TNF-α在口腔鱗癌組織中的表達及臨床意義*

吳增波， 秘雙燕， 晏燕**

(1.川北醫學院附屬醫院， 四川 南充 637000； 2.珠海拜博口腔醫院， 廣東 珠海 519000)

鱗狀細胞癌又稱為表皮癌，是發生在表皮或附屬器細胞的惡性腫瘤，且癌細胞具有不同程度角化[1]。臨床研究表明鱗狀細胞癌好發于上皮覆蓋部位，如口腔、皮膚、陰道及子宮等部位[2]。國內學者研究表明，鱗狀細胞癌與種族有關，且免疫抑制者發生率亦相對較高[3]。近年來，口腔鱗癌發生率呈上升趨勢，影響患者的健康和生活。目前，臨床上常見的口腔癌包括舌癌、頜骨癌及口咽癌等，且多數患者屬于鱗狀上皮細胞癌，患者發病早期臨床癥狀缺乏典型性，導致臨床診斷難度較大[4]。口腔鱗癌的發生、發展是一個多因素過程，常受到細胞因子的調控[5]。腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)是細胞因子網絡中重要組成部分，主要由巨噬細胞、單核細胞因子產生，屬于是一種促炎細胞因子，能直接參與正常炎癥反應、免疫反應[6]，但是臨床上TNF-α在口腔鱗癌中的表達及價值研究較少。因此，本研究以口腔鱗癌患者作為對象，探討TNF-α在口腔鱗癌組織中的表達及臨床意義，報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1標本來源 選擇2017年5月—2019年4月收治的口腔鱗癌患者，要求符合口腔鱗癌診斷標準[7]且經病理組織檢查確診，完成TNF-α檢查適應癥且均可耐受。排除合并其他部位惡性腫瘤、入院資料不全者或伴有自身免疫系統疾病者，排除合并肝腎異常、精神異常或給予放化療者。共納入患者78例，男48例、女30例，年齡36～79歲、平均(57.00±6.00)歲，舌癌24例、牙齦癌22例、口底癌17例及頰癌25例，淋巴結轉移49例、未轉移27例，高分化32例、中分化27例及低分化17例，臨床分期Ⅰ～Ⅱ期48例、Ⅲ～Ⅳ期28例。所有患者入院均行手術治療，取癌組織(78份病灶標本)及癌旁組織(78份癌旁組織標本)(距離癌組織≥3 cm)作為標本。

1.1.2主要試劑和儀器 0.25%胰蛋白酶購自美國Gibco公司，胎牛血清、TNF-α兔抗人單克隆抗體及TNF-α兔抗人二抗購自美國Hyclone公司，甲醇雙氧水和磷酸緩沖鹽溶液(phosphate buffer saline，PBS)購自北京索萊寶科技有限公司，超凈工作臺購自蘇州安泰空氣技術有限公司，酶標儀和免疫組織化學試劑盒購自美國Bio-Rad公司。

1.2 方法

1.2.1檢測TNF-α的陽性表達 向制備的標本切片中加入濃度3%甲醇雙氧水、持續處理10 min封閉內源性過氧化物酶，PBS連續洗滌5 min，連續3次；加入PBS調整整體溶液pH為6.0，加檸檬酸鹽緩沖液，緩慢加熱，完成缺損蛋白修復。向獲得的標本中加入TNF-α兔抗人單克隆抗體，工作濃度為1 ∶100，抗原熱修復，4 ℃過夜，加TNF-α兔抗人二抗，常溫孵育10 min，利用二氨基聯苯胺(diaminobenzidine，DAB)顯色后進行蘇木素染色，利用中性樹膠常規封固；免疫組織化學染色下隨機取10個非重疊視野，計算細胞陽性比例[8]。

1.2.2臨床資料 收集患者性別、年齡，腫瘤直徑、病理類型、分化程度，腫瘤分期及淋巴結轉移等臨床資料。

1.3 統計學分析

采用SPSS 18.0軟件處理，計數資料采用n(%)表示，組間比較采用χ2檢驗；采用Logistic分析TNF-α表達的影響因素。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 TNF-α表達

免疫組織化學顯示，癌組織中TNF-α陽性主要分布在細胞的胞質，少數包膜亦有表達，呈棕黃色/棕褐色，細胞核內無表達；癌旁組織中TNF-α陽性細胞表達較少或無表達(圖1)。口腔鱗癌組織TNF-α陽性表達率57.69%(45/78)高于癌旁組織和12.82%(10/78)，差異有統計學意義(χ2=6.942，P=0.025)。

