豬小腸黏膜下層脫細胞基質中I、Ⅲ型膠原檢測方法研究

張 揚， 陳 毅， 高建萍， 夏磊磊， 李勇超， 王清石， 張貴鋒， 趙 博

(1. 北京博輝瑞進生物科技有限公司， 北京 100026； 2. 中國科學院過程工程研究所 生化工程國家重點實驗室， 北京 100190； 3. 河南科技學院 生命科技學院， 新鄉 453003)

豬小腸黏膜下層脫細胞基質(SIS, Small intestinal submucosa)是豬小腸黏膜下層去除免疫原性物質后的生物材料，可誘導細胞黏附生長、促進組織再生，廣泛用于各種軟組織缺損的修復[1-3]。膠原是動物組織細胞外基質(ECM)的重要結構蛋白，約占其總蛋白的25%～30%，主要存在于皮膚、骨、肌腱及結締組織等部位[4-6]，其自身具有良好的生物相容性和低免疫原性[7]，在高溫、酸、堿或酶等條件下可被降解，性能也隨之改變。大量研究表明，膠原作為敷料可抑制潰瘍、調節T細胞抗炎因子釋放以改善關節炎并增加骨密度，通過增強NK細胞活性提高免疫力，被用作止血、藥物緩釋以及組織工程和化妝品等材料[7-10]。

目前確認的膠原類型有27種，其中Ⅰ、III型是ECM中兩種主要膠原，其比例與組織修復質量相關[11-13]。文獻報道的膠原類型鑒別和定量方法主要包括基于溴化氫降解的多肽分析法，基于光度分析的羥脯氨酸(Hyp)比色法、高效液相色譜法(HPLC)、免疫學檢測法及基于化學染色的天狼星紅法等[4,14-15]。目前最常用的方法是羥脯氨酸比色法，但不同來源或組織的膠原中所含Hyp的比例也不同，而且過程繁瑣，樣品水解程度對結果影響較大，故該方法準確性不高[16]；免疫學檢測法以膠原作為抗原，利用其和抗體結合顯色來檢測膠原含量，該方法靈敏度高、特異性強，但重復性較差且不適用于組織樣本[17]；……