雙甲酸涂靶法對絲狀真菌鑒定的臨床應(yīng)用評價*

袁凱旋，趙越，凌勇，葉龍，胡雪姣，侯鐵英

(廣東省人民醫(yī)院/廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院檢驗科，廣州 510080)

絲狀真菌的臨床感染趨勢不斷上升，給臨床抗感染治療帶來嚴峻挑戰(zhàn)。絲狀真菌的分離與鑒定當(dāng)前仍是臨床微生物學(xué)檢驗中的一大難點。傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)鑒定方法受限于技術(shù)人員的鑒別能力，菌株缺乏特征性結(jié)構(gòu)等，易導(dǎo)致鑒定錯誤。基因測序操作繁瑣且對實驗要求較高，耗時久，成本高，亦不適合常規(guī)開展。而基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(matrix-assisted laser desorption/lonization time of light mass spectrometry,MALDI-TOF MS)技術(shù)可實現(xiàn)絲狀真菌鑒定，其推薦乙腈-甲酸提取法存在菌株前處理操作繁瑣，耗時較長的弊端。研究報道，建立雙甲酸夾心法并經(jīng)布魯克microflex LT MALDI-TOF質(zhì)譜系統(tǒng)進行絲狀真菌鑒定，獲得較高的鑒定率[1]。本研究擬探討雙甲酸涂靶法在Vitek MS全自動微生物質(zhì)譜檢測系統(tǒng)中對絲狀真菌的鑒定能力，以優(yōu)化Vitek MS系統(tǒng)對絲狀真菌的前處理鑒定流程。

1 材料與方法

1.1菌株來源 收集2019年2月至2020年5月廣東省人民醫(yī)院臨床分離絲狀真菌212株，其中曲霉菌屬175株、非曲霉菌屬37株(包括鐮刀菌屬12株、毛霉目5株、彎孢霉屬4株、青霉屬3株、其他絲狀真菌13株)。分離自痰標本79株、創(chuàng)面分泌物39株、耳道分泌物37株、肺泡灌洗液34株、組織標本15株、無菌體液標本8株。

1.2主要儀器與試劑 PCR擴增儀(美國Bio-Rad公司)，Vitek MS質(zhì)譜儀(IVD v3.0，法國生物梅里埃公司)，光學(xué)顯微鏡(日本Olympus公司)，ABI 3730 xl測序儀(美國賽默飛世爾公司)；Vitek MS一次性靶板、CHCA基質(zhì)、25%甲酸、大腸埃希菌ATCC 8739(法國生物梅里埃公司)，乙腈(天津科密歐公司)，馬鈴薯葡萄……