丹皮炭飲片質量標準研究*

蘇 靜，胡云飛，劉蘇情

(1 國家中藥材產品質量監督檢驗中心，安徽 亳州 236800；2 亳州學院，安徽 亳州 236800；3 亳州市產品質量監督檢驗所，安徽 亳州 236800)

丹皮炭為毛茛科植物牡丹PacoeoniaSuffttuticosaAndr.的干燥根皮的炮制加工品[1]。選擇栽培3～5年的牡丹，于秋季或春初采挖，洗凈泥土，除去細根和泥沙，剝取根皮，曬干或刮去粗皮，除去木心，曬干。前者習稱連丹皮，后者習稱刮丹皮。取凈牡丹皮片(連丹皮、刮丹皮均可)，置熱鍋內，用中火炒至外部焦黑色，內部黃褐色，噴淋清水少許，滅盡火星，取出，及時攤晾，涼透。牡丹皮在《中國藥典》2015年版內收載，而其炮制品丹皮炭在《中國藥典》2015年版未收載[2]。目前對于丹皮炭質量標準研究報道多不全面，且專屬性不強[3-5]。本文擬通過性狀觀察法、顯微觀察法、TLC法、UPLC法對丹皮炭的鑒別、浸出物及含量測定等進行分析，進而制定方法可行、結果可靠的丹皮炭飲片質量標準。

1 材料和試劑

1.1 儀 器

XP205電子天平，瑞士mettler-toledo公司；S180H型超聲波清洗機，德國Elma公司；FD115型熱風循環烘箱，德國Binder公司；SX2-4-10G型箱式電阻爐，上海躍進醫療器械有限公司；DM750顯微鏡，德國Leica公司；Linomat 5半自動點樣儀，瑞士CAMAG公司；TLC Visualizer薄層色譜數碼成像系統，瑞士CAMAG公司。

1.2 試 藥

表1 丹皮炭樣品來源

分別從成都荷花池、安徽亳州、阜陽、銅陵等地收集共10批丹皮炭中藥飲片，均經安徽中醫藥大學周建理教授鑒定為毛茛科植物牡丹PacoeoniaSuffttuticosaAndr.的干燥根皮的炒制加工品，見表1。丹皮酚對照品(批號110708-201908，中國食品藥品檢定研究院，純度99.8%)，丙酮(色譜純)，水(超純水)，所用其他試劑均為分析純。

2 方法和結果

2.1 性 狀

本品為圓形或半圓形的薄片，表面黑褐色，內部褐色。質堅脆。氣芳香，味苦、澀。如圖1所示。

圖1 丹皮炭飲片性狀圖

2.2 顯微鑒別

本品粉末深黑色。淀粉粒數量眾多，單粒類圓形或多角形，直徑3～16 μm，臍點點狀、裂縫狀或飛鳥狀；復粒由2～6分粒組成?？梢姴菟徕}簇晶，直徑9～45 μm。有時含晶細胞連接，簇晶排列成行，或一個細胞含數個簇晶。結果見圖2。

圖2 丹皮炭橫切面顯微圖

2.3 TLC鑒別-丹皮酚法

取丹皮酚對照品(批號110708-200506，中國食品藥品檢定研究院，純度99.8%)，加丙酮制成每1 mL含2 mg的溶液，作為對照品溶液S。展開槽：5 cm×20 cm×10 cm，薄層板：硅膠G板(TLC Silica gel 60)(規格：20 cm×10 cm來源：Merck批號：HX68412026)展開劑：環己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(4∶1∶0.1)點樣量10 μL，展距：8.6 cm，檢視方式：取出，晾干，噴以2%香草醛的10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

圖3 丹皮炭薄層圖

2.4 浸出物測定

按照醇溶性浸出物測定法(中國藥典2015年版通則2201)項下的熱浸法測定。結果：10批樣品的浸出物為10.4%～14.7%。

表2 丹皮炭浸出物結果

2.5 含量測定

2.5.1 色譜條件

色譜柱：UPLC BEH C18色譜柱(2.1 mm×100 mm，1.7 μm，美國Waters公司)；流動相為0.1%醋酸(A)-乙腈(B)梯度洗脫(0～10 min，5%～30% B；10～12 min，30%～50% B；12.1～15.0 min，30% B；15.0～15.8 min，5% B)，流速0.4 mL/min，檢測波長254 nm，進樣量2 μL，柱溫30 ℃。

2.5.2 對照品溶液的制備

精密稱取丹皮酚約2.5 mg，置同一10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。

2.5.3 供試品溶液的制備

精密稱取取1.0 g粉末(過四號篩)，精密加甲醇50 mL，溫度60 ℃下超聲處理(功率400 W，頻率33 kHz)30 min，放冷，補重，過濾，續濾液即得。

2.5.4 線性方程繪制

精密量取混合對照品溶液1、2、3、4、5 mL置50 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。各取2 μL注入液相色譜儀，記錄峰面積。以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。丹皮酚回歸方程為Y=41.015X-14.234，r=0.997。結果：丹皮酚在濃度5～25 μg/mL范圍圍內線性關系良好。

2.5.5 精密度實驗

取標樣(濃度約為20 μg/mL)2 μL重復進樣，計算峰面積RSD為0.6%，結果表明精密度良好。

2.5.6 穩定性情況試驗

取供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、12、18 h進樣，考察其峰面積RSD為1.1%，表明供試品溶液在18 h內穩定。

2.5.7 重復性實驗

取供試品溶液，制備6份供試品溶液，分別測定含量結果，其RSD為1.7%，表明該方法重復性良好。

2.5.8 加標回收率考察

精密稱取已知含量樣品6份，每份0.5 g。分別加入丹皮酚對照品適量，制備檢測。丹皮酚平均回收率為96.1%，RSD為1.71%。

2.5.9 含量測定結果

表3 丹皮炭含量測定結果

圖4 HPLC圖譜

3 結 論

中藥療效取決于其化學成分(群)的特征，中藥質量依賴于其質量標準的科學性[6-9]。通過對10批丹皮炭的質量評價研究，初步擬定，浸出物不得少于9.0%。對10批樣品均作了粉末顯微特征研究，本品粉末深黑色。淀粉粒數量眾多，單粒類圓形或多角形，直徑3～16 μm，臍點點狀、裂縫狀或飛鳥狀；復粒由2～6分粒組成?？梢姴菟徕}簇晶，直徑9～45 μm。有時含晶細胞連接，簇晶排列成行，或一個細胞含數個簇晶。從而標準中把粉末的顯微特征作為主要鑒別點。

TLC條件選擇在環己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(4∶1∶0.1)，點樣量10 μL，噴以2%香草醛的10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱的條件下，樣品分離度高，斑點清晰。

HPLC實驗探討，提取條件考察了溶劑、溫度等影響因素，確定了提取條件以及色譜分離條件，初步擬定丹皮酚不得少于0.06%。但由于不同樣品隨著炮制程度及樣品來源的不同。加之丹皮炭炮制后相較于牡丹皮藥性已發生顯著變化，更加偏于止血，因而是否作為質控標準值得進一步探索，但為丹皮炭的質量評價提供了依據[10-11]。

本次研究丹皮炭飲片質量評價包括性狀鑒別、顯微鑒別、薄層鑒別、浸出物及丹皮酚的含量測定等內容，建立方法簡單、可行，重復性好，可使用于控制丹皮炭飲片質量。