血清人附睪蛋白4和共刺激分子B7-H3水平對宮頸癌術(shù)后患者預后的評估價值*

徐曉芳， 程黎明， 陳樑， 黃興華， 李怡巍， 李宗恒

(1.德陽市人民醫(yī)院， 四川 德陽 618000； 2.西南醫(yī)科大學， 四川 瀘州 646000)

宮頸癌是婦科中發(fā)病率較高的惡性腫瘤，且發(fā)病率與死亡率每年都在增加，嚴重威脅女性健康[1]。近年來，臨床針對宮頸癌術(shù)后患者的預后評估主要參考宮頸癌國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟分期(international federation of gynecology and obstetrics，F(xiàn)IGO)，但由于這一標準無法客觀評估宮旁與盆壁累及范圍，尚未納入淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)[2-3]。有研究報道，F(xiàn)IGO分期與手術(shù)病理分期總符合率僅占60%，所以對宮頸癌患者術(shù)后預后的評估應盡早找到特異性高的指標。腫瘤生物標志物是新興的篩查指標，是在機體惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展或人體處于異常狀態(tài)而產(chǎn)生的特殊物質(zhì)，目前已作為癌癥早期篩查、診斷、預后評估與療效評價的有效指標[4-5]。人附睪蛋白4(human epididymis protein 4，HE4)、共刺激分子B7-H3(costimulatory molecule B7-H3,B7-H3)是目前婦科惡性腫瘤中新型的標志物，宮頸癌的發(fā)生及發(fā)展與HE4、B7-H3密切相關(guān)，但目前應用于宮頸癌患者術(shù)后預后評估報道較少，本研究重點分析HE4、B7-H3表達水平對宮頸癌術(shù)后患者預后的評估價值，為宮頸癌預后評估提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年1月—2014年1月收治的行腹腔鏡宮頸癌根治術(shù)患者300例為宮頸癌組，280例宮頸上皮內(nèi)瘤變患者為良性組，選擇同期體檢健康的女性280例為對照組。納入標準：(1)經(jīng)組織病理學確診，符合宮頸上皮內(nèi)瘤變或?qū)m頸癌診斷標準；(2)未接受過系統(tǒng)抗癌治療者；(3)年齡25～74歲。排除標準：(1)術(shù)前進行治療者；(2)合并嚴重心肝腎功能不全，其它腫瘤患者；(3)HIV陽性。300例宮頸癌患者：宮頸癌組FIGO分期[6]，Ⅰ期76例、Ⅱ期88例、Ⅲ期79例、Ⅳ期57例；腫瘤細胞分化程度，低分化112例、中分化108例、高分化80例；組織病理學分類，鱗癌158例、腺癌121例、腺鱗癌21例；腫瘤直徑，≥5 cm 85例、<5 cm 215例；浸潤深度，淺肌層92例、深肌層208例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移102例；平均(48.52±6.81)歲、絕經(jīng)者68例。良性組平均(48.36±6.79)歲，絕經(jīng)70例。對照組平均(48.85±6.80)歲，絕經(jīng)者65例。各組年齡、絕經(jīng)情況等資料比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。本研究所有入選者皆為自愿參與本研究、且簽署知情同意書；本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1HE4水平檢測 宮頸癌組、良性組在術(shù)后非月經(jīng)期間采集晨起空腹靜脈血3 mL，對照組在非月經(jīng)期間體檢時采集晨起空腹靜脈血3 mL，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清HE4水平。

1.2.2B7-H3水平檢測 在收集的靜脈血中加入B7-H3單抗，標本和標準品中的B7-H3與單抗結(jié)合，PBS液體洗滌5 min，按照1 ∶500的比例，加入羊標志的一抗5 mL，4℃放置過夜，PBS緩沖液洗滌3次，5 min/次，加入鼠來源的二抗2 mL，室溫放置2 h，PBS液體洗滌5 min；加入顯色底物，辣根過氧化物酶會使無色的顯色劑現(xiàn)藍色，加終止液變黃，讀取酶標儀(型號SpectraMax Paradigm，Molecular Devices)450 nm處吸光度(OD)值，并按照B7-H3測定的標準曲線換算為濃度值。

1.3 觀察指標

觀察各組被檢者及不同宮頸癌臨床特征(年齡、月經(jīng)狀態(tài)、腫瘤直徑、病理類型、FIGO分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度)患者的血清HE4、B7-H3水平，宮頸癌患者隨訪5年分析生存情況、比較死亡與存活患者血清HE4及B7-H3水平；分析血清HE4、B7-H3水平對宮頸癌術(shù)后患者預后的評估價值。

1.4 統(tǒng)計學方法

2 結(jié)果

2.1 血清HE4及B7-H3水平

結(jié)果顯示，宮頸癌組、良性組患者HE4、B7-H3水平高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，宮頸癌組HE4、B7-H3水平高于良性組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組被檢者血清HE4、B7-H3水平Tab.1 Levels of serum HE4 and B7-H3 in

2.2 血清HE4及B7-H3水平與宮頸癌臨床特征的關(guān)系

結(jié)果顯示，不同F(xiàn)IGO臨床分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者的HE4及B7-H3水平比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；而不同年齡、月經(jīng)狀態(tài)、腫瘤直徑、病理類型、浸潤深度宮頸癌患者的HE4、B7-H3水平比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 不同臨床特征宮頸癌患者血清HE4和B7-H3水平Tab.2 Levels of serum HE4 and B7-H3 in patients with cervical cancer of different clinical characteristics