癌旁組織 癌組織圖1 口腔鱗癌患者癌組織及癌旁組織中TNF-α表達(免疫組織化學，×100)Fig.1 Expression of TNF-α in different tissues in oral squamous cell carcinoma(immunochemistry，×100)

2.2 TNF-α表達與臨床病理特征

口腔鱗癌患者癌組織中TNF-α的陽性表達與腫瘤直徑、分化程度、分期及淋巴結轉移差異有統計學意義(P<0.05)，與性別、年齡及病理類型差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 不同臨床病理特征患者組織中TNF-α表達Tab.1 Comparison of TNF-α expression in tissues of patients with different clinicopathological features

2.3 Logistic回歸分析口腔鱗癌組織TNF-α表達的影響因素

以口腔鱗癌組織中TNF-α陽性表達作為因變量，以腫瘤直徑、分化程度及淋巴結轉移的因素作為自變量，進行多因素Logistic分析。結果表明，腫瘤直徑、分化程度、分期及淋巴結轉移是口腔鱗癌組織TNF-α陽性表達的影響因素(P<0.05)。見表2。

表2 口腔鱗癌組織中TNF-α陽性表達的多因素Logistic分析Tab.2 Multivariate Logistic analysis of positive expression of TNF-α in oral squamous cell carcinoma

3 討論

口腔鱗癌是臨床上常見的惡性腫瘤，其發生、發展多涉及腫瘤細胞自身與宿主之間錯綜復雜的關系，亦受到多種細胞因子調控[9-10]。臨床研究表明，心血管的形成在細胞組織、組織結構及功能上存在明顯的差異性，能直接參與疾病的發展、發展[11-12]。TNF-α屬于是一種Ⅱ型跨膜蛋白，通常由活化的單核巨噬細胞分泌產生，并形成多多功能細胞因子，廣泛存在于人體組織中[13-14]。臨床研究表明，TNF-α能直接參與口腔鱗癌的發生[15-16]。本研究中，口腔鱗癌組織TNF-α陽性表達率高于癌旁組織，差異有統計學意義(P<0.05)。免疫組化顯示：TNF-α陽性主要分布在細胞的胞質，少數包膜亦有表達，且呈棕黃色/棕褐色，細胞核內無表達；癌旁組織中TNF-α陽性細胞表達較少或無表達，說明TNF-α在口腔鱗癌組織中呈高表達，在疾病的發生、發展中發揮了重要的作用。

既往研究表明，TNF-α主要由巨噬細胞產生，是一種多肽細胞因子，能誘導腫瘤細胞的凋亡，發揮炎癥介質、免疫調節作用[17]。同時，TNF-α亦具有腫瘤細胞毒作用，其表達水平能反映疾病嚴重程度[18]。國內學者進行的研究結果表明，TNF-α在在前列腺癌、腎癌及卵巢癌等腫瘤組織中呈高表達，能通過多種機制參與其發生、發展。臨床研究表明，在惡性腫瘤組織中浸潤的淋巴細胞中TNF-α亦呈高表達，能發揮拮抗外源性TNF-α的細胞毒性，是腫瘤組織產生內源性TNF-α生物學特點、外源性TNF-α的重要差異原因[19]。同時，內源性TNF-α具有拮抗由白細胞產生的外源性TNF-α的細胞毒性，發揮抵抗化療等作用[20]。TNF-α在口腔鱗癌轉移、生長中機體機制如下：(1)TNF-α與腫瘤免疫有關。對于口腔鱗癌患者持續的應激反應能引起機體免疫紊亂，造成TNF-α水平持續升高，從而能抑制IgG、IgM的產生，影響機體T淋巴細胞的分化；(2)TNF-α能直接參與腫瘤血管的生成，能從宿主中向腫瘤細胞提供更多的氧與營養物質，為腫瘤的生長創造條件；(3)TNF-α能與腫瘤中的巨噬細胞相互作用，從而能產生更多的TNF-α并形成惡性循環[21]。從本研究結果看出，口腔癌組織中TNF-α檢驗值與口腔癌患者的腫瘤直徑、分化程度、腫瘤分期、淋巴結轉移等有關，進一步說明TNF-α在口腔鱗癌組織中呈高表達，其表達水平能反映患者疾病嚴重程度。因此，加強口腔鱗癌患者TNF-α動態監測可幫助患者確診，指導臨床治療，亦可評估患者預后。

綜上所述，TNF-α檢驗值在口腔鱗癌組織中呈高表達，其表達水平能反映患者疾病嚴重程度，能指導臨床治療，有望成為口腔鱗癌治療新靶點。