胸腔積液結核感染T細胞斑點試驗對結核性胸膜炎的診斷分析

陳傳偉，楊蘭增，趙會芬

(永城市疾病預防控制中心 檢驗科，河南 商丘 476600)

結核性胸膜炎是結核病中僅次于肺結核的常見疾病，在胸腔積液的病因中占55%左右，主要是由于胸腔內有結核桿菌或其代謝產物進入后，引起胸膜炎癥反應[1]。結核性胸膜炎發病早期并無特異性癥狀，需結合癥狀、體征、影像學檢查等進行診斷，傳統實驗室檢測方法無法準確進行診斷，而胸膜活檢因創傷性較大，并未被廣泛應用，因此對該病的診斷較困難[2]。結核感染T細胞斑點試驗(T-cell spot of tuberculosis test，T-SPOT.TB)是新型細胞學檢測技術，可通過檢測患者全血或胸腔積液中的特異性致敏T細胞，對該病進行診斷。鑒于此，本研究探討胸腔積液T-SPOT.TB對結核性胸膜炎的診斷價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料回顧性分析2018年1月至2020年1月永城市疾病預防控制中心72例結核性胸膜炎患者的臨床資料，將其納入觀察組，將同期53例非結核性胸膜炎患者納入對照組。觀察組男43例，女29例，年齡18～72歲，平均(49.68±5.73)歲，病程1～8周，平均(3.72±2.49)周，其中單純性結核性胸膜炎58例，合并陳舊性肺結核8例，合并免疫系統疾病6例。對照組男32例，女21例，年齡19～73歲，平均(49.73±5.78)歲，病程1.5～8周，平均(3.75±2.54)周，其中心源性胸腔積液17例，惡性胸腔積液12例，炎性胸膜炎18例，風濕性疾病3例，其他3例。兩組一般資料比較，差異無統計學意義(均P>0.05)，有可比性。

1.2 入選標準(1)納入標準：①觀察組患者符合結核性胸膜炎診斷標準[3]，且經臨床癥狀、體征、經皮胸膜穿刺活檢、診斷性治療確診；②對照組患者存在胸腔積液，并隨訪1～3個月排除結核病；③人類免疫缺陷病毒陰性。(2)排除標準：①接受過抗結核治療；②嚴重心腎功能異常；③意識障礙或精神疾病；④存在穿刺禁忌證。

1.3 檢測方法(1)采用全自動生化儀(普朗，規格：PUZS-600A/B，京械注準20182220295)檢測胸腔積液腺苷脫氨酶(adenosine deaminase，ADA)。(2)采用熒光染色法檢測胸腔積液結核桿菌DNA(tuberculosis DNA，TB-DNA)，按試劑盒(成都博奧晶芯生物科技有限公司，國械注準20173401339)說明書進行檢測。(3)胸腔積液T-SPOT.TB。將30 mL胸腔積液經培養液處理后，將淋巴細胞用人淋巴細胞分離液進行分離，加入0.5 mL AIM-V培養液稀釋至每毫升含2.5×106個淋巴細胞，每份標本4個孔分別為AIM-V培養基、A抗原(早期分泌靶抗原6)、B抗原(培養濾液蛋白)及植物血凝素，將100 μL細胞終溶液加入每個孔，培養箱(體積分數為5%的二氧化碳，37 ℃)孵育16～18 h，次日洗板并加入50 μL酶標抗體工作液，孵育1 h(2～7 ℃)，再加入50 μL底物工作液，使用顯色劑及酶標二抗顯色6～7 min(室溫)，沖洗干燥后，使用顯微鏡(南京江南永新光學有限公司，蘇械注準20172221144)對斑點數進行計數。

1.4 判定標準依照說明書進行判定。(1)ADA陽性：胸腔積液ADA≥45 U·L-1。(2)TB-DNA陽性：3張TB-DNA涂片中任2張找到抗酸桿菌。(3)T-SPOT.TB陽性：第4孔斑點數在25個以上則試驗有效，第2孔、第3孔之和在6個以上判定為陽性[4]。

