正交試驗法優選完帶湯顆粒的提取工藝研究

王浩驊

【關鍵詞】完帶湯顆粒;提取;成型;工藝

【中圖分類號】R271.1 【文獻標識碼】B 【文章編號】1002-8714（2020）06-0004-02

完帶湯已入選國家中醫藥管理局公布的第一批100種古代經典名方目錄，是清代名醫傅山在《傅青主女科》中為治療白帶所設的名方，“婦人有終年累月下流白物，如涕如唾，不能禁止，甚則臭穢者，所謂白帶也。……治法宜大補脾胃之氣，稍佐以舒肝之品，使風木不閉塞于地中，則地氣自升騰于天上，脾氣健而濕氣消，自無白帶之患矣。方用完帶湯”[1]。組方為白術一兩（土炒），山藥一兩（炒），人參二錢，白芍五錢（酒炒），車前子三錢（酒炒），蒼術三錢（制），甘草一錢，陳皮五分，黑芥穗五分，柴胡六分，水煎服[2]。據現代學者文獻考證，清代1兩約合如今的37.3g[3-5]，每處方折合一日飲片為132.8g，日服用劑量較大，宜制成顆粒劑。至今未見有關完帶湯顆粒工藝方面的報道，本實驗對完帶湯顆粒的提取和成型進行了優化，現報道如下。

1 儀器與材料

1.1 儀器與試劑

HS-337電子分析天平（邢臺慧思科技有限公司），CAV313C電子分析天平（上海皆準儀器設備有限公司），島津LC-20高效液相色譜儀（日本島津），UC-120D超聲波清洗器（寧波市雙嘉儀器有限公司），DHG型鼓風干燥箱（鄭州宏華儀器有限公司）;N-1300Sh-W旋轉蒸發儀（上海助乘實業有限公司）。

乙腈、磷酸為色譜純，水為重蒸水，其余試劑為分析純。

1.2 試藥

芍藥苷對照品（20mg，110736-201842，純度為97.4%）購自中國食品藥品檢定研究院，白術等藥材飲片均購自濟南市建聯中藥有限公司。

2 方法與結果

2.1 提取樣品的制備

按處方比例分別稱取白術（土炒）224g，山藥（炒）224g，人參45g，白芍（酒炒）112g，車前子（酒炒）67g，蒼術（制）67，甘草22g，陳皮13g，黑芥穗13g，柴胡16g，共9份，每份共計802g，加水浸泡40min，提取，各提取液過濾后合并，精密吸取5mL，水浴蒸干，用70%甲醇轉移至10mL量瓶中，超聲處理30分鐘，冷卻至室溫，用70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2 干膏率的測定

分別精密量取各提取液70mL，置已干燥至恒重的蒸發皿中，水浴蒸至近干后100℃干燥至恒重，放至室溫，稱重，計算。

2.3 芍藥苷含量測定

2.3.1 色譜條件與系統適應性試驗? 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈-0.1%磷酸（15：85）為流動相，檢測波長230nm[6]。

2.3.2 對照品溶液制備? 取取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含60?g的溶液，即得。

2.3.3 供試品溶液制備? 取裝量差異項下的本品，研細，取約5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇100mL，按“2.1”項下制備方法，自“水浴蒸干”起制備，即得。

2.3.4 陰性樣品溶液制備? 按完帶湯顆粒提取方法制備不含白芍的陰性樣品，方法同“2.1”，即得。

2.3.5 線性與范圍? 精密稱取芍藥苷對照品10.28mg（純度97.4%）置50mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，作為對照品貯備液;分別精密量取貯備液2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL、6.0mL、7.0mL置10mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為芍藥苷對照品線性溶液。分別吸取上述對照品線性溶液注入高效液相色譜儀，并記錄色譜圖，以濃度C為橫坐標，峰面積A為縱坐標，繪制線性圖，回歸方程為A=281835C+289201，R2=0.9995;結果芍藥苷對照品在40.1～140.2?g/mL濃度范圍內，峰面積與濃度線性關系良好。

2.3.6 精密度試驗? 取芍藥苷對照品溶液（65.69?g/mL）注入高效液相色譜儀，連續進樣6次，峰面積RSD為1.56%，精密度良好。

2.3.7 重復性試驗? 取同一批完帶湯顆粒樣品6份，按“2.3.3”項制備，重復測定6次，結果芍藥苷含量的RSD為0.43%，含量測定方法重復性良好。

2.3.8 穩定性試驗? 取同一完帶湯顆粒供試品溶液分別于0h、2h、4h、6h、8h、12h和18h分別進樣，記錄峰面積，結果芍藥苷峰面積RSD為0.52%，完帶湯顆粒供試品溶液在18h內穩定。

