMGB1介導嚴重燒傷小鼠脾臟樹突狀細胞功能障礙中的作用

吳 瑤 許碧磊 ,2 郭 方 董 寧 于 燕 祝筱梅 姚詠明

(1.解放軍總醫院醫學創新研究部創傷修復與組織再生研究中心，北京 100048；2.武漢市普仁醫院體檢中心，湖北 武漢 430081)

膿毒癥和多器官功能障礙綜合征（MODS）是現代重癥醫學的難題，其確切發病機制尚未充分理解，尤其是對機體免疫功能紊亂的關鍵發病環節以及可調控的作用靶點認識不足，尚沒有可應用于臨床的行之有效的防治措施[1-3]。樹突狀細胞(dendritic cell, DC)是體內功能最強的專職抗原呈遞細胞，其大量凋亡以及抗原呈遞能力的降低是機體免疫功能抑制、抗感染能力下降、并發膿毒癥的關鍵環節[4]。我們團隊的前期研究表明，過度的內質網應激(endoplasmic reticulum stress，ERS)誘導DC大量凋亡在嚴重燙(燒)傷小鼠免疫功能紊亂發生的信號機制中具有重要意義[5-6]。但是目前對于過度ERS反應的關鍵誘發因素尚不明確。高遷移率族蛋白B1 (high mobility group box-1 protein, HMGB1) 作為一種重要的晚期炎癥因子，參與了膿毒癥病理過程。本研究探討HMGB1是否通過誘導ERS反應導致燒傷小鼠脾臟DC過度凋亡，以及拮抗HMGB1對燒傷小鼠的保護作用及機制。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 健康 Balb/C小鼠（SPF清潔級），雄性，6～8周，體重（20±2）g，購自北京華阜康科技股份有限公司。CD11c+免疫磁珠、MS柱、LS柱購自德國Miltenyi Biotec公司；藻紅蛋白標記抗CD11c+抗體(PE-CD11c)、細胞凋亡檢測試劑盒購自美國BD公司；HMGB1購自美國R&D公司；HMGB1兔多克隆中和抗體委托北京康為世紀生物科技有限公司定制；Salubrinal（Sal）購自美國Selleck公司；抗GRP78(Bip)抗體、CHOP抗體購自美國Cell Signaling Test公司；β-actin抗體、辣根過氧化物酶（HRP）標記羊抗兔二抗、HRP標記羊抗小鼠二抗購自北京普利萊基因技術有限公司；……