肝靶向肽修飾的人內皮抑制素rES-CSP融合蛋白可溶性表達及活性鑒定

余田甜， 張晶晶， 許敏華， 金小寶， 汪 潔， 馬 艷

(廣東藥科大學 生命科學與生物制藥學院 廣東省生物活性藥物研究重點實驗室， 廣州 510006)

內皮抑制素(Endostatin，ES)是膠原蛋白 XVIII C 末端一個分子質量為20 ku的內源性血管抑制因子[1-2]，能夠抑制血管內皮細胞增殖、遷移和黏附，以及一些腫瘤細胞增殖和遷移等，具有廣譜抗腫瘤作用[3-5]。臨床試驗發現，ES半衰期短，治療腫瘤所需劑量較大，又需持續給藥[6]。另外，ES在體內各組織均有分布，對正常生理狀態下的新生血管形成有潛在的毒副作用[7]。CSP I-plus是瘧原蟲環子孢子蛋白(Circumsporozoite protein，CSP)N端保守I區；包含保守序列 KLKQP 和硫酸肝素結合序列，是瘧原蟲子孢子吸附與入侵肝細胞的關鍵[8]，具有肝靶向性。本課題組提出將CSP I-plus與重組人內皮抑制素(Recombinant human endostatin, Endostar, 商品名：恩度)進行融合制備融合蛋白rES-CSP，用于靶向治療肝細胞癌。

本課題組已成功構建rES-CSP表達載體，并誘導表達出融合蛋白rES-CSP。實驗證實該蛋白能夠抑制人臍靜脈內皮細胞的增殖、遷移、小管形成，抑制雞胚尿囊膜模型新生血管的形成，同時能與肝癌細胞HepG2靶向結合[9]；裸鼠肝癌模型實驗表明rES-CSP對肝癌新生血管生成和腫瘤生長具有抑制作用，對裸鼠主要臟器沒有明顯影響[10]。但此前研究中，誘導表達獲得rES-CSP是以包涵體形式存在。包涵體是蛋白質凝聚形成的非常致密顆粒，沒有活性，需要經過復雜的變性和復性才能獲得有活性的目的蛋白，然而在此過程中容易導致目的蛋白降解而失活[11-12]。本文通過優化誘導表達條件，實現融合蛋白rES-CSP可溶性表達，以便于獲得大量的有活性rES-CSP，使該融合蛋白作為藥用蛋白大規模生產成為可能。……