高糖微環境下小鼠晶狀體上皮細胞中賴氨酸乙酰化的蛋白質組學分析

韓笑，閻啟昌，王欣玲

（中國醫科大學附屬第四醫院眼科，遼寧省晶狀體學重點實驗室，沈陽 110005）

研究［1-4］顯示，翻譯后修飾 （post-translational modification，PTM） 是探索疾病發病機制和防治靶點的重要研究對象。其中，乙酰化在生物體的炎癥反應［5］、腫瘤發展［6］、糖尿病進程［7］中起著關鍵作用［8］。乙酰化可以影響蛋白質的各種生理過程 （細胞周期、線粒體生物學過程、染色質重塑和核轉運等）［9］。

研究［10-12］顯示，白內障是導致失明的主要原因之一。糖尿病性白內障是1型糖尿病患者視力障礙的主要原因［13］。已有研究［14］顯示2型糖尿病患者白內障發病率比正常人顯著增加。可見高濃度血糖是促進白內障發生發展的重要誘因。但糖尿病性白內障的發病機制尚未明確。目前，糖尿病性白內障發病機制和防治靶點研究主要圍繞長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）［15］、GLUT葡萄糖 轉運蛋白［16］和白蘆藜醇［17］等方面開展，但糖尿病性白內障的表觀遺傳調控和蛋白質組學改變尚不清楚。已有研究［18-20］證實PTM在糖尿病性白內障的發病過程中起重要作用。本研究利用穩定同位素標記氨基酸 （stable isotope labeling by amino acids，SILAC） 處理晶狀體上皮細胞，采用泛乙酰化抗體富集，進行高分辨率液相色譜-串聯質譜 （liquid chromatographymass spectro/mass spectro，LC-MS/MS） 分析和生物信息學數據挖掘。

1 材料與方法

1.1 SILAC標記和高糖處理

小鼠晶狀體上皮細胞系α-TN4 （中國醫科大學附屬第四醫院晶狀體學重點實驗室提供）在37 ℃、95%空氣和5%CO2環境下使用含有10%胎牛血清、100 U/mL青霉素、100 μg/mL鏈霉素和100 μg/mL潮霉素的DMEM培養基 （葡萄糖5.5 mmol/L） 培養。SILACTM蛋白定量試劑盒 （美國Thermo Fisher Scientific公司） 中重標同位素賴氨酸 （L-13C-Lysine/L-13C615N4-Arginine，13C-Lysine） 標記正常細胞；……