2.4 水提部分正交試驗[7-10]

2.4.1 水提工藝正交試驗

按“2.1”項下分別稱取完帶湯顆粒處方中白術（土炒）等飲片共9份，每份共計802g，參考相關文獻，按表1進行正交試驗，以干膏率和提取液中芍藥苷含量為指標進行優選，因素水平等見下表。

表1? ?因素水平表

表2? ?正交實驗設計與結果

表3? ?出干膏率方差分析

表4? ?芍藥苷含量方差分析

從直觀及方差分析可知，以提取液中出干膏率為指標時因素A2與A3、C2與C3無區別，可任意選擇，B3>B2，應選B3;以提取液中芍藥苷含量為指標時A3>A3>A1，B3>B2與B1，C3與C2>C1，C3與C2無區別，可任意選擇;從可操作和生產成本等方面綜合考慮，最終確定提取工藝A3B3C2（即處方中飲片加8倍量水提取3次，每次50分鐘）。

2.4.2 提取驗證試驗

按“2.1”項下分別稱取白術（土炒）等飲片3份，每份共計802g，分別按A3B3C2提取，測定干膏率和芍藥苷含量，對提取工藝進行驗證。

表5? ?提取工藝驗證試驗結果表

結果表明，完帶湯的提取工藝（加8倍量水提取3次，每次50分鐘）穩定。

2.5 成型工藝研究

2.5.1 潤濕劑的選擇

本品以水提取，日服劑量處方出干膏較多，在預試驗中稠膏制粒時，軟材粘性較大，不易制粒，需加入較多的賦形劑，故以干膏粉與賦形劑混合后制粒，分別按完帶湯顆粒處方稱取白術（土炒）飲片共5份，每份共計802g，加8倍量水提取3次，每次50分鐘，合并濾液，濾過，濾液濃縮成清膏后干燥，粉碎成細粉，平均分成5份與輔料混勻，以不同濃度的乙醇為潤濕劑制軟材，尼龍篩網制粒，75℃干燥，整粒，結果見下表。

表6? ?潤濕劑選擇結果

由上表可知，干膏粉與賦形劑混勻后以50%乙醇作潤濕劑時，顆粒成型率高，可操作性強，故選擇以50%乙醇作潤濕劑。

2.5.2 賦形劑的選擇：

分別稱取白術（土炒）飲片共5份，每份共計802g（6日劑量），制備5份完帶湯顆粒干膏粉樣品，混勻后平均分成5份，與輔料混勻，制50%乙醇制粒，干燥，整粒。以顆粒的成型率、制粒可操作性為評價指標，結果見下表。

表7? ?賦形劑選擇結果

結果：以可溶性淀粉：糊精=4：5為賦形劑時，與干膏粉混合后制粒，可操作性強，顆粒成型率最佳。

2.6 顆粒中試工藝驗證

按完帶湯顆粒處方稱取白術（土炒）、山藥（炒）、人參、白芍（酒炒）、車前子（酒炒）、蒼術（制）、甘草、陳皮、黑芥穗和柴胡按優選的工藝進行了3批中試驗證，結果見表8。

表8? ?完帶湯顆粒中試表

由上表可知，經3批中試驗證，完帶湯顆粒的生產工藝穩定。

3 討論

3.1 根據古代經典名方中藥復方制劑簡化注冊審批管理規定第六條：古代經典名方制備方法除成型工藝外，其余制備方法應當與古代醫籍記載基本一致，宜用水煎提取[11]，完帶湯顆粒以水煎煮、濃縮，干燥粉碎成細粉后制成顆粒劑，既有經典名方的特色也保證了完帶湯顆粒的療效。

3.2 完帶湯每日飲片劑量約133g，原方只寫明水煎服，經試驗，藥材加水提取后得干膏率約22.5%，出干膏較多（每劑約出干膏30g），日服用3次，每次服用10g干膏，按顆粒劑的單劑量包裝為15g，每次服用2袋g，為減少日服用量故將清膏干燥后與可溶性淀粉、糊精等濕法制成無糖顆粒。

3.3 參照優選的顆粒劑制備工藝，按完帶湯顆粒每日處方量的750倍投料，進行了3批中試生產，清膏濃縮干燥后粉碎成細粉與輔料混勻后，以50%乙醇制軟材，16目尼龍篩制粒，75℃減壓干燥，結果完帶湯顆粒劑的生產工藝穩定，適用于生產。

參考文獻

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