宮頸癌及癌前病變中Aurora-A 的表達特征及與HR-HPV 感染相關性

初 虹，林振文，余志英，伍敏紅

1 深圳市第二人民醫院 深圳大學第一附屬醫院 婦科，廣東深圳 518035；2 深圳市人民醫院 暨南大學第二臨床醫學院 南方科技大學第一附屬醫院 介入科，廣東深圳 518020

流行病學調查顯示，宮頸癌(cervical cancer，CC)是僅次于乳腺癌的第二大嚴重危害女性生命及健康的惡性腫瘤[1-2]。其中，長期持續性的高危型人乳頭瘤病毒(high risk-human papilloma virus，HR-HPV)感染是導致癌前鱗狀上皮內病變(squamous intraepithelial lesion，SIL)及宮頸癌的高危因素，90%以上的宮頸癌患者被檢測出有HRHPV的存在[3]。Aurora-A是Aurora激酶家族的一員，是一種絲/蘇氨酸蛋白激酶，作為一類新的癌基因，在人類的多種腫瘤中都存在過表達現象，其作為中心體相關的蛋白，基因擴增及高表達時均易導致中心體的復制擴增和功能異常，從而誘發細胞的惡變，導致腫瘤的生成。中心體的缺陷可在宮頸癌早期通過染色體的不穩定性發揮致癌作用[4-6]。由此本研究通過對正常宮頸組織、鱗狀上皮內病變組織及CC 組織內Aurora-A 的表達進行檢測，擬揭示HR-HPV 與Aurora-A 的相關性，為鱗狀上皮內病變及CC 的診斷及治療提供參考。

材料與方法

1 標本來源 選取2016 年3 月- 2019 年8 月深圳市第二人民醫院(深圳大學第一附屬醫院)存儲的HR-HPV 病理組織及CC 手術切除的蠟塊標本，患者年齡31 ～ 57 歲，有2 年以上的性生活史及術后隨訪的資料。HR-HPV 陽性宮頸病變標本65 份，HR-HPV 陰性宮頸病變標本45 份，低級別鱗狀上皮內病變(low squamous intraepithelial lesion，LSIL)標本22 份、高級別鱗狀上皮內病變(high squamous intraepithelial lesion，HSIL) 標 本44 份、CC 標 本22 份。22 例正常患者的宮頸標本均取自因子宮肌瘤入院進行子宮切除的患者，經檢查無宮頸病變。

2 實驗方法及評價指標 應用免疫組織化學檢測組織中的Aurora-A 表達[4]。選取4 個不同的高倍鏡(200 倍)視野，對宮頸組織的Aurora-A 進行著色程度評判，若胞漿及胞核內出現棕色顆粒狀物，則判斷為Aurora-A 陽性，并計算出陽性細胞所占的比重。1 分，Aurora-A 陽性細胞率低于25%；2 分，Aurora-A 陽性細胞率為25% ～ 50%；3 分，Aurora-A 陽性細胞率為50% ～ 75%；4 分，Aurora-A 陽性細胞率高于75%。不染色為1 分，染色較弱為2 分，中等染色為3 分，強染色為4 分。將染色程度得分與陽性細胞率得分相乘，低于4分(-)，4 ～ 8 分(+)，8 ～ 12 分(++)，12 ～ 16 分(+++)，(-)或(+)為陰性/弱陽性，(++)或(+++)為強陽性。

3 統計學分析 使用SPSS23.0進行研究資料分析。觀測資料主要為計數資料，以例數及率描述。多組間比較為整體+分割χ2檢驗(統計量為χ2)。等級資料的多組間比較為整體+分割秩和檢驗(統計量為Z)。此外，相關分析為Spearman 相關檢驗。統計推斷的檢驗水準α=0.05。

結 果

1 Aurora-A 在各類宮頸組織內的表達及與病變程度的相關性 LSIL 和HSIL 組織中，Aurora-A以胞漿內著色的中等強度表達為主；CC 組織中，Aurora-A 以胞漿及胞核著色的棕黃色強表達為主，陽性細胞數較多；正常的宮頸組織內幾乎沒有Aurora-A 的表達。Aurora-A 在正常、LSIL、HSIL及CC 組織中陽性表達率分別為4.55%、18.18%、45.45%、63.64%，差異有統計學意義(P ＜0.05)，見表1。Aurora-A 在各類宮頸組織內的表達染色圖見圖1。Aurora-A 陽性率隨著宮頸病變程度的升高而升高，Aurora-A 與宮頸病變程度相關性分析顯示r=0.486，P=0.032，呈正相關，見圖2。

