線葉龍膽(Gentiana lawrencei var. farreri)ITS序列雜合性與遺傳分化分析

付鵬程， 林清銀， 孫姍姍

(洛陽師范學院 生命科學學院， 洛陽 471934)

龍膽屬植物是典型的高山植物，以青藏高原及其周邊地區為分布中心和分化中心[1-2]。線葉龍膽(Gentianalawrenceivar.farreriT. N. Ho)是龍膽屬多枝組中的常見物種，多年生草本，是青藏高原特有植物，也是高山草甸的重要組成部分。線葉龍膽可用于醫藥，具有較高的藥用價值；同時其花色素雅，形態優美，也具有較高的園藝觀賞價值。已有的進化研究表明，線葉龍膽的葉綠體基因組存在ndh基因缺失[3]；基于葉綠體片段和微衛星標記的群體研究表明，該物種目前的遺傳格局受到了冰川運動及環境氣候變化的顯著影響[4]。

ITS序列(Nuclear ribosomal internal transcribed spacer)是核糖體RNA 18S、5.8S和25S的間區序列，分別為ITS1和ITS2，其中ITS1-5.8S-ITS2序列是進化生物學中常用的分子標記之一[5-6]。相較于葉綠體或線粒體的單親遺傳，ITS序列位于細胞核，遵循雙親遺傳規律，在揭示種間雜交等復雜進化過程中具有重要作用。由于ITS位點的通用引物在不同物種中均易于擴增，且其基因間區的序列變異較大，是重要的barcoding標記之一[5]，能較好地反映種間系統發育關系。ITS序列在物種居群內往往也存在較豐富的變異，可用于群體遺傳學研究[7-8]。然而，由于ITS序列常存在雜合現象，經PCR擴增后直接Sanger法測序的結果常出現套峰或亂峰，導致無法準確獲取部分物種的序列。

本研究以線葉龍膽的7個居群為研究對象，通過對部分個體進行基因克隆與測序，探討線葉龍膽ITS序列的基本特征及其遺傳分化，研究結果將為龍膽屬植物的進化研究提供參考。……