羊布魯氏菌病不同血清學檢測方法的比較

武水珍

羊布魯氏菌病又被稱為布病，它是由布魯斯桿菌感染引發的一種發熱、流產、睪丸炎癥、關節腫脹為主要癥狀的人畜共患傳染性疾病，該種傳染性疾病除了危害羊之外，還可以危害多種反芻動物，同時也會危害到人類的身體健康。為了更好的防范該種傳染性疾病的傳播流行，都需要做好妥善的疫苗免疫接種工作和疫情的檢測篩查。在羊布魯氏桿菌病診斷過程中常用的檢測方法多種多樣，主要包括了虎紅平板凝集試驗、試管凝集試驗、酶聯免疫吸附試驗到等，不同的試驗有著不同的操作標準，同時檢測的精確性也存在一定差異。為了進一步研究不同學生檢測方法對布魯氏桿菌病的檢測效果，從流行過羊布魯氏桿菌病的2個規模化養殖場當中采集新鮮血液200份，進行血清學檢測，現將具體內容介紹如下：

一、試驗材料與方法

1、試驗材料獲取

本次研究從流行過羊布魯氏桿菌病的兩個規模化養殖場中采集新鮮血液200份，將其放置在4度的溫箱當中進行保存。在檢測過程中主要涉及到的試劑為虎紅平板凝集抗原、虎紅平板凝集試驗陽性血清、羊布魯氏桿菌病抗體檢測試劑盒（EILSA）、布魯氏桿菌試管凝集抗原、布魯氏桿菌標準陽性血清、標準陰性血清、綿羊紅細胞。上述材料均從正規途徑采集。在試驗過程中所涉及到的儀器主要包括了生化培養箱、酶標儀、全自動酶標洗板機、單多道移液器等。

2、試驗方法

在試驗操作過程中，首先對采集到的血液進行血清分離得到的血清進行編號處理?；⒓t平板凝集試驗、補體結合試驗、試管凝集試驗的檢測和判定按照布魯氏桿菌診斷技術標準進行。羊布魯氏桿菌抗體檢測試驗，按照抗體檢測試劑盒中的相關說明進行嚴格的操作，并進行陽性陰性判斷。

二、結果分析

1、不同血清檢測方法200份血清樣品當中的陽性率

在進行血清學檢測過程中，根據布魯斯桿菌病防治技術規范的相關規定要求，對于普通平板檢測為陽性，但試管凝集檢測為陰性的血清，應該在試驗結束30天之后，再次采集該頭患病羊的新鮮血液進行一次檢測，如果虎紅平板凝集試驗的檢測結果再次為陽性，則可以判斷該血清為陽性，否則判斷為陰性。在檢測之前將200份的血清進行統一的編號處理，然后選擇使用上述三種血清檢測方法，分別對血清進行檢測，陽性率和陽性數如表1所示。結合表1數據可以看出，虎紅平板凝集試驗的陽性數量最多，陽性率高達27.5%，其次是血清凝集試驗，最低的是EILSA試驗，陽性率分別為24.00%、21.50%。詳細情況如表1所示。

表1 不同血清檢測方法200份血清樣品當中的陽性率

2、EILSA試驗與虎紅平板凝集試驗、血清凝集試驗對比

將養殖場的虎紅平板凝集試驗血清凝集試驗分別與EILSA試驗結果進行比較分析，進一步分析不同檢測方法的假陽與特異性和敏感性。以EILSA試驗為檢測標準，虎紅平板試驗的特異性最低，血清凝集試驗的特異性達到了90%以上。由此可以看出，以EILSA試驗為檢測標準，不管是虎紅平板凝集試驗還是血清凝集試驗，都存在一定程度的假陽和假陰現象，其中虎紅平板凝集試驗的特異性最低假陽率最高。在今后的布魯氏桿菌病血清檢測過程中，有條件的養殖場推薦使用EILSA試驗，同時還可以將虎紅平板凝集試驗和血清凝集試驗聯合使用，這樣能夠進一步提高診斷的精確性。

三、討論

我國羊布魯氏桿菌病在診斷過程中主要依據國家相關標準，首先使用虎紅平板凝集試驗或者全乳沉淀試驗，對血液或者乳汁進行初次的篩選，篩選出陽性病例之后，然后再使用血清凝結試驗進行復檢。虎紅平板凝集試驗具有敏感性，相對較高，操作簡便，耗時短，成本低的特點，但是在實際檢測工作開展過程中，很容易受到血清嚴重溶血交叉反應或者抗原反應超過4分鐘纖維素的凝集塊影響而出現假陽現象。本次檢測結果可以發現，虎紅平板凝集試驗的陽性檢出率均要高于血清凝集試驗和EILSA試驗。因此在使用虎紅平板凝集試驗篩選出陽性血清之后還需要應用其他的方法對陽性血型進行再一次的驗證與確診。試管凝集試驗檢測免疫球蛋白敏感性相對較高，它可以作為羊布魯氏桿菌病早期發病的診斷依據。另外該種診斷方法也可以用于人畜布魯氏桿菌病免疫接種后，機體最早血清學抗體的檢測，該種方法的優點是判定相對較為容易，具有很高的診斷價值。但是由于血凝試驗在操作過程中相對比較復雜，整個試驗過程相對較長，在進行結果判定過程中很容易受到相關人員的主觀因素影響而出現較大的誤差。如果單獨應用該種檢測方法對羊布魯氏桿菌病進行診斷，很容易造成誤診或者漏診。因此該種診斷方法并不是對所有感染動物抗體水平都具有很明顯的診斷意義。本次研究結果表明，使用血清凝結試驗檢測陽布魯氏桿菌病人抗體，陽性抗體的檢出率要低于虎紅平板凝結試驗，并且在檢測過程中存在可疑的現象，需要經過30天之后再去采集血液進行再次檢測，可疑山羊只有全部為陽性，才能夠判定為布魯氏桿菌病感染。由于血清凝集試驗的檢測時間相對較長，需要配合其他檢測手段，才能夠提高檢測的工作效率和檢測的靈敏性。EILSA試驗，是一種特異性強的檢測手段，能夠在大多數哺乳動物布魯氏桿菌病檢測當中得到很好的推廣應用。應用該種檢測手段出現假陽或者假陰的概率相對較低，一次性能夠完成大量樣本的檢測。該種檢測方法不僅應用于血清檢測，還在乳汁檢測方面有著較高的應用價值。通過應用該種檢測方法能夠很好的確診虎紅平板凝集試驗和血清凝集試驗檢測過程中存在的假陽或者假陰的病例，并且操作較為簡單，靈敏度較高，特異性較強，在今后羊布魯氏桿菌病診斷過程中值得進一步推廣應用。

（作者單位：810099青海省海南州動物疫病預防控制中心）