表1 Aurora-A 在各類宮頸組織內的表達及與病變程度的相關性Tab. 1 Aurora-A expression in various cervical tissues and its correlation with the degree of lesions

圖 1 Aurora-A在各類宮頸組織內的表達(200×)A: 正常； B: LSIL； C: HSIL； D: CCFig. 1 Aurora-A expression in various cervical tissues (200×)A: Normal cervical tissure; B: LSIL; C: HSIL; D: CC

2 HR-HPV 在各類宮頸組織中的表達及與病變程度的相關性 HR-HPV 在正常、LSIL、HSIL 和CC 組織中陽性表達率分別為22.73%、36.36%、68.18%、100%，差異有統計學意義(P ＜0.05)(表2)。HR-HPV 感染率隨著宮頸變程度的升高而升高，HR-HPV 感染率與子宮頸的病變程度相關性分析顯示r=0.596，P=0.029，呈正相關(圖3)。

3 Aurora-A 和HPV 相關性分析 Aurora-A 陽性率越高，HPV 陽性率越高，Aurora-A 與HPV 相關性分析顯示r=0.625，P=0.023。見圖4。

表2 HR-HPV 在各類宮頸組織中的表達及與病變程度的相關性Tab. 2 Expression of HR-HPV in various cervical tissues and its correlation with the malignant degree of lesions

圖 2 Aurora-A在各類宮頸組織內的表達及與病變程度的相關圖Fig. 2 Correlation between Aurora-A expression and the malignant degree of lesions

圖 3 HR-HPV在各類宮頸組織中的表達及與病變程度的相關圖Fig. 3 Correlation of HR-HPV expression with the malignant degree of lesions

圖 4 Aurora-A與HPV相關圖Fig. 4 Correlation of Aurora-A with HR-HPV

討 論

流行病學調查研究顯示，HR-HPV 持續反復感染是鱗狀上皮內病變及CC 的主要原因。當前已發現的HR-HPV DNA 約有200 余種，高危致癌的有20 余種，如HR-HPV16、18、31、33、35 等，多數人在其一生中會感染HR-HPV，一般會在半年至1 年內被免疫系統清除，持續高危型HRHPV 或者反復的HR-HPV 感染才是導致鱗狀上皮內病變甚至CC 的主要原因[7]，Hansen 等[8]的研究表明，HR-HPV 持續或者反復感染將患者患CC 的概率大大提高。如本文結果顯示，HR-HPV 的陽性率隨鱗狀上皮內病變程度的升高而升高，與宮頸病變呈正相關，該結果佐證了HR-HPV 感染與CC 的關系，且與文獻報道一致[9-10]。

Aurora-A 可過表達于許多惡性癌癥組織中，如卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌等，可能導致中心體相關的蛋白異常表達致上皮細胞異常復制、染色體穩定性遭破壞、異倍體形成、從而與腫瘤的發生有關[11-15]。Ma 等[16]采用多元回歸分析顯示，Aurora-A 表達與CC 的淋巴結轉移及復發顯著相關，是CC 患者生存的不利因素。本文結果也佐證了文獻報道，Aurora-A 在正常、LSIL、HSIL 及CC 組織中陽性表達率顯著增高，在CC 組織中表達最高，Aurora-A 表達與宮頸病變程度呈正相關關系，提示Aurora-A 參與了CC 的發生發展過程，該結果與文獻報道類似。

研究表明，HR-HPV 患者宮頸細胞內中心體的數目變化顯著，使雙級紡錘體形成受阻，導致異倍染色體及基因組穩定性改變[17-19]，故可推測出，Aurora-A 過表達主要是因為中心體異常導致染色體穩定性失衡，基因組穩定性改變，從導致CC 的發生[20]，給予Aurora-A 抑制劑有助于改善HRHPV 感染的CC 動物模型的癌細胞生長[21]，由此可見Aurora-A 表達一定程度地影響了HPV 感染導致的CC，Aurora-A 表達與HPV 感染緊密相關[22]。本研究也顯示，Aurora-A 在各類宮頸組織中的陽性表達呈現病變逐級升高的趨勢，Aurora-A 陽性表達與HR-HPV 感染率呈正相關，Aurora-A 可能在鱗狀上皮內病變進展為CC 中發揮著一定的作用。

綜上，Aurora-A 過表達可能與CC 發生相關，Aurora-A 或可作為診斷鱗狀上皮內病變及CC 的參考指標，從而成為潛在的抗CC 藥物的治療靶點，為CC 的藥物研發提供依據。