絲氨酸/精氨酸蛋白特異性激酶- 2在胃癌組織中的表達情況及臨床意義△

王健，趙海劍，徐東燕，李菁妍，張曉雨#

徐州醫科大學附屬淮安醫院/淮安市第二人民醫院1胃腸外科，2消化內科，3病理科，江蘇淮安223002

胃癌是中國第二大常見惡性腫瘤，約占全球惡性腫瘤發病率的40%，2018年全球胃癌新增病例超過100萬例，死亡人數約為78.3萬，仍是全球第五大常見惡性腫瘤及第三大惡性腫瘤死亡病種，嚴重威脅人類健康[1-4]。已在多種腫瘤中發現高表達的絲氨酸/精氨酸蛋白特異性激酶-2（serine/arginine protein-specific kinase 2，SRPK2）與腫瘤的進展、轉移密切相關。但是，關于SRPK2與胃癌關系的研究仍較少。本研究分析了SRPK2在胃癌中的表達情況，并對其與胃癌患者臨床特征及預后的關系進行探討，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年1月至2018年1月徐州醫科大學附屬淮安醫院收治的胃癌患者。納入標準：①經病理學檢查確診為胃癌；②術前均未接受放療、化療、內分泌治療和靶向治療等相關治療；③均接受了根治性切除手術；④臨床資料完整。排除標準：①合并其他惡性腫瘤；②術后隨訪失聯。根據納入和排除標準，本研究共納入85例胃癌患者。其中，男45例，女40例；年齡為42～86歲，中位年齡為71歲。參照美國癌癥聯合委員會（American Joint Committee on Cancer，AJCC）頒布的關于胃癌的TNM分期標準[5]：I期8例，Ⅱ期20例，Ⅲ期54例，Ⅳ期3例；分化程度：中高分化59例，低分化26例；無淋巴結轉移23例，有淋巴結轉移62例；腫瘤直徑：＞5 cm者37例，≤5 cm者48例；腫瘤部位：賁門及胃底15例，胃體32例，胃竇38例。收集胃癌患者經手術切除的胃癌組織及相應的癌旁組織標本各85例，癌旁組織取自距胃癌邊緣＞5 cm的組織，且均經病理檢查診斷為正常胃黏膜組織。

1.2 免疫組織化學染色方法

采用免疫組化染色法檢測胃癌組織及癌旁組織中SRPK2的表達情況。收集患者的胃癌及癌旁組織標本，10%甲醛溶液固定，常規石蠟包埋。將石蠟標本切成厚約4 μm的切片后脫蠟、水化，3%過氧化氫去離子水封閉過氧化酶15 min，蒸餾水浸泡3 min，枸櫞酸緩沖液中熱修復抗原，磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）浸泡3 min。加入鼠抗人SRPK2抗體（稀釋濃度1∶200），冰箱4℃過夜，37℃復溫，PBS浸泡3 min，30 min后沖洗并滴加兔抗鼠二抗，37℃孵育30 min，二氨基聯苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹脂封片，顯微鏡下觀察。以PBS代替一抗作為陰性對照，以已知陽性切片為陽性對照。

1.3 免疫組織化學染色結果判定

所有免疫組織化學染色結果均由兩位經驗豐富的病理醫師采用雙盲法閱片。SRPK2陽性表達呈棕黃色顆粒，定位于細胞核。每張切片于200倍光學顯微鏡鏡下隨機選取5個視野，每個視野計數100個細胞，對陽性染色細胞數量和腫瘤細胞總數進行計算。根據每個視野中陽性細胞所占百分比和染色強度進行評分，采用半定量積分法判斷其表達情況。依據陽性細胞所占百分比評分：≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，≥51%為3分。依據染色強度評分：無色計0分，淡黃色計1分，棕黃色計2分，棕褐色計3分。陽性細胞所占百分比和染色強度評分相加，0～1分為陰性表達（-），2分為弱陽性表達（+），3～4分為中等陽性表達（++），5～6分為強陽性表達（+++）。

1.4 隨訪

采用電話或門診的方式對所有患者于術后3個月開始進行隨訪，隨訪截止日期為2018年9月31日。術后2年內，每2～3個月隨訪1次；術后2～5年內，每半年隨訪1次；術后5年以上者，每年隨訪1次。統計所有患者的生存情況。生存時間按月記錄，生存時間定義為從患者手術當日至隨訪截止或患者死亡的時間。失訪定義為非腫瘤原因死亡病例及截止點仍生存病例按統計分析要求列為截尾數據處理。

1.5 統計學方法

采用SPSS 25.0軟件對數據進行統計分析。計數資料以例數和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。采用Kaplan-Meier法進行生存分析并作生存曲線，組間比較采用Log-rank檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同組織中SRPK 2的表達情況