2.3 血清HE4、B7-H3水平與宮頸癌術(shù)后患者預后的關(guān)系

結(jié)果顯示，300例宮頸癌術(shù)后患者持續(xù)隨訪5年，死亡率42.67%(128/300)，存活率57.33%(172/300)，死亡組血清HE4、B7-H3水平高于存活組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 宮頸癌術(shù)后5年存活或死亡患者血液HE4、B7-H3水平Tab.3 Levels of blood HE4 and B7-H3 in patients with cervical cancer survival or

2.4 血清HE4、B7-H3單獨或聯(lián)合檢測對宮頸癌患者預后的評估價值

結(jié)果顯示，300例宮頸癌術(shù)后患者的HE4、B7-H3指標分析發(fā)現(xiàn)，HE4、B7-H3對宮頸癌術(shù)后患者預后均有良好的預測價值，但HE4、B7-H3單一指標的預測價值低于2項指標聯(lián)合的預測價值。見表4。

表4 血清HE4、B7-H3單獨或聯(lián)合檢測對宮頸癌患者預后的評估價值Tab.4 Evaluation value of serum HE4 and B7-H3 alone or in combination for the prognosis of cervical cancer patients

圖1 血清HE4、B7-H3單獨或聯(lián)合檢測對宮頸癌患者預后的ROC曲線Fig.1 ROC curve of serum HE4 and B7-H3 alone or combined detection for the prognosis of cervical cancer patients

3 討論

臨床治療宮頸癌首選方式為根治手術(shù)，切除宮頸癌患者的腫瘤組織而控制惡性腫瘤細胞擴散，由于大部分宮頸癌患者就診時已為中晚期，病情危重，手術(shù)治療后預后較差[7-9]。近年來。臨床中評估預后主要依賴于影像學及血清學檢查，但由于影像學手段對病灶或淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移診斷效果不理想，并且受到影像學診斷結(jié)果敏感度、特異度等多方面局限而影響應用[10-11]。

HE4為新型、潛在的腫瘤標志物。臨床研究報道，在健康或良性瘤變組織或血清中含量不高，但在宮頸癌患者血清中水平升高，是目前作為宮頸癌早期篩查的有效指標[12]。關(guān)于HE4與宮頸癌術(shù)后預后的報道較少，近年來基礎(chǔ)與臨床研究提示，HE4可能與宮頸癌腫瘤生物學行為具有相關(guān)性，但該對患者術(shù)后預后的臨床價值仍在研究中[13-14]。研究報道，在健康組織中HE4來源于輸卵管、子宮內(nèi)膜及宮頸中，而在惡性腫瘤的血清與組織中表達明顯升高[15-16]。Stella等[17]研究報道中檢測HE4標記物發(fā)現(xiàn)在宮頸癌中呈現(xiàn)高表達，并且發(fā)現(xiàn)HE4在宮頸癌中有預測價值，且發(fā)現(xiàn)HE4表達與宮頸癌病理類型、臨床分期、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，宮頸癌組、良性組HE4表達水平高于對照組，宮頸癌組HE4表達水平高于良性組，提示在宮頸癌術(shù)后患者HE4水平仍高于良性腫瘤及健康者。同時本研究進一步分析發(fā)現(xiàn)，隨著不同F(xiàn)IGO臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移HE4表達水平明顯升高，而分化程度越高，HE4表達水平下降，分化程度越低惡性程度越高，說明HE4可作為預測宮頸癌術(shù)后預后評估具有重要意義。B7-H3是B7免疫共刺激分子超家族的成員。大量研究報道，B7-H3在大量腫瘤組織中均呈現(xiàn)高表達，譬如前列腺癌、乳腺癌、肝癌、結(jié)腸癌、血液系統(tǒng)惡性腫瘤等等，B7-H3表達水平高低與腫瘤預后與病程進展密切相關(guān)，B7-H3表達水平升高提示不良預后或疾病進一步發(fā)展[18-20]。近年來，B7-H3在宮頸癌發(fā)生與發(fā)展的參與機制并未有準確的定論。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，宮頸癌組、良性組B7-H3表達水平高于對照組，宮頸癌組B7-H3表達水平顯著高于良性組，隨著不同F(xiàn)IGO臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、B7-H3表達水平明顯升高，而分化程度越高，B7-H3表達水平下降，分化程度越低惡性程度越高，提示B7-H3高表達加快了宮頸癌的進展。本研究隨訪5年分析其生存情況發(fā)現(xiàn)，300例宮頸癌術(shù)后患者持續(xù)隨訪5年，死亡率42.67%(128/300)，存活率57.33%(172/300)，死亡組HE4、B7-H3表達水平高于存活組，提示HE4、B7-H3呈高表達水平加快患者疾病復發(fā)或轉(zhuǎn)移，宮頸癌患者預后變差。與既往研究報道宮頸癌患者術(shù)后疾病進展時大量腫瘤標志物表達上調(diào)相符[21-22]。Jose等[23]研究報道，B7-H3在乳腺癌細胞中異常高表達是加快腫瘤進展的危險因素之一，同時與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。Cong等[24]報道B7-H3高表達是預測前列腺癌擴散與預后不良的獨立預測因子。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HE4、B7-H3單一預測的價值低于HE4聯(lián)合B7-H3預測宮頸癌術(shù)后臨床預后。HE4、B7-H3及HE4聯(lián)合B7-H3診斷宮頸癌術(shù)后預后的靈敏度及特異度分別為88.89%和87.45%、89.02%和87.64%、94.44%和90.45%，提示聯(lián)合檢測預后評估效果更準確。

綜上所述，HE4、B7-H3表達水平對宮頸癌術(shù)后預后評估具有重要意義，可作為輔助診斷宮頸癌術(shù)后進展的有效指標，HE4聯(lián)合B7-H3檢測可提高宮頸癌術(shù)后診斷的價值。