靶向超聲造影在體定量評(píng)價(jià)大鼠移植后卵巢新生血管

王國(guó)棟，張 姍，狄 娜，穆玉明*

(1.新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院心臟超聲診斷科，新疆 烏魯木齊 830000；2.中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院超聲科，廣東 廣州 510120)

卵巢移植技術(shù)為卵巢功能衰退患者提供了一種保存生育能力的有效方法[1-2]。移植后卵巢部位血管生成速度和密度直接影響卵巢存活和功能恢復(fù)[3]，但長(zhǎng)期以來(lái)缺乏在體評(píng)價(jià)移植后卵巢新生血管狀態(tài)的無(wú)創(chuàng)方法[4]。LI等[5]發(fā)現(xiàn)，通過(guò)連接腫瘤血管特異性配體，以靶向造影劑進(jìn)行超聲造影，可檢測(cè)腫瘤新生血管。抗苗勒管激素(anti-Mullerian canal hormone, AMH)僅由卵巢顆粒細(xì)胞特異性分泌,其他組織少有表達(dá)[6-7]。本研究嘗試通過(guò)制備具有卵巢組織靶向性的AMH-靶向納米泡(AMH-targeting nanobubble, AMH-NB)，實(shí)現(xiàn)在體無(wú)創(chuàng)評(píng)價(jià)大鼠移植后卵巢新生血管。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及模型制備 選取SD雌性大鼠10只，鼠齡7～8周，體質(zhì)量200～220 g，由新疆醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，倫理審查批準(zhǔn)編號(hào)(SYSU-LACUC-2019-B463)。以3%戊巴比妥鈉腹腔注射(45 mg/kg體質(zhì)量)麻醉動(dòng)物，摘除兩側(cè)卵巢后，立即將一側(cè)卵巢皮質(zhì)移植到右側(cè)腹股溝區(qū)皮下，之后荷包縫合皮膚，建立大鼠自體卵巢移植模型[8]。將手術(shù)次日記為移植后第1天。

1.2 材料與設(shè)備 造影劑聲諾維(SonoVue，Bracco公司)，AMH抗體(北京Bioss公司)，免疫組織化學(xué)一抗CD34(Abcom公司)，二抗即用型山羊抗兔二步法試劑盒，熒光二抗為AF-488，紅細(xì)胞計(jì)數(shù)板。納米泡粒徑檢測(cè)儀ZETASIZER Nano-ZS90，GE-vivid 7超聲診斷儀，高頻探頭i13L，頻率14 MHz。

1.3 制備非靶向微泡(non-targeting nanobubble, N-NB)和AMH-NB 采用“薄膜水化法”制備N-NB[9]，以“親和素-生物素”橋接法構(gòu)建AMH-NB[10]。采用共聚焦顯微鏡檢測(cè)AMH是否與納米泡連接。

1.4 超聲造影 術(shù)后……