柏子養心丸中輔料煉蜜的質量研究

趙雯，袁銘銘，許妍，吳燕紅，任琦，萬林春

江西省藥品檢驗檢測研究院，國家藥品監督管理局中成藥質量評價重點實驗室，江西省藥品與醫療器械質量工程技術研究中心，南昌 330029

柏子養心丸由柏子仁、黨參、炙黃芪、川芎等十三味藥經粉碎后加煉蜜制成，具有補氣、養血、安神的功效［1］。煉蜜是蜜丸的重要輔料［2,3］，是蜂蜜經高溫煉制而成［4］。近年來，蜂蜜產量供不應求，摻假現象較為嚴重［5-10］，如使用轉化糖漿、麥芽糖漿、果葡萄糖漿等代替蜂蜜［11,12］。為進一步控制柏子養心丸輔料煉蜜質量，本課題照《中國藥典》（2015 年版）一部“蜂蜜”［13］，對柏子養心丸輔料煉蜜的質量進行了研究［14］，對煉蜜中的果糖、葡萄糖和麥芽糖指標成分進行了控制，經方法學考察，認為本法簡單方便，可作為柏子養心丸中輔料煉蜜的質量評價方法。

1 儀器與試藥

Agilent 1260 系列（全自動）高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；Alltech3300 蒸發光散射檢測器（美國奧泰公司）；Sartorius BT 25S 型十萬分之一電子天平（德國賽多利斯公司）；KQ-500E 型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

D-果糖對照品（批號：100231-201305，含量：99.4%）、D-無水葡萄糖對照品（批號：110833-201205，含量：99.5%）、麥芽糖對照品（批號：100287-201102，含量：94.4%）均購自中國食品藥品檢定研究院；乙腈為SIGMA-ALDRICH 公司色譜純，水為娃哈哈飲用純凈水，其他試劑均為分析純；柏子養心丸（2015 年國家評價性抽驗樣品，企業A～Z）。

2 方法與結果

2.1 對照品溶液的制備精密稱取D-果糖、D-無水葡萄糖對照品適量，加40%乙腈分別制成含D-果 糖2.694 0 mg/mL、D-無水葡萄糖2.681 0 mg/mL 的對照品溶液。精密稱取麥芽糖對照品適量，加40%乙腈制成含麥芽糖0.231 2 mg/mL 的對照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備取柏子養心丸樣品約0.50 g（水蜜丸研碎；小蜜丸或大蜜丸剪碎），精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入水25 mL，密塞，稱定重量，加熱超聲處理（功率：500 W，頻率：40 kHz，溫度：55 ℃）1 h，放冷，再稱定重量，用水補足減失的重量，搖勻，再加入乙腈15 mL，稱定重量，超聲處理（功率：500 W，頻率：40 kHz）30 min，再稱定重量，用40%乙腈補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.3 色譜條件Prevail Carbohydrate ES 色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-水（75∶25）；流速1.0 mL/min；柱溫30 ℃。蒸發光散射檢測器漂移管溫度60 ℃；載氣N2流速：1.8 L/min。對照品及樣品色譜圖見圖1。

2.4 線性關系考察取“2.1”項下果糖、葡萄糖混合對照品溶液0.5、1、2、5、10 μL，麥芽糖對照品溶液1、2、5、10、30 μL，按“2.3”所述色譜條件進樣分析，橫坐標是對照品進樣量的對數，縱坐標是峰面積積分值的對數，進行標準曲線的繪制。所得到的線性回歸方程及相關系數見表1。

表1 3種糖類成分的線性關系結果

2.5 精密度試驗精密吸取按“2.2”項下方法制備的供試品溶液5 μL，在“2.3”所述色譜條件下連續進樣6 次，結果測得D-果糖、D-無水葡萄糖、麥芽糖峰面積均值分別為551.4、866.4、1 194.2，RSD 分別為1.2 %、1.1 %和1.0 %，表明方法精密度良好。

2.6 重復性試驗精密稱取同一批柏子養心丸樣品6份，分別按“2.2”項下方法制備供試品溶液，在“2.3”所述色譜條件下進行分析測定，D-果糖、D-無水葡萄糖和麥芽糖含量的平均值分別為30.143 0 mg/g、54.400 4 mg/g 和75.489 4 mg/g。

