利用熒光蛋白示蹤腦微血管內皮細胞微絲的動態變化

杜書嵩，趙偉東

（中國醫科大學1.生命科學學院發育細胞生物學教研室，教育部醫學細胞生物學重點實驗室暨衛健委細胞生物學重點實驗室，沈陽 110122；2.附屬第一醫院肛腸外科，沈陽 110001）

肌動蛋白是真核生物細胞骨架微絲的主要組成成分，肌動蛋白單體形式稱為球狀肌動蛋白，能夠聚合成肌動蛋白絲，進而組裝形成微絲。肌動蛋白參與多種細胞的生命活動，包括維持細胞形狀、細胞運動、細胞分裂、吞噬和細胞內物質運輸等［1］。為了對細胞中的肌動蛋白進行觀察，目前研究人員常用能夠與肌動蛋白絲結合的熒光標記的鬼筆環肽對固定后的細胞進行染色［2］，這樣能夠在熒光顯微鏡下觀察細胞內肌動蛋白絲的分布和變化。有研究［3］報道，細胞在固定過程中其肌動蛋白結構會受到一定程度的破壞，因此鬼筆環肽染色方法不一定能準確顯示肌動蛋白絲的變化。因此，很多學者嘗試利用活細胞模型對肌動蛋白進行研究。為了在活細胞中分析肌動蛋白絲的動態變化，有學者通過向細胞內注射微量熒光標記的鬼筆環肽對細胞中的肌動蛋白絲進行標記，也有學者將編碼肌動蛋白和綠色熒光蛋白 （green fluorescent protein，GFP） 融合基因的載體轉染至細胞內，以實現在活細胞中對肌動蛋白的動態變化進行檢測，然而上述方法對活細胞中肌動蛋白的動力學也有一定影響［4］。因此，目前亟需既能對活細胞中的肌動蛋白進行實時觀察，又不影響肌動蛋白功能的方法。……