免疫組化染色結果顯示，胃癌組織中SRPK2的陽性表達率為64.7%（55/85），明顯高于癌旁組織中的21.2%（18/85），差異有統計學意義（χ2=32.867，P＜0.01）。（圖1）

圖1 胃癌患者胃癌組織中SRPK 2的表達情況（免疫組織化學染色，×400）

2.2 不同臨床特征胃癌患者胃癌組織中SRPK 2的表達情況

浸潤深度（根據T分期）為T3～4期、有淋巴結轉移、腫瘤直徑＞5 cm、TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期胃癌患者胃癌組織中SRPK2的陽性表達率均高于浸潤深度（根據T分期）為T1～2期、無淋巴結轉移、腫瘤直徑≤5 cm、TNM分期為I～Ⅱ期的胃癌患者，差異均有統計學意義（P＜0.05）；不同性別、年齡、腫瘤分化程度、腫瘤部位胃癌患者胃癌組織中SRPK2的陽性表達率比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。（表1）

表1 不同臨床特征胃癌患者胃癌組織中SRPK 2的陽性表達情況（n=85）

2.3 SRPK 2表達與胃癌患者術后 5年總生存率的關系

兩組患者均獲得有效隨訪，隨訪時間為7～67個月，死亡患者44例。截至隨訪結束，SRPK2陽性表達的胃癌患者55例，死亡36例；SRPK2陰性表達的胃癌患者30例，死亡8例。Kaplan-Meier生存曲線顯示，SRPK2陰性表達的胃癌術后患者的5年生存情況優于SRPK2陽性表達的胃癌患者，差異有統計學意義（χ2=5.668，P=0.017）。（圖2）

圖2 SRPK 2陽性表達（n=55）和SRPK 2陰性表達（n=30）胃癌術后患者的總生存曲線

3 討論

SRPK2屬于絲氨酸/精氨酸蛋白特異性激酶（serine/arginine protein-specific kinase，SRPK）家族成員，在人類的大腦、睪丸中呈高表達，在心臟、骨骼肌中呈中等強度表達。SRPK主要通過調節絲氨酸/精氨酸蛋白的磷酸化反應與mRNA前體特異序列結合，有助于拼接因子識別正確拼接點，同時可通過調節RNA剪接因子調控細胞周期，從而發揮一系列生理功能。近年來，在腫瘤中發現了mRNA前體剪接的異常現象，而SRPK2作為mRNA前體剪接的主要調控因子，在其中發揮了重要作用[6]。

有研究發現，在白血病中高表達的SRPK2通過調節細胞周期蛋白A1（cyclin-A1，CCNA1）從而促進腫瘤細胞的增殖[7]。在實體瘤中亦發現SRPK2基因表達的失衡與惡性腫瘤的發生密切相關。既往研究發現SRPK2在非小細胞肺癌、肝細胞癌、頭頸部鱗狀細胞癌中均呈高表達[8-10]。此外，Wang等[11]發現SRPK2可促進胰腺癌的發生和進展。亦有研究證實，SRPK2在結直腸癌中呈高表達，并通過與鼠類肉瘤濾過性毒菌致癌性同源體B1（v-raf murine sarcoma viral oncogene homolog B1，BRAF）形成復合體，激活胞外信號調節激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK）通路，從而促進結直腸癌細胞的增殖和遷移[12]。Zhou等[13]通過進行前列腺癌體外實驗發現，促進SRPK2的表達可促進前列腺癌細胞的遷移和侵襲；前列腺癌組織中的SRPK2呈高表達，且與腫瘤的進展和轉移有關。本研究采用免疫組織化學染色法檢測了85例胃癌患者的胃癌組織及癌旁組織中SRPK2的陽性表達情況，結果顯示，胃癌組織中SRPK2的陽性表達率明顯高于癌旁組織（P＜0.01），與上述研究結果一致，提示SRPK2與胃癌的發生有一定的關心。本研究進一步對85例胃癌患者的臨床特征進行分析，結果顯示，SRPK2的陽性表達與胃癌患者的年齡、性別、分化程度、腫瘤部位可能無關，而腫瘤直徑越大、腫瘤浸潤深度越深、出現淋巴結轉移、TNM分期越晚，SRPK2在胃癌患者胃癌組織中的陽性表達率越高。提示SRPK2不僅與胃癌的發生有關，還可能對胃癌的進展、轉移具有促進作用。術后隨訪結果顯示，陽性表達的胃癌患者的5年生存率低于SRPK2陰性表達的胃癌患者，預后較差。分析其原因可能與SRPK2對胃癌的進展、轉移具有促進作用有關，導致SRPK2陽性胃癌患者的病情進展更快，生存期更短，預后更差。

綜上所述，胃癌患者的胃癌組織中SRPK2的陽性表達率較高，可能與胃癌的發生、發展有一定關系，SRPK2陽性表達的胃癌患者的預后較差。SRPK2可能成為胃癌臨床診療及預后評估的生物學標志物。