2.7 穩定性試驗精密吸取同一供試品溶液5 μL，分別于0、6、12、18、24 h 進樣測定，結果D-果糖、D-無水葡萄糖、麥芽糖峰面積均值分別為555.0、869.4、1 204.6，RSD 分別為1.0%、0.9%和0.7%，表明供試品溶液在24 h 內穩定。

2.8 加樣回收率試驗取上述已測含量的柏子養心丸樣品約0.25 g，共6份，精密稱定，分別精密加入果糖、葡萄糖、麥芽糖對照品適量，分別按“2.2”項下方法制備供試品溶液，精密吸取5 μL 注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，計算平均加樣回收率，果糖、葡萄糖、麥芽糖的回收率分別為94.4%、95.9%、92.3%，RSD 分別為1.1%、1.3%、0.8%，表明方法準確度符合要求。

2.9 專屬性實驗取缺煉蜜的陰性樣品，按“2.2”項下方法制得陰性樣品溶液，按“2.3”條件進行測定，結果顯示處方中蔗糖含量較高，故未將蔗糖結果納入考察范圍，另外結果顯示陰性樣品中含有少量的果糖、葡萄糖，這是因為柏子養心丸處方中炙黃芪、制甘草采用了蜂蜜進行炮制，但由于其結果僅占0.1%，含量相對較小，故可以忽略。

2.10 樣品測定按所擬訂的含量測定方法，測定26 家生產企業的26 批柏子養心丸樣品中3 種糖類成分的含量，結果見表2。

表2 樣品測定的結果

3 討論

3.1 提取方式的選擇考察了加熱超聲提取法、加熱回流法兩種方法對果糖、葡萄糖和麥芽糖含量測定的影響，結果含量相似，故選擇加熱超聲提取法；加熱超聲溫度考察了35 ℃、45 ℃、55 ℃、65 ℃，結果表明55 ℃時超聲提取效果最好，故加熱超聲溫度定為55 ℃；第二步提取溶劑考察了水、甲醇和乙腈，結果表明，乙腈提取效率最高，故選擇乙腈作為提取溶劑；提取時間考察了15、30、60、90 min，結果表明60 min 可提取完全，故提取時間定為60 min。

3.2 限度的確定《中國藥典》（2015 年版）一部“蜂蜜”標準規定，蜂蜜中果糖與葡萄糖的總量不得少于60%，蔗糖、麥芽糖不得過5%，蜂蜜中果糖與葡萄糖含量比值不得小于1.0［13,15］。按照柏子養心丸處方量（水蜜丸：煉蜜比例20%；小蜜丸、大蜜丸：煉蜜比例為50%）折算，水蜜丸中果糖與葡萄糖含量之和應大于12%，麥芽糖不得過1%，二者比值大于12；小蜜丸、大蜜丸中果糖與葡萄糖含量之和應大于30%，麥芽糖不得過2.5%，二者比值大于12。考慮到蜂蜜在煉制過程中，水分發生變化，因而在限度制定時規定了果糖與葡萄糖含量的同時，果糖、葡萄糖與麥芽糖比值也進行了規定。因此將柏子養心丸限度暫定為果糖、葡糖糖的總量與麥芽糖含量比值應大于12.0（用于檢查蜂蜜蜂中是否摻有轉化糖漿、麥芽糖漿等）；每1 g 水蜜丸中果糖和葡糖糖的總量不得少于120 mg；每1 g小蜜丸、大蜜丸中果糖和葡糖糖的總量不得少于300 mg（用于檢查制丸用煉蜜而不是采用糖漿等其他黏合劑）。通過上述限度規定，較好地控制了煉蜜摻假行為。

3.3 測定結果分析對結果進行綜合分析發現：1 批柏子養心丸果糖、葡糖糖的總量未達到限度，表明其未按規定量進行投料，另外4 批柏子養心丸中果糖、葡糖糖的總量與麥芽糖的量比值小于12，表明這些樣品中煉蜜中摻有其他糖漿，存在摻偽現象，見表3。

表3 柏子養心丸不合格的批次

3.4 小結本研究建立了柏子養心丸輔料煉蜜中果糖、葡萄糖、麥芽糖的含量測定方法，操作簡單方便，測定結果準確，可以作為柏子養心丸中輔料煉蜜的質量控制方法。