1.5 統計學方法采用SPSS 25.0統計軟件處理數據。計數資料以百分數和例數表示，組間比較采用χ2檢驗。計算胸腔積液ADA、TB-DNA、T-SPOT.TB診斷結核性胸膜炎的效能，采用一致性Kappa檢驗，以K值評價不同檢測結果的一致性，K值≥0.74即一致性高，0.40～<0.74即一致性一般，<0.40即一致性差。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 診斷結果及性能胸腔積液ADA診斷符合率為69.60%(87/125)，TB-DNA診斷符合率為68.80%(86/125)，T-SPOT.TB診斷符合率為85.60%(107/125)。T-SPOT.TB檢測的一致性最高(Kappa=0.742，P<0.05)。見表1。

表1 3種檢查方法陽性檢出率比較[n(%)]

2.2 診斷效能3種檢測方法組間比較，差異有統計學意義(P<0.05)，胸腔積液T-SPOT.TB檢測靈敏度、特異度、準確度高于ADA、TB-DNA(P<0.05)。見表2。

表2 3種檢測方法的診斷效能比較(%)

3 討論

我國結核桿菌感染率在全球僅次于印度，居于第2位，而結核桿菌引起的結核性胸膜炎較常見，但起病隱匿，易造成漏診、誤診[5]。臨床上診斷結核性胸膜炎常采用胸膜穿刺活檢進行結核菌培養試驗或病理檢查。由于細菌培養需要消耗較長時間，不利于早期診斷該病；病理檢查陰性率較高，存在一定的局限性。近年來，通過TB實驗室檢查診斷結核性胸膜炎越來越受到關注，其中ADA、TB-DNA較常見。ADA為特異性核酸代謝酶，可影響機體免疫活性，而結核性胸膜炎患者胸腔積液中的免疫細胞受刺激后，大量促進淋巴細胞釋放，而輔助性T細胞增多可使ADA水平升高[6]。雖然ADA檢測靈敏度、特異度均較高，但研究發現，胸腔積液為細菌感染性或風濕性時，ADA檢測水平也較高[7]。胸腔積液TB-DNA是通過對結核桿菌DNA的數量進行聚合酶鏈式反應技術檢測，判定是否存在結核桿菌感染，特異性極高，但其敏感性較差，考慮主要是由于胸腔積液中TB數量少所致[8]。

本研究結果顯示，T-SPOT.TB檢測的一致性最高，胸腔積液T-SPOT.TB檢測的靈敏度、特異度、準確度高于ADA、TB-DNA，說明T-SPOT.TB檢測胸腔積液對結核性胸膜炎靈敏度、準確度及一致性較高，具有重要的診斷價值。結核性胸膜炎感染后，記憶性T細胞可長期存在于胸腔積液中，當該病的特異性抗原與記憶性T細胞再次相遇時，可使其迅速增殖活化，釋放γ-干擾素。T-SPOT.TB是通過檢測IFN-γ分泌情況，分析TB特異性抗原是否對單核細胞產生刺激，以判斷是否存在結核桿菌感染[9]。A抗原、B抗原可使胸腔積液中效應T細胞受到刺激后釋放，使斑點數增加。該檢測技術具有快速、高效的優勢，檢測全程1～2 d即可完成；刺激源選擇致病性TB抗原，具有較高特異性，并且能夠對1/100萬的細胞因子進行檢測，具有高靈敏度[10-11]。結核性胸膜炎患者接受治療后，TB被消滅，胸腔積液中的T淋巴細胞消失，因此該檢測方式還能夠對患者體內TB是否被消滅進行評估，從而評估治療效果[12]。

綜上所述，胸腔積液T-SPOT.TB檢測對結核性胸膜炎具有較高的靈敏度、準確度，具有重要的臨床診斷價值。