云南楚雄地區急性腦梗死患者CYP2C19基因多態性

李文武，呂秀娟

（大理大學第四附屬醫院神經內一科，云南楚雄 675000）

氯吡格雷能有效地預防動脈粥樣硬化患者發生缺血性腦血管事件，是缺血性腦血管病二級預防的重要藥物之一。目前研究發現，氯吡格雷抗血小板藥效存在個體差異，部分患者經過標準的氯吡格雷治療后，仍不能避免缺血性腦血管病事件的發生，實驗室檢測提示血小板聚集功能并未得到有效抑制，稱之為氯吡格雷抵抗〔1〕。目前研究認為CYP450同工酶家族中的關鍵酶CYP2C19參與了氯吡格雷代謝，其基因多態性是決定氯吡格雷抵抗的重要因素〔2〕。現已知CYP2C19等位基因超過25個（*1～*25）呈高度多態性，其中CYP2C19*1，c.681 G＞A和*1，c.636 G＞A為編碼正常活性酶的等位基因；CYP2C19*2，c.681 G＞A和CYP2C19*3，c.636 G＞A為功能缺失等位基因；CYP2C19*17，c.-806 C＞T為增強酶活性的等位基因〔3-4〕。研究發現CYP2C19*1、*2、*3等位基因為亞洲人群最常見的突變點〔5〕。經相關文獻檢索，云南楚雄地區急性腦梗死患者CYP2C19基因多態性未見報道，因此本文對云南楚雄地區急性腦梗死患者采用PCR方法檢測CYP2C19*1，CYP2C19*2，CYP2C19*3基因多態性，探討云南楚雄地區急性腦梗死患者CYP2C19基因多態性分布，為臨床上氯吡格雷個體化用藥提供依據。

1 資料與方法

1.1一般資料所有病例為2017年3月至2019年3月大理大學第四附屬醫院神經內一科收治的楚雄地區急性腦梗死患者，共251例，年齡18～75歲，平均年齡（56±2.8）歲；男性157例，女性94例，所有患者均符合中華醫學會神經病學分會等制定的中國急性缺血性腦卒中診治指南中的診斷標準〔6〕。

1.2方法

1.2.1 標本采集 用乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-2Na）抗凝采血管抽取患者空腹靜脈血3 mL用于基因分型。

1.2.2 DNA提取 按照DNA提取試劑盒（上海凡濟生物科技有限公司）說明書提取患者DNA。

1.2.3 基因分析CYP2C19基因位點檢測采用美國Life Tech公司Taqman探針檢測試劑盒進行分型檢測，檢測流程參照試劑盒說明書提示進行檢測；在美國Life Tech生產的ABI 9700 PCR儀上進行PCR反應（試劑盒由美國Life Tech生產），反應流程參照試劑盒說明書提示進行，PCR反應條件：95℃ 10 min；92 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，60個循環；72℃10 min；反應完成后使用美國ABI 9700 HT型熒光定量PCR儀進行數據掃描。

2 結果

2.1結果判斷檢測結果使用Gene Mapper IDV 4.1自動分析軟件進行判讀基因，最終獲得*1∕*1，*1∕*2，*1∕*3，*2∕*2，*2∕*3，*3∕*3六種基因型。

2.2CYP2C19等位基因、檢測位點、基因型檢測結果檢測結果見圖1。CYP2C19*1，c.681 G＞A，GG純合突變和*1，c.636 G＞A，GG純合突變；CYP2C19*2，c.681 G＞A，GG純合突變；CYP2C19*2，c.681 G＞A，GA雜合突變；CYP2C19*3，c.636 G＞A，GG純合突變；CYP2C19*3，c.636 G＞A，GA雜合突變。

2.3云南楚雄地區急性腦梗死患者CYP2C19檢測CYP2C19*1∕*1基因（GG∕GG）為快代謝型，114例（45.42%）；CYP2C19*1∕*2基因（GG∕GA），*1∕*3基因（GG∕GA），*2∕*2基因（AA∕GG）為中間代謝型，分別為95例（37.85%），13例（5.18%），4例（1.59%）；CYP2C19*2∕*3基因（GA∕GA），*3∕*3 基因（GG∕AA）為慢代謝型，分別為23例（9.16%），2例（0.80%）。

3 討論

腦梗死是目前嚴重危害人類健康的主要疾病之一，其高發病率、高致殘率及高死亡率，給家庭和社會帶來嚴重的經濟負擔〔7〕。中國急性缺血性腦卒中診治指南2018指出，氯吡格雷可作為非心源性缺血性卒中患者二級預防單用或聯合用藥的選擇〔6〕。作為細胞色素P450一種重要的藥物代謝酶CYP2C19是影響氯吡格雷在體內代謝活化的關鍵酶，其基因多態性決定了該酶活性在個體間的差異性，并影響氯吡格雷藥物活性產物的濃度及在體內抗血小板聚集作用〔8〕。CYP2C19基因多態性檢測指導氯吡格雷用藥個體化已成為目前主要研究的熱點，因此檢測急性腦梗死患者CYP2C19*1、CYP2C19*2、CYP2C19*3基因來預測藥物療效，選擇合適的抗血小板藥物及劑量進行個體化治療是目前發展的重要趨勢。筆者對云南楚雄地區251例急性腦梗死患者進行CYP2C19基因多態性檢測，其結果為CYP2C19*1∕*1基因為快代謝型，114例（45.42%）；CYP2C19*1∕*2，*1∕*3，*2∕*2基因為中間代謝型，分別為95例（37.85%），13例（5.18%），4例（1.59%）；CYP2Y19*2∕*3，*3∕*3基因為慢代謝型，分別為23例（9.16%），2例（0.80%）。與文獻〔9-11〕報道相比稍偏高，與文獻〔12-14〕報道相比稍偏低，其可能原因為樣本數量偏少、地區差異性、種族基因異質性以及尚未檢測的等位基因突變等因素有關，有待于今后進一步研究。

CYP2C19基因多態性影響藥物的藥代動力學，快代謝型不降低氯吡格雷抗血小板療效，可常規劑量服用；中間代謝型可使氯吡格雷藥效降低，患者在治療過程中應增加氯吡格雷藥物劑量或者改用其他抗血小板藥物以達到抑制血小板聚集治療目的；慢代謝型使藥物療效明顯降低或者出現嚴重的藥物不良反應，建議患者改用其他抗血小板藥物。因此，云南楚雄地區急性腦梗死快代謝型患者可常規劑量服用氯吡格雷；中間代謝型患者在治療過程中應增加氯吡格雷藥物劑量或者改用其他抗血小板藥物；慢代謝型患者存在抗血小板聚集治療效果不佳而再發腦梗死風險的建議改用其他抗血小板藥物。我們研究發現云南楚雄地區急性腦梗死患者CYP2C19基因多態性分布以快代謝型*1∕*1（GG∕GG），中間代謝型*1∕*2（GG∕GA），慢代謝型*2∕*3（GA∕GA）為主，為臨床上氯吡格雷個體化用藥提供依據。同時也表明CYP2C19等位基因突變可能是云南楚雄地區急性腦梗死患者氯吡格雷抵抗的獨立危險因素之一，臨床上應引起重視。

綜上所述，云南楚雄地區急性腦梗死患者CYP2C19基因多態性分布以快代謝型*1∕*1（GG∕GG），中間代謝型*1∕*2（GG∕GA），慢代謝型*2∕*3（GA∕GA）為主，同時為臨床上氯吡格雷個體化用藥提供依據。急性腦梗死人群CYP2C19基因多態性的檢測為不同基因型人群服用氯吡格雷的安全性以及為實現個體化抗血小板聚集治療提供基因組學的依據，使氯吡格雷在臨床上應用更安全、有效